Procedimiento para el tratamiento de la retinopatía del prematuro y de enfermedades retinopáticas relacionadas.

Utilización de células de una población de células troncales hematopoyéticas negativas para linajevasculotróficas para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de un mamífero quesufre o que presenta riesgo de desarrollar retinopatía del prematuro o una enfermedad retinopática relacionada,

enla que la composición farmacéutica está destinada a administrar a la retina del mamífero una cantidad de células deuna población de células troncales hematopoyéticas negativas para linaje vasculotróficas efectiva para estimular unarevascularizacion fisiológica beneficiosa de zonas dañadas de la retina y para mejorar los daños a la retina causadospor la enfermedad, en la que la población de células troncales hematopoyéticas negativas para linaje es unapoblación de células de médula ósea de tipo mieloide aisladas en la que la mayoría de las células son negativaspara linaje y expresan el antígeno CD44 y el antígeno CD11b y que se produce mediante un procedimiento quecomprende seleccionar positivamente las células de médula ósea aisladas de un mamífero que reaccionaninmunológicamente con un anticuerpo seleccionado de entre el grupo que consiste en anti-CD44, anti-CD11b y unacombinación de los mismos.

Procedimiento para el tratamiento de la retinopatía del prematuro y de enfermedades retinopáticas relacionadas.

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas La presente solicitud reivindica los derechos de la solicitud provisional de patente US no de serie 60/656.122, presentada el 24 de febrero de 2005.

Declaración de interés gubernamental

Una parte del trabajo descrito en la presente memoria ha recibido el apoyo de las becas no EY11254 y no EY12598 del National Eye Institute del National Institutes of Health. El gobierno de los Estados Unidos posee determinados derechos en la presente invención.

Campo de la invención La presente invención se refiere al tratamiento de enfermedades retinopáticas. Más concretamente, la presente invención se refiere al tratamiento de la retinopatía del prematuro y enfermedades retinopáticas relacionadas mediante la administración de células troncales hematopoyéticas negativas para linaje en el ojo de un mamífero que sufre o que presenta el riesgo de desarrollar dichas enfermedades.

Antecedentes de la invención Las enfermedades vasculares de la retina, incluyendo la retinopatía diabética, la degeneración macular relacionada con la edad exudativa (ARMD) , la retinopatía del prematuro (RDP) y las oclusiones vasculares, son causas importantes de alteración visual y ceguera. Este grupo de enfermedades es el foco de investigación exhaustiva destinada a identificar nuevas modalidades de tratamiento que ayudarán a prevenir o a modificar la neovascularización ocular patológica. Por ejemplo, la ARMD afecta entre 12 y 15 millones de estadounidenses de más de 65 años y provoca pérdida visual en 10% a 15% de ellos como efecto directo de la neovascularización coroidal (subretiniana) . La causa principal de pérdida de visión de los estadounidenses de menos de 65 años es la diabetes; 16 millones de individuos en los Estados Unidos son diabéticos y 40.000 al año sufren complicaciones oculares de la enfermedad, con frecuencia el resultado de la neovascularización retiniana. Aunque la fotocoagulación por láser ha resultado eficaz en la prevención de la pérdida visual grave en subgrupos de pacientes diabéticos de alto riesgo, la incidencia global a 10 años de retinopatía sigue sustancialmente igual. Para los pacientes con neovascularización coroidal debido a la ARMD o enfermedad ocular inflamatoria, tal como la histoplasmosis ocular, la fotocoagulación, con pocas excepciones, resulta ineficaz para prevenir la pérdida visual. Aunque las recientemente desarrolladas terapias fotodinámicas no destructivas resultan prometedoras para reducir temporalmente la pérdida individual en pacientes con neovascularización coroidal previamente intratable, sólo 61, 4% de los pacientes tratados cada 3 a 4 meses mostró una visión mejorada o estabilizada, comparado con 45, 9% del grupo tratado con placebo.

La degeneración macular relacionada con la edad y la retinopatía diabética son las causas principales de pérdida de visión en las naciones industrializadas y ello ocurre como resultado de la neovascularización retiniana anormal. Debido a que la retina consiste en capas bien definidas de elementos neuronales, gliales y vasculares, las perturbaciones relativamente pequeñas, tales como las observadas en la proliferación vascular o el edema pueden conducir a una pérdida significativa de la función visual, Las degeneraciones retinianas heredadas, tales como la retinitis pigmentosa (RP) , también se asocian a anormalidades vasculares, tales como el estrechamiento arteriolar y al atrofia vascular. Aunque se han realizado avances significativos en la identificación de factores que estimulan e inhiben la angiogénesis, actualmente no se dispone de ningún tratamiento para tratar específicamente la enfermedad vascular ocular.

Las degeneraciones heredadas de la retina afectan hasta a 1 de cada 3.500 individuos y se caracterizan por ceguera nocturna progresiva, pérdida de campo visual, atrofia del nervio óptico, atenuación arteriolar, permeabilidad vascular alterada y pérdida de visión central que con frecuencia progresa a ceguera completa (Heckenlively J.R., editor, 1988; Retinitis Pigmentosa, Philadelphia: JB Lippincott Co.) . El análisis genético molecular de estas enfermedades ha identificado mutaciones en más de 110 genes diferentes, constituyendo sólo un porcentaje relativamente pequeño de los individuos afectados conocidos (Humphries et al., Science 256:804-808, 1992; Farrar et al., EMBO J. 21:857-864, 2002) . Muchas de estas mutaciones se asocian a componentes enzimáticos y estructurales de la maquinaria de fototransducción, incluyendo la rodopsina, la GMPc fosfodiesterasa, la periferina rds y RPE65. A pesar de estas observaciones, todavía no existen tratamientos efectivos para enlentecer o revertir la progresión de estas enfermedades degenerativas retinianas. Los recientes avances de la terapia génica han conducido a una reversión exitosa de los fenotipos rds (Ali et al., Nat. Genet. 25:306-310, 2000) y rd (Takahashi et al., J. Virol. 73:7812-7816, 1999) en ratones y el fenotipo RPE65 en perros (Acland et al., Nat. Genet. 28:92-95, 2001) al administrar el transgén de tipo salvaje en los fotorreceptores o el epitelio pigmentado retiniano (EPR) en animales con una mutación específica.

