Composiciones de vacuna contra Neisseria que comprenden una combinación de antígenos.

Una composición inmunogénica que comprende:

(i) un antígeno de proteína autotransportadora de Neisseria que es NadA o Hsf;

(ii) un antígeno de proteína de adquisición de Fe de Neisseria que es Lipo28 o TbpA; y

(iii) una composición de vesícula de membrana externa que comprende LPS inmunotipo L3;

y en la que dichos antígenos, cuando están presentes en una vesícula de membrana externa, han sido reguladospositivamente en la vesícula de membrana externa.

Composiciones de vacuna contra Neisseria que comprenden una combinación de antígenos

Campo técnico

La presente invención se refiere al campo de composiciones inmunogénicas de Neisseria y vacunas, a su fabricación y al uso de dichas composiciones en medicina. Más particularmente, se refiere a composiciones de vacuna que comprenden una combinación de antígenos que tienen cualidades que permiten que las vacunas de la invención provoquen una respuesta inmune sorprendentemente buena medida en un ensayo de protección o en un ensayo bactericida en suero.

Antecedentes Las cepas de bacterias de Neisseria son los agentes causantes de varias patologías humanas, contra las cuales existe la necesidad de desarrollar vacunas eficaces. En particular Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis causan patologías que podrían tratarse por vacunación.

Neisseria gonorrhoeae es el agente etiológico de la gonorrea, una de las enfermedades transmitidas por vía sexual más frecuentemente presentadas en el mundo con una incidencia anual estimada de 62 millones de casos (Gerbase y col 1998 Lancet 351; (Supl 3) 2-4) . Las manifestaciones clínicas de la gonorrea incluyen la inflamación de las membranas mucosas del tracto urogenital, la garganta o el recto e infecciones oculares del neonato. Las infecciones por gonococos ascendentes en mujeres pueden conducir a infertilidad, embarazo ectópico, enfermedad inflamatoria pélvica crónica y formación de abscesos tubo-ováricos. La septicemia, la artritis, la endocarditis y la meningitis están asociadas con gonorrea complicada.

El elevado número de cepas de gonococos con resistencia a antibióticos contribuye a morbilidad aumentada y complicaciones asociadas con la gonorrea. Una alternativa atractiva al tratamiento de la gonorrea con antibióticos sería su prevención usando vacunación. Actualmente no existe ninguna vacuna para infecciones por N. gonorrhoeae.

Neisseria meningitidis es una patógeno importante, particularmente en niños y adultos jóvenes. La septicemia y la meningitis son las formas más amenazantes de la vida de enfermedad invasiva por meningococos (EIM) . Esta enfermedad ha llegado a ser un problema de salud mundial a causa de su elevada morbilidad y mortalidad.

Se han identificado trece serogrupos de N. meningitidis en base a diferencias antigénicas en los polisacáridos capsulares, siendo los más habituales A, B y C, que son responsables del 90% de las enfermedades en todo el mundo. El serogrupo B es la causa más común de enfermedad por meningococos en Europa, Estados Unidos y varios países de América latina.

Se han desarrollado vacunas basadas en el polisacárido capsular de los serogrupos A, C, W e Y, y han demostrado controlar brotes de enfermedad por meningococos (Peltola y col 1985 Pediatrics 76; 91-96) . Sin embargo, el serogrupo B es poco inmunogénico e induce solamente una respuesta de anticuerpo transitoria de, predominantemente, un isotipo IgM (Ala'Aldeen D y Cartwright K 1996, J. Infect. 33; 153-157) . Por lo tanto no existe ninguna vacuna ampliamente eficaz, actualmente disponible, contra meningococos del serogrupo B, que es responsable de la mayoría de las enfermedades en la mayoría de los países de clima templado. Esto es particularmente problemático ya que la incidencia de enfermedades de serotipo B está aumentando en Europa, Australia y América, principalmente en niños menores de 5 años. El desarrollo de una vacuna contra meningococos del serogrupo B presenta dificultades particulares porque la cápsula polisacárida es poco inmunogénica debido a su similitud inmunológica con la molécula de adhesión celular neural humana. Por lo tanto las estrategias para la producción de vacunas se han concentrado en las estructuras expuestas en superficie de la membrana externa de meningococos, pero se ha visto impedida por la marcada variación en estos antígenos entre las cepas.

Desarrollos adicionales han conducido a la introducción de vacunas compuestas de vesículas de membrana externa que contendrán varias proteínas que componen el contenido normal de la membrana bacteriana. Una de éstas es la vacuna VA-MENGOC-BC ® cubana contