Procedimiento de eliminación de pesticidas de extractos de ginkgo biloba y extractos obtenibles por dicho procedimiento.

Procedimiento de eliminación de pesticidas de extractos de Ginkgo biloba,

que comprende someter un extracto obtenido por procedimientos convencionales a las siguientes etapas:

a) extracción líquido-líquido del extracto con un disolvente inmiscible en agua seleccionado de ésteres, hidrocarburos clorados, mezclas de hidrocarburos y alcoholes, cetonas y mezclas de cetonas y alcoholes, para obtener una fracción de polaridad media que contiene terpenos de ginkgo y pesticidas no eliminables con hexano y una fracción de polaridad alta que contiene glicósidos de flavona de ginkgo;

b) cristalización de terpenos de ginkgo en mezclas de agua y alcoholes C1-C3 de la fracción que contiene terpenos de ginkgo y pesticidas no eliminables con hexano obtenidos en la etapa a) para proporcionar un intermedio con un contenido en ginkgolide no menor del 50% p/p;

c) cristalización en agua o en una mezcla de agua y alcoholes C1-C3 de la disolución residual obtenida en la etapa b) para proporcionar un intermedio con un contenido en bilobalide no menor del 50% p/p;

d) mezcla de la fracción que contiene glicósidos de flavona de ginkgo obtenida en la etapa a) con el intermedio de terpeno de ginkgo e intermedio de bilobalide obtenidos en las etapas b) y c).

Procedimiento de eliminación de pesticidas de extractos de ginkgo biloba y extractos obtenibles por dicho procedimiento La presente invención se refiere a un procedimiento para eliminar pesticidas de extractos de Ginkgo biloba y los extractos obtenibles por dicho procedimiento.

Técnica anterior

Los extractos de hoja de Ginkgo biloba se han usado desde hace tiempo en la medicina tradicional china y en numerosos países occidentales debido a las múltiples propiedades farmacológicas atribuidas a los componentes de dichos extractos (vasodilatación, inmunoestimulación, propiedades antioxidantes y antiagregantes) .

Los procedimientos para la preparación de extractos de hoja de Ginkgo biloba se desvelan en los documentos US 5700468, EP 360 556, EP 431 535 y JP 09110713.

Los pesticidas tales como organofosfatos, cuya toxicidad está bien documentada, se han empleado en el cultivo de las plantas usadas para producir dichos extractos, especialmente en el pasado. Aunque muchas autoridades en salud y en agricultura han prohibido o restringido el uso de dichos pesticidas, no siempre es fácil establecer el origen de material de la planta e incluso en países donde está regulado el uso de pesticidas, es imposible descartar el uso ilegal o inapropiado de sustancias con acción pesticida, cuya presencia en el extracto de calidad farmacéutica o nutricional es completamente indeseable. Un problema particularmente insidioso es la posible contaminación cruzada de pesticidas procedentes de cultivos cercanos.

El problema de la contaminación se discute en general en el Journal of AOAC International, Vol. 88 (3) , 2.005, 729735, que también describe un procedimiento para la determinación del contenido en pesticida de organofosfato de hojas de Ginkgo por cromatografía de gases.

El documento US 5.660.832 desvela un procedimiento general para purificar extractos de plantas de los pesticidas, que comprende la extracción con un disolvente polar en un intervalo de pH específico, seguido por absorción y desabsorción sobre resinas. En el caso de hojas de Ginkgo biloba, la extracción se realiza con una mezcla de etanol y agua.

Los pesticidas no son los únicos contaminantes indeseables en los extractos de Ginkgo biloba: por ejemplo, el documento EP 1 968 625 describe un procedimiento de preparación multietapa de un extracto de Ginkgo biloba con un bajo contenido en 4'-O-metilpiridoxina, también conocida como toxina de ginkgo y/o biflavonas. En este caso, sin embargo, los componentes indeseables están presentes de manera natural en la planta.

Finalmente, el documento EP 1 868 626 desvela un procedimiento para preparar extractos de Ginkgo biloba con un bajo contenido en hidrocarburos aromáticos policíclicos que proceden del uso de combustibles fósiles próximos a cultivos de Ginkgo. El procedimiento descrito es muy complejo, comprendiendo once etapas, largos tiempos de preparación y el uso de reactivos caros tales como poliamidas o reactivos tóxicos tales como sales de plomo.

Prácticamente todos los procedimientos conocidos implican una o más etapas de eliminación de los componentes lipófilos del extracto de Ginkgo (en particular biflavonas y ginkgols) . Dicha extracción también reduce cualquier contenido en pesticidas liófilos presente, mientras que los pesticidas con mayor polaridad quedan en el extracto, ya que su comportamiento es más similar al de los componentes hidrófilos (tales como glicósidos de flavona y terpenos) .

Por consiguiente existe la necesidad de un procedimiento de purificación conveniente que reduzca o elimine los pesticidas u otros contaminantes de los extractos de hoja de Ginkgo biloba para cumplir con los límites impuestos por la legislación, especialmente en los EE.UU., que rigen el contenido residual de cualquier tipo de pesticida en productos de origen vegetal para uso farmacéutico, nutricional o cosmético.

Descripción de la invención Ahora se ha encontrado que el contenido en pesticida de extractos de Ginkgo biloba se puede reducir mediante un procedimiento que comprende:

a) extracción líquido-líquido del extracto para obtener una fracción de polaridad media que contiene terpenos de ginkgo y pesticidas no eliminables con hexano y una fracción de alta polaridad que contiene glicósidos de ginkgo flavona;

b) cristalización de la fracción de polaridad media obtenida en la etapa a) para proporcionar un intermedio con un contenido en ginkgolide no menor del 50%;

c) cristalización de la disolución residual obtenida en la etapa b) para proporcionar un intermedio con un contenido en bilobalide no menor del 50%;

d) mezcla de la fracción de alta polaridad obtenida en la etapa a) con el intermedio de terpeno de ginkgo e intermedio de bilobalide obtenidos en las etapas b) y c) .

El procedimiento de la invención, además de eliminar o reducir sustancialmente el contenido en pesticida residual, también permite que se controle el contenido en terpenos de ginkgo y sus relaciones relativas.

La invención por lo tanto también se refiere a extractos que se pueden obtener del procedimiento descrito anteriormente, con una relación predeterminada de terpenos de ginkgo.

Según la invención, la etapa a) produce una fracción enriquecida con terpenos de ginkgo y una enriquecida con glicósidos de ginkgo flavona por extracción con un disolvente inmiscible en agua seleccionado de ésteres, hidrocarburos clorados, mezclas de hidrocarburos y alcoholes, cetonas y mezclas de cetonas y alcoholes, preferiblemente un éster C2-C8, tal como acetato de etilo y acetato de t-butilo o una mezcla de tolueno-butanol.

Los terpenos de ginkgo se cristalizan en agua y mezclas de alcoholes C1-C5, mientras que la cristalización de la fracción rica en terpeno obtenida en la etapa c) se realiza en agua o una mezcla de agua y alcoholes C1-C3. El procedimiento según la invención elimina los pesticidas de polaridad media que no se eliminan con los ginkgols.

La invención se ilustra con mayor detalle en los ejemplos a continuación.

Ejemplo 1: Purificación del extracto producido según el ejemplo I en los documentos US 5700468 y EP 0 360 556 (Indena) .

1) Se extraen 100 kg de hojas picadas 4 veces con 400 l de acetona al 60% (p/p) a una temperatura de aprox. 50°C.

2) Se extraen los percolados combinados en contracorriente con 500 l de hexano.

3) Se concentra la disolución desgrasada a vacío a un volumen de 200 l, se deja durante la noche a 2°C y después se centrifuga para separar la fracción de biflavona.

4) Se extrae la disolución acuosa en contracorriente con 400 l de una mezcla de 8/2 v/v de n-butanol/tolueno.

5) Se concentra la disolución orgánica a vacío a un volumen pequeño, que se sustituye con agua. Se absorbe el concentrado con agua para obtener una disolución aprox. 30% de residuo seco.

6) Se extrae la disolución en contracorriente con aprox. 65 l de acetato de etilo. Se concentra la fase acuosa a una consistencia de tipo jarabe y se seca a vacío, para obtener un intermedio enriquecido con glicósidos de flavona de ginkgo y desprovisto de terpenos (1, 95 kg) .

7) Se concentra la fase acética de etilo a vacío a una consistencia de tipo jarabe y se absorbe el residuo con 3 l de etanol acuoso al 75%.

8) Se extrae la disolución en contracorriente con 20 l de hexano, eliminando las fases orgánicas combinadas.

9) Se concentra la disolución de agua-alcohol a vacío a una consistencia de tipo jarabe y se añaden 0, 9 l de etanol acuoso al 50%.

Se calienta a reflujo la disolución resultante con agitación, después se enfría a temperatura ambiente y se deja cristalizar durante 4 días.

10) Se filtra después la disolución y se lava el sólido con EtOH al 50% y se seca a vacío, para obtener 95 g de ginkgolides purificados.

11) Se concentran las aguas madres a vacío para eliminar el etanol y después se absorbe el residuo con 1, 9 l de agua y se calienta a 90°C con agitación durante 30 minutos. Se separa la disolución acuosa y se absorbe el residuo 3 veces más con 1, 9 l de agua a 90°C, recuperándose la disolución acuosa cada vez.

12) Se combinan las disoluciones acuosas y se extraen en contracorriente con 14 l de hexano.

13) Se concentra la disolución acuosa a un volumen de 0, 3 l; se añade después 0, 1 l de EtOH de 95° y se calienta la disolución a 50°C con agitación, después se enfría a temperatura ambiente y se deja cristalizar durante 3 días.

14) Se filtra la disolución y se lava el sólido con EtOH al 20% y se seca a vacío para obtener 103 g de bilobalide purificado.

15) Los productos obtenidos en los puntos 6, 10 y 14 se mezclan para proporcionar... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de eliminación de pesticidas de extractos de Ginkgo biloba, que comprende someter un extracto obtenido por procedimientos convencionales a las siguientes etapas:

a) extracción líquido-líquido del extracto con un disolvente inmiscible en agua seleccionado de ésteres, hidrocarburos clorados, mezclas de hidrocarburos y alcoholes, cetonas y mezclas de cetonas y alcoholes, para obtener una fracción de polaridad media que contiene terpenos de ginkgo y pesticidas no eliminables con hexano y una fracción de polaridad alta que contiene glicósidos de flavona de ginkgo;

b) cristalización de terpenos de ginkgo en mezclas de agua y alcoholes C1-C3 de la fracción que contiene 10 terpenos de ginkgo y pesticidas no eliminables con hexano obtenidos en la etapa a) para proporcionar un intermedio con un contenido en ginkgolide no menor del 50% p/p;

c) cristalización en agua o en una mezcla de agua y alcoholes C1-C3 de la disolución residual obtenida en la etapa b) para proporcionar un intermedio con un contenido en bilobalide no menor del 50% p/p;

d) mezcla de la fracción que contiene glicósidos de flavona de ginkgo obtenida en la etapa a) con el 15 intermedio de terpeno de ginkgo e intermedio de bilobalide obtenidos en las etapas b) y c) .

2. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que el disolvente es un éster que tiene 2 a 8 átomos de carbono.

3. Extractos obtenibles según el procedimiento de las reivindicaciones 1 ó 2.