La angiogénesis es un proceso por el que se forman nuevos vasos sanguíneos. En respuesta a señales químicas específicas, aparecen capilares a partir de vasos preexistentes, creciendo finalmente en tamaño según requiera el organismo. Inicialmente, las células endoteliales, que revisten los vasos sanguíneos, se dividen en una dirección ortogonal al vaso preexistente, formando una ramificación sólida. A continuación, las células endoteliales contiguas forman vacuolas de gran tamaño y las células se reorganizan de manera que las vacuolas se orientan extremo con extremo y finalmente se fusionan formando la luz de un nuevo capilar (formación de tubo) .

La angiogénesis resulta estimulada por varias condiciones, tal como en respuesta a una herida, y acompaña a prácticamente todo el crecimiento de tejido en los organismos vertebrados, tales como los mamíferos. La angiogénesis también desempeña un papel en determinados estados de enfermedad, tales como la retinopatía diabética y determinados cánceres. El crecimiento de tumores, por ejemplo, requiere el crecimiento de vasos sanguíneos para proporcionar oxígeno y nutrientes al tejido tumoral en crecimiento.

La angiogénesis puede detenerse o inhibirse mediante interferencia con las señales químicas que estimulan el proceso angiogénico. Por ejemplo, las células endoteliales angiogénicas producen proteasas que digieren la lámina basal que circunda a los vasos sanguíneos, despejando de esta manera un camino para el nuevo capilar. La inhibición de estas proteasas, o su formación, puede evitar la formación de nuevos vasos.

De manera similar, las células endoteliales proliferan en respuesta a señales químicas. Entre las señales de proliferación particularmente importantes se incluyen las familias de proteínas del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y del factor de crecimiento fibroblástico (FGF) . Se ha demostrado que VEGF participa en la vascularización de determinados tumores. La interferencia con estos procesos de señalización de la proliferación también puede inhibir la angiogénesis.

Varios factores participan en la angiogénesis. Las moléculas tanto ácidas como básicas de factor de crecimiento fibroblástico son mitógenos de las células endoteliales y de otros tipos celulares. Un mitógeno altamente selectivo de las células endoteliales vasculares es el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) .

En el adulto normal, la angiogénesis se encuentra estrechamente regulada y se limita a la cicatrización de heridas, al embarazo y al ciclo uterino. La angiogénesis es activada por moléculas angiogénicas específicas, tales como el factor de crecimiento fibroblástico (FGF) básico y ácido, VEGF, angiogenina, factor de crecimiento transformante (TGF) , factor-a de necrosis tumoral (TNF-a) y factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) . La angiogénesis puede resultar suprimida por moléculas inhibidoras tales como el interferón-a, la trombospondina-1, la angiostatina y la endostatina. Es el equilibrio entre estos estimuladores e inhibidores naturales lo que controla la vasculatura capilar normalmente quiescente. Al romper este equilibrio, tal como en determinados estados de enfermedad, se induce la proliferación, migración y finalmente diferenciación de las células endoteliales capilares.

La angiogénesis desempeña un papel crucial en una diversidad de enfermedades, incluyendo el cáncer y la neovascularización ocular. El crecimiento... [Seguir leyendo]

1. Utilización de células de una población de células troncales hematopoyéticas negativas para linaje vasculotróficas para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de un mamífero que 5 sufre o que presenta riesgo de desarrollar retinopatía del prematuro o una enfermedad retinopática relacionada, en la que la composición farmacéutica está destinada a administrar a la retina del mamífero una cantidad de células de una población de células troncales hematopoyéticas negativas para linaje vasculotróficas efectiva para estimular una revascularizacion fisiológica beneficiosa de zonas dañadas de la retina y para mejorar los daños a la retina causados por la enfermedad, en la que la población de células troncales hematopoyéticas negativas para linaje es una población de células de médula ósea de tipo mieloide aisladas en la que la mayoría de las células son negativas para linaje y expresan el antígeno CD44 y el antígeno CD11b y que se produce mediante un procedimiento que comprende seleccionar positivamente las células de médula ósea aisladas de un mamífero que reaccionan inmunológicamente con un anticuerpo seleccionado de entre el grupo que consiste en anti-CD44, anti-CD11b y una combinación de los mismos.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que el mamífero es un ser humano.

3. Utilización según la reivindicación 1, en la que el mamífero es una cría de mamífero.

4. Utilización según la reivindicación 3, en la que la cría de mamífero ha sido expuesta a condiciones hiperóxicas.

5. Utilización según la reivindicación 1, en la que la composición farmacéutica está destinada a administrar las células mediante inyección intraocular.

6. Utilización según la reivindicación 1, en la que las células son autólogas para el mamífero que está siendo tratado.

7. Utilización según la reivindicación 1, en la que la composición farmacéutica está destinada a administrar las células antes de la aparición de los síntomas de la enfermedad. 30

8. Utilización según la reivindicación 1, en la que la composición farmacéutica está destinada a administrar las células antes de la exposición del mamífero a condiciones hiperóxicas.

9. Utilización según la reivindicación 1, en la que las células se han transfectado con un gen terapéuticamente útil. 35