Composiciones y procedimientos para tratar tumores, fibrosis y proteinosis alveolar pulmonar.

Una composición para su uso en la inhibición de la fibrosis en un sujeto mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de un polinucleótido para inhibir la fibrosis,

en la que la composición comprende el polinucleótido, que comprende

una primera secuencia hibridable con una secuencia de polinucleótido que codifica para la LOXL2,

una segunda secuencia complementaria de la primera secuencia, y

una secuencia de conexión que une la primera secuencia con la segunda secuencia.

Composiciones y procedimientos para tratar tumores, fibrosis y proteinosis alveolar pulmonar

La presente invención se refiere a una composición para su uso en la inhibición de la fibrosis en un sujeto según la reivindicación 1, a un polinucleótido aislado según la reivindicación 10, a un vector de expresión según la reivindicación 13 y a una célula hospedadora según la reivindicación 14.

La oxidasa de lisilo (LO o LOX) es una oxidasa de amina que contiene cobre que oxida sustratos de amina primaria a aldehídos reactivos. La LOX cataliza la desaminación oxidativa de residuos de peptidil lisina y de hidroxilisina en colágenos, y de residuos de peptidil lisina en elastina, y ayuda a la formación de la matriz extracelular. Los peptidilaldehídos resultantes típicamente condensan y experimentan reacciones de oxidación para formar las reticulaciones covalentes derivadas de lisina necesarias para la integridad estructural normal de la matriz extracelular. Habitualmente se liberan óxido de hidrógeno (H2O2) y amonio en cantidades estequiométricas con el

producto de peptidil aldehído.

La LOX puede oxidar ciertos residuos de lisina de colágeno y elastina fuera de la célula; sin embargo, también puede actuar intracelularmente, donde puede regular la expresión génica. Además, la LOX puede inducir la quimiotaxia de monocitos, fibroblastos y células del músculo liso. La propia LOX puede ser inducida por varios factores y esteroides tales como TGF-º, TNF-a e interferón (Csiszar, Prog. Nucl. Acid Res. 70: 1 - 32 (2001) ) . La LOX también se ha implicado en diversas funciones biológicas tales como la regulación del desarrollo, la supresión de tumores, la movilidad celular y la senescencia celular. Los diversos papeles de la LOX y sus recientemente descubiertos miembros de la familia de las amino oxidasas, la oxidasa de lisilo o las proteínas de tipo oxidasas de lisilo (LOR o LOXL) , pueden jugar importantes papeles con respecto a su localización intracelular y el extracelular.

La expresión o la implicación de la LOX y las LOXL en enfermedades también puede variar. Esto puede ser debido a varias razones, tales como la diferencia en la distribución tisular, los dominios de procesado, la regulación de la actividad, así como a otras diferencias entre las proteínas Por ejemplo, la LOX y las LOXL están implicadas en enfermedades fibróticas, ya que tanto la LOX como las LOXL son muy expresadas en los miofibroblastos que rodean las áreas fibróticas (Kagen, Pathol. Res. Pract. 190: 910 - 919 (1994) ; Murawaki y col., Hepatology 14: 1167 - 1173 (1991) ; Siegel y col, Proc. Natl. Acad. Scl. EE.UU. 75: 2945 - 2949 (1978) ; Jourdan Le-Saux y col., Biochem. Biophys. Res. Comm. 199: 587 - 592 (1994) ; Kim y col., J. Cell Biochem. 72: 181 -188 (1999) ) . La LOX y las diversas LOXL también están implicadas en varios cánceres. Por ejemplo, la LOXL y la LOXL4 han mostrado estar silenciadas epigenéticamente y pueden inhibir la vía de señalización de la cinasa regulada por

ras/señal extracelular en el cáncer de vejiga en humanos (Wu y col., Cancer Res. 67: 4123 - 4129 (2007) ) . Otras han mostrado una regulación por incremento selectiva y una amplificación del gen LOXL4 en el carcinoma escamoso de cabeza y cuello (Gorough y col., J. Pathol. 212: 74 - 82 (2007) ) . La LOX y la LOX2 también se han implicado en varios tumores, tales como cáncer de colon y de esófago (Csiszar, Prog. Nucl. Acid Res. T0: 1 - 32 (2001) ) . En el cáncer de mama, la LOX y los miembros de la familia de las LOXL se han relacionado con el cáncer (Kirschmann y

col., Cancer Res. 62: 448 - 4483 (2002) ) .

Peinado Héctor y col. se refieren al papel molecular de la enzima oxidasa de lisilo de tipo 2 en la regulación del snail y la progresión tumoral. Embo Journal, oxford university press surrey, GB, vol. 24, nº 19, 1 de octubre de 2005, páginas 3446 - 3458.

El documento US2007/021365 desvela procedimientos para la identificación de inhibidores de la oxidasa de lisilo y el uso de dichos inhibidores para prevenir y tratar tumores, particularmente tumores metastásicos, individualmente y junto con agentes quimioterapéuticos. Adicionalmente se desvela el uso de los niveles de la oxidasa de lisilo para medir el potencial metastásico y de supervivencia.

El documento WO2007/126457 describe procedimientos, composiciones y kits proporcionados para tratar y prevenir de forma eficaz la metástasis de cánceres in vivo, y para aumentar la supervivencia de los sujetos afectados con tumores metastásicos, dirigiéndose a una oxidasa de lisilo o a su modulador, especialmente la oxidasa de lisilo humana. También se proporcionan procedimientos para identificar inhibidores de la oxidasa de lisilo 55 y el uso de dichos inhibidores para prevenir y tratar tumores, particularmente tumores metastásicos, individualmente y en combinación con agentes quimioterapéuticos. Adicionalmente se describe el uso de los niveles de la oxidasa de lisilo para medir el potencial metastásico y de supervivencia.

La base de datos EMBL (en línea) , 28 de octubre de 2008, se refiere a la secuencia 15133 de la Patente WO2004061423.

El documento WO2004/061423 se refiere a composiciones, equipo y procedimientos para pronosticar, diagnosticar, prevenir o tratar el cáncer de colon. Se identifican los genes del cáncer de colon que se expresan de forma diferenciada en los tejidos con cáncer de colon con respecto a los tejidos no enfermos. Algunos ejemplos de estos genes están ilustrados en las Tablas 1 - 5. Los genes del cáncer de colon de la presente invención y los productos codificados por los mismos pueden usarse como marcadores o como agentes profilácticos o terapéuticos para la detección o el tratamiento del cáncer de colon.

Por lo tanto, hay una necesidad de composiciones y de procedimientos para modular la actividad de la LOX y de las LOXL. Uno de dichos procedimientos es mediante el uso de ARN interferente (ARNi) . El ARNi se refiere a procedimientos para el silenciamiento post-transcripcional de genes específicos de secuencia, que está mediado por un ARN bicatenario (ARNbc) denominado ARN interferente corto (ARNic) . El ARNi es un mecanismo endógeno que usa pequeños ARN no codificantes para silenciar la expresión génica. Cuando se introduce un ARNic

en una célula, se une a la maquinaria del ARNi endógeno para alterar el nivel del ARNm que contiene las secuencias complementarias con alta especificidad. La respuesta del ARNi implica un complejo de endonucleasa conocido como el complejo silenciador inducido por ARN (RNA-induced silencing complex, RISC) , que media en la escisión de un ARN monocatenario complementario de la hebra antisentido del ARNic dúplex. La escisión del ARN objetivo tiene lugar en la región intermedia complementaria de la hebra antisentido del ARNic dúplex (Elbashir y col.,

Genes Dev. 15: 188 - 200, (2001) ) .

Como resultado, hay una necesidad de composiciones que modulen la LOX y las LOXL, tal como mediante el uso de ARNi. También son necesarios procedimientos para usar dichas composiciones para tratar y diagnosticar dolencias. La presente divulgación aborda las necesidades y proporciona también otras ventajas.

La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis en un sujeto de la presente invención se define en la reivindicación 1, el polinucleótido aislado de la presente invención se define en la reivindicación 10, el vector de expresión de la presente invención se define en la reivindicación 13 y la célula hospedadora de la presente invención se define en la reivindicación 14.

La presente divulgación proporciona composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis y la fibrosis, y para tratar el cáncer, mediante la inhibición de la metástasis de los tumores en un sujeto, tales como tumores primarios. Además, la expresión de la LOXL2 está correlacionada con la proteinosis alveolar pulmonar, y como tal puede usarse para un diagnóstico y un tratamiento precisos de la proteinosis alveolar pulmonar (PAP) .

En un aspecto, la presente divulgación proporciona un polinucleótido aislado que comprende una primera secuencia hibridable con una secuencia de polinucleótidos que codifica para la LOXL2 o la SEQ ID NO 2, una segunda secuencia complementaria de la primera secuencia, y una secuencia de conexión que une la primera secuencia con la segunda secuencia. La secuencia de conexión puede formar una estructura de bucle en horquilla. La primera secuencia puede comprender la SEQ ID NO 20 o la 21. También se proporciona un polinucleótido aislado que comprende la SEQ ID NO 20 o la 21. El polinucleótido aislado puede tener al menos el doble de la longitud de la SEQ ID NO 20 o... [Seguir leyendo]

1. Una composición para su uso en la inhibición de la fibrosis en un sujeto mediante la administración al

sujeto de una cantidad eficaz de un polinucleótido para inhibir la fibrosis, en la que la composición comprende el

polinucleótido, que comprende una primera secuencia hibridable con una secuencia de polinucleótido que codifica para la LOXL2,

una segunda secuencia complementaria de la primera secuencia, y 10 una secuencia de conexión que une la primera secuencia con la segunda secuencia.

2. La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis según la reivindicación 1, en la que la secuencia de conexión forma una estructura de bucle en horquilla. 15

3. La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis según la reivindicación 1 ó 2; en la que la primera secuencia comprende la SEQ ID NO. 20 ó 21.

4. La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis según la reivindicación 1, 2 ó 3, en la que el 20 polinucleótido tiene al menos dos veces la longitud de la SEQ ID NO. 20.

5. La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis de la reivindicación 1, en la que el polinucleótido comprende una secuencia complementaria de la SEQ ID NO. 20.

6. La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis según la reivindicación 1, 2 ó 3, en la que el polinucleótido tiene al menos dos veces la longitud de la SEQ ID NO. 21.

7. La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis según la reivindicación 1, en la que el

polinucleótido comprende una secuencia complementaria de la SEQ ID NO. 21. 30

8. La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el polinucleótido se proporciona en un vector de expresión.

9. La composición para su uso en la inhibición de la fibrosis según cualquiera de las reivindicaciones 35 precedentes, en la que la composición comprende adicionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.

10. Un polinucleótido aislado que comprende una primera secuencia hibridable con una secuencia de polinucleótido que codifica para la LOXL2,

una segunda secuencia complementaria de la primera secuencia, y

una secuencia de conexión que une la primera secuencia con la segunda secuencia,

en la que la primera secuencia comprende la SEQ ID NO. 21.

11. El polinucleótido aislado de la reivindicación 10, en el que la secuencia de conexión forma una estructura de bucle en horquilla.

12. El polinucleótido aislado de la reivindicación 10 o de la reivindicación 11, en el que el polinucleótido aislado tiene al menos dos veces la longitud de la SEQ ID NO. 21.

13. Un vector de expresión que comprende el polinucleótido de la reivindicación 10, 11 ó 12. 55 14. Una célula hospedadora que comprende el vector de expresión de la reivindicación 13.