Correlatos clínicos.

Un método para evaluar y/o monitorear una infección micobacteriana,

dicho método comprende:

(i) contactar una célula T que contiene muestra de dicho individuo con un antígeno micobacteriano;

(ii) detectar cualquier célula que secrete IFN-γ y/o IL-2;

(iii) determinar si la muestra comprende:

(a) células que secretan IFN-Γ solamente;

(b) células que secretan IL-2 solamente; y

(c) células que secretan IFN-γ e IL-2,

en donde el perfil de (a), (b) y (c) indican el estado de la infección.

Correlatos clínicos

Campo de la invención La presente invención se relaciona con métodos para monitorear infecciones micobacterianas, tales como infección por Mycobacterium tuberculosis y usos de estuches en tales métodos.

Antecedentes de la invención Existe una necesidad de marcadores del estado de infección de un individuo. El uso de tales marcadores permite el tratamiento, la prevención y el control de la enfermedad relevante. Por ejemplo, monitorear el estado de un individuo infectado con tuberculosis (TB) es esencial para el tratamiento, prevención y control de esta enfermedad en resurgimiento. La carga micobacteriana no puede medirse directamente y actualmente no existe un biomarcador que refleje la carga micobacteriana. Adicionalmente, el Mycobacterium tuberculosis es frecuentemente difícil de cultivar de pacientes con TB activa, e imposible de cultivar de personas sanas latentemente infectadas. Por lo tanto, una prueba diagnóstico basada en la respuesta inmune, que indique el estado de la infección por el Mycobacterium tuberculosis es muy útil en un número de escenarios clínicos que guían el tratamiento, la prevención y el control de esta infección. Por ejemplo, diferenciar entre la infección activa y latente, monitorear la eficacia de la terapia antituberculosis de la TB activa y latente, monitorear la eficacia de vacunas terapéuticas y nuevos fármacos y detectar el progreso temprano para la enfermedad activa.

Los antígenos micobacterianos son conocidos en la materia. Por ejemplo, el antígeno diana de secreción temprana 6 (ESAT-6) y la proteína del filtrado de cultivo 10 (CFP10) son dos antígenos del Mycobacterium tuberculosis que se han investigado extensamente en modelos animales y humanos en los últimos años. El ESAT-6 y la CPF10 son dianas fuertes de la respuesta inmune celular en modelos animales, pacientes de tuberculosis y contactos y de ese modo pueden usarse en pruebas de sangre basadas en células T específicas. Los métodos para monitorear las infecciones bacterianas son conocidos de Tsukaguchi y otros, 1915.

Sumario de la invención Los presentes inventores mostraron que el perfil de secreción de IL-2 e IFN-y derivados de las células T correlaciona con diferentes progresos clínicos de la infección por el patógeno intracelular. Así, la descripción proporciona un biomarcador inmunológico indirecto de la carga del patógeno intracelular y el estado in vivo el cual puede usarse para predecir, determinar y monitorear el resultado clínico así como monitorear el efecto de la intervención terapéutica o de vacuna en la infección.

Más particularmente, los inventores demostraron que el perfil de citocinas IFN-y/IL-2 de las células T CD4 específicas al antígeno del patógeno cambia en relación a la carga del antígeno. Durante los estados de alta carga de antígeno, las células T CD4 específicas al antígeno secretan IFN-y solamente e IFN-y/IL-2. Durante los estados de baja carga de antígeno, las células T específicas al antígeno dejan de secretar IFN-y solamente, y secretan IFNy/IL-2 predominantemente y nuevamente secretan IL-2 solamente. Este cambio en el perfil de citocinas se observa durante el cambio de una alta carga (enfermedad activa) a una baja carga de antígeno (después de una terapia exitosa) .

Correspondientemente, la presente invención proporciona:

- un método para evaluar y/o monitorear una infección micobacteriana, dicho método comprende:

(i) contactar una célula T que contiene muestra de dicho individuo con un antígeno micobacteriano;

(ii) detectar cualquier célula que secrete IFN-y y/o IL-2;

(iii) determinar si la muestra comprende:

(a) células que secretan IFN-y solamente;

(b) células que secretan IL-2 solamente; y/o

(c) células que secretan IFN-y e IL-2,

en donde el perfil de (a) , (b) y (c) indican el estado de la infección;

- el uso de un estuche en un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende medios para detectar células que secretan IFN-y, IL-2 o ambos IFN-y e IL-2 y un antígeno micobacteriano.

Breve descripción de las figuras La Figura 1 muestra el perfil de citocinas IFN-y e IL-2 de células T CD4+ en la tuberculosis activa y durante y después de la terapia anti-tuberculosis. Los porcentajes mostrados indican las proporciones relativas de células CD4+ productoras de IFN-y e IL-2 en la fracción enriquecida con los niveles de fondo de la producción de citocinas no específicas sustraídos. Las células T CD4+ secretoras de IFN-y/IL-2 e IFN-y específicas a la CFP-10 y a ESAT-6 co-dominan en la tuberculosis activa, en quienes la carga bacteriana es alta (A, B) , mientras que las células T secretoras de IFN-y/IL-2 predominan durante y después del tratamiento el cual erradicó el bacilo viable, in vivo, con la pérdida de las células T CD4+ secretoras de IFN-y solamente y la aparición de células T CD4+ secretoras de IL-2 (C, D) .Estos datos se observaron reproduciblemente en 4 casos de tuberculosis activa y en 9 muestras de seguimiento de 5 pacientes con 3 meses de tratamiento y después de este. La Figura 2 muestra la proporción y frecuencia de las respuestas de IFN-y (barras blancas/símbolos) , IFN-y/IL-2 (barras grises/símbolos) e IL-2 (barras negras/símbolos) de las células T CD4+ específicas para ESAT-6 y CFP-10 en la TB activa comparada a los puntos de tiempo de seguimiento (durante y después del tratamiento) . Se muestra la proporción de células T CD4+ específicas para ESAT-6 y CFP-10 secretoras de IFN-y y/o IL-2 en la fracción enriquecida (A) y las frecuencias de estas células determinadas después del enriquecimiento magnético de las células secretoras de IFN-y e IL-2 (B) . Las líneas horizontales indican la mediana de la respuesta positiva. Los valores P indican si existe una diferencia estadística entre la TB activa y de seguimiento. La Figura 3 muestra el perfil de citocinas de IFN-y e IL-2 de las células T CD4+ en la tuberculosis auto-curada. Los PBMC se estimularon con ESAT-6 y CFP-10 y se enriquecieron en células secretoras de IFN-y e IL-2 como para la Figura 1. Las células T CD4+ secretoras de IFN-y, IFN-y/IL-2 e IL-2 se observaron en participantes auto-curados en quienes el bacilo viable persiste. La Figura 4 resume los perfiles de citocinas en diferentes progresos de la infección por tuberculosis. La Figura 5 muestra las aplicaciones potenciales de esta invención.

Breve descripción de las secuencias La sec. con núm. de ident.: 1 es la secuencia de aminoácidos del antígeno ESAT-6 del Mycobacterium tuberculosis.

La sec. con núm. de ident.: 2 es la secuencia de aminoácidos del antígeno CPF-10 del Mycobacterium tuberculosis.

Descripción detallada de la invención La invención proporciona un método para evaluar una infección micobacteriana y/o monitorear una infección micobacteriana en un individuo, que comprende determinar si el individuo tiene (a) células T que secretan IFN-y solamente, (b) células T que secretan IL-2 solamente o (c) células T que secretan ambas IFN-y e IL-2 en respuesta a un antígeno del patógeno intracelular y opcionalmente determinar cualquier cambio en este perfil de citocinas.

El patógeno intracelular es un mycobacterium. La infección es una infección micobacteriana, tal como Mycobacterium tuberculosis.

El método puede usarse para determinar la carga del patógeno, predecir el desarrollo y/o la reactivación de la enfermedad, monitorear la terapia anti-patógeno, evaluar la eficacia de fármacos o vacunas anti-patógeno o para determinar si la terapia anti-patógeno resulta en una cura esterilizante. Por ejemplo, el método puede usarse para determinar y/o monitorear si un paciente tiene una infección activa, una infección latente, una infección o enfermedad que se ha aclarado espontáneamente o se está aclarando, una infección o enfermedad que se ha aclarado o se está aclarando sin intervención médica, o una infección o enfermedad que ha sido o está siendo curada.

Un método de la invención típicamente comprende:

(i) contactar una célula T que contiene muestra de dicho individuo con un antígeno micobacteriano;

(ii) detectar cualquier célula que secrete IFN-y y/o IL-2;

(iii) determinar si la muestra comprende:

(a) células que secretan IFN-y solamente;

(b) células que secretan IL-2 solamente; y

(c) células que secretan IFN-y e IL-2.

El perfil de (a) , (b) y (c) indican el estado de la infección.

En un ejemplo, la descripción proporciona un método para determinar la carga del patógeno en un individuo, en donde la presencia y/o la proporción de (a) correlaciona positivamente con la carga... [Seguir leyendo]

1. Un método para evaluar y/o monitorear una infección micobacteriana, dicho método comprende:

(i) contactar una célula T que contiene muestra de dicho individuo con un antígeno micobacteriano;

(ii) detectar cualquier célula que secrete IFN-y y/o IL-2;

(iii) determinar si la muestra comprende:

(a) células que secretan IFN-y solamente;

(b) células que secretan IL-2 solamente; y

(c) células que secretan IFN-y e IL-2,

en donde el perfil de (a) , (b) y (c) indican el estado de la infección.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho individuo recibió: un fármaco o vacuna que trata dicha infección; o un fármaco de prueba o vacuna.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende además comparar el estado de dicha infección con el estado de dicha infección en dicho individuo determinado previamente, y de ese modo: monitorear la efectividad de dicho fármaco o vacuna en dicho individuo; o determinar la eficacia de dicho fármaco de prueba o vacuna.

4. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha infección es una infección por Mycobacterium tuberculosis.

5. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho individuo tiene una enfermedad por TB activa o una infección de tuberculosis latente (LTBI) .

6. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho individuo se recuperó de la tuberculosis (TB) y dicho método comprende además determinar la probabilidad de la reactivación, en donde la probabilidad de la reactivación se correlaciona positivamente con la carga micobacteriana.

7. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho individuo está en riesgo de contraer dicha infección.

8. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el individuo es un niño pequeño y/o está inmunocomprometido.

9. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el método de monitoreo se lleva a cabo en múltiples intervalos de tiempo para determinar un cambio en el estado de la infección.

10. Un método de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el método de monitoreo se lleva a cabo al menos 3 a 20, preferentemente 6 a 10 veces, y/o se lleva a cabo al menos cada 40 días y/o por la duración del período de riesgo de reactivación y/o se lleva a cabo para determinar si la tuberculosis latente se está haciendo activa.

11. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el antígeno es ESAT6 o CFP-10.

12. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el antígeno es un fragmento u homólogo de una proteína de origen natural la cual es reconocida por una célula T la cual reconoce una secuencia de epítopo de célula T natural en la proteína.

13. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde (a) , (b) y (c) se detectan usando anticuerpos inmovilizados para IFN-y e IL-2.

14. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende determinar la carga de patógeno en un individuo, en donde la presencia de (a) correlaciona positivamente con la carga del patógeno y la presencia de (b) correlaciona negativamente con la carga del patógeno del patógeno.

15. El uso en un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes de un estuche que comprende: medios para detectar células que secretan IFN-y, IL-2 o IFN-y e IL-2; y un antígeno micobacteriano.