Composiciones que contienen aecuorina y procedimientos de uso de las mismas.

Aecuorina para su uso como medicamento.

Composiciones que contienen aecuorina y procedimientos de uso de las mismas

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere, en general, a composiciones útiles para el mantenimiento de la homeostasis del

calcio. En particular, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen aecuorina útiles en la prevención y/o el alivio de enfermedades o síntomas asociados con un desequilibrio de calcio, tales como un daño isquémico a las neuronas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El calcio es el quinto elemento más abundante en el organismo humano y está presente principalmente en los huesos. Más del 99 % del calcio del organismo se almacena en el esqueleto, que intercambia constantemente sus existencias con el 1 % restante disuelto en los fluidos corporales y en los tejidos blandos, tales como la sangre. El control de este intercambio está dirigido en gran medida por el sistema endocrino que detecta la concentración de calcio ionizado en el plasma y dirige el intercambio de calcio para mantener este equilibrio crítico. Solamente una pequeña fracción del 1 % de calcio de los fluidos intersticiales y los tejidos blandos está ionizado y es soluble; el

resto se encuentra unido a proteínas, en particular a proteínas de unión a calcio (PUCa) . Se sabe que estas PUCa actúan en el mantenimiento de la homeostasis del calcio. Debido a que el organismo requiere concentraciones específicas de iones calcio con el fin de llevar a cabo procesos fisiológicos necesarios, el mantenimiento de la homeostasis de calcio tiene, por lo tanto, una importancia crítica en la salud corporal. La comunidad médica entiende que las concentraciones apropiadas de calcio iónico en plasma y fluidos corporales son críticas en la realización de funciones corporales, incluidas, pero sin limitación, la excitabilidad neuronal, la contracción muscular, la permeabilidad de membranas, la división celular, la secreción hormonal y la mineralización ósea. Una alteración de la homeostasis del calcio, es decir, un desequilibrio de calcio, está asociada a muchas enfermedades, síndromes y afecciones, incluidas, pero sin limitación, cáncer, cardiopatías y enfermedades neurodegenerativas.

En el pasado, los antagonistas de los canales de calcio, que bloquean el flujo de calcio entre el interior de la célula y

el líquido intersticial, se han prescrito ampliamente como agentes farmacéuticos útiles en la prevención de trastornos relacionados con el calcio, incluidos hipertensión, angina, asma, migrañas y deterioro neuronal. Por ejemplo, se ha observado que la nimidopina mejora la sintomatología clínica y las funciones cognitivas en demencia mediante el alivio de un desequilibrio de calcio causante de deterioro neuronal. No obstante, muchos de estos antagonistas de los canales de calcio tienen efectos secundarios no deseados que incluyen, pero sin limitación, malestar general,

retención de líquidos, acidez, ritmo cardiaco errático, mareos, malestar estomacal y, en casos raros, desmayos, fiebre y sangrado excesivo.

Por lo tanto, existe la necesidad de productos terapéuticos nuevos y alternativos que alivien o prevengan el desequilibrio de calcio. En particular, se desean composiciones farmacéuticas o nutracéuticas que tengan efectos secundarios reducidos en comparación con agentes anteriores y, si se descubrieran, satisfarían una necesidad

antigua en las comunidades médica y de la salud nutricional.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona aecuorina para su uso como medicamento. La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que son ventajosas en el alivio y/o la prevención de síntomas o trastornos asociados con el desequilibrio de calcio. Dichas composiciones incluyen aecuorina en combinación con vehículos aceptables para su administración a un sujeto por una diversidad de vías. En consecuencia, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden cantidades eficaces de aecuorina en combinación con un vehículo aceptable.

En otra realización, la invención también proporciona procedimientos para tratar un síntoma o trastornos asociados con el desequilibrio de calcio mediante la administración a un paciente con necesidad de dicho tratamiento una 45 cantidad terapéuticamente eficaz de aecuorina.

Otros objetos, características y ventajas de la presente invención resultarán evidentes tras el estudio de la memoria descriptiva y las reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La figura 1 representa una micrografía de fluorescencia que representa la absorción de aecuorina por las neuronas 50 del hipocampo.

Las figura 2 muestra videomicrografías que ilustran que la aecuroina es neuroprotectora cuando se administra antes de una isquemia.

La figura 3 ilustra un gráfico de barras del número medio de neuronas que contienen azul de tripano (muertas) después de una isquemia.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

I. EN GENERAL

Debe indicarse que, tal como se usa en la presente memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas del singular "un", "una", "el" y “la” incluyen la referencia en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Además, los términos y expresiones “un” (o “una”) , “uno o más” y “al menos uno” pueden usarse de forma intercambiable en el presente documento. También debe indicarse que las expresiones "que comprende", "que incluye" y "que tiene" pueden usarse de forma intercambiable.

A menos de que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos que se usan en el presente documento tienen los mismos significados que entienden comúnmente los expertos en la técnica a la que pertenece la presente invención. Aunque pueden usarse en la práctica o ensayo de la presente invención algunos procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos, ahora se describirán los procedimientos y materiales preferentes.

II. LA INVENCIÓN

La aecurina es una fotoproteína aislada originariamente de medusas luminiscentes y de otros organismos marinos.

El complejo de aecuorina comprende una proteína de apoaecurina de 22.000 dalton, oxígeno molecular y el luminóforo coelenterazina. Cuando se unen tres iones de Ca2+ a este complejo, la coelenterazina se oxida dando coeleteramida, con una liberación concomitante de dióxido de carbono y luz azul. La aecuroina no la exportan ni la segregan las células, ni está compartimentalizada o secuestrada dentro de las células. En consecuencia, se han usado mediciones de aecurina para detectar los cambios de Ca2+ que tienen lugar en periodos relativamente largos.

En diversos sistemas experimentales, la luminiscencia de aecuorina era detectable muchas horas a días después de la carga celular. Además, se sabe que la aecuorina tampoco altera las funciones celulares o el desarrollo embrionario.

Debido a su luminiscencia dependiente de Ca2+, el complejo de aecuorina se ha usado ampliamente como indicador del Ca2+ intracelular. La aecuorina de Aequorea victoria se ha usado específicamente para: (1) analizar la respuesta de secreción de células cromafines suprarrenales individuales a agonistas colinérgicos nicotínicos; (2) aclarar el papel de la liberación de Ca2+ en el daño al músculo cardiaco; (3) demostrar la liberación masiva de Ca2+ durante la fertilización; (4) estudiar la regulación de la expresión de la bomba de Ca2+ del retículo sarcoplásmico en mioblastos de pollo en desarrollo y (5) calibrar micropipetas con volúmenes de inyección tan reducidos como 3 picolitros.

La purificación convencional de aecuorina de la medusa Aequorea victoria requiere procedimientos de extracción laboriosos y, algunas veces, proporciona preparaciones que son sustancialmente heterogéneas o que son tóxicas para que los organismos en estudio. Dos toneladas de medusas proporcionan típicamente ~125 mg de la fotoproteína purificada. Por el contrario, la aecurina recombinante se produce preferentemente mediante la purificación de apoaecuorina procedente de Escherichia coli manipulada genéticamente, seguida por la reconstitución del complejo de aecuorina in vitro con coelentarazina pura. Este procedimiento de preparación proporciona un complejo de aecuorina puro, no tóxico, totalmente cargado, que es adecuado para su uso en la presente invención. Está disponible una preparación comercial ejemplar de aecuorina útil en la presente invención de Molecular Probes, Inc., con la denominación comercial AQUALITE. La aecuorina de la presente invención se ha descrito, por lo tanto, y... [Seguir leyendo]

1. Aecuorina para su uso como medicamento.

2. Una composición que comprende una cantidad eficaz de aecuorina en combinación con un vehículo aceptable para uso como medicamento.

3. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de aecuorina en combinación con un vehículo aceptable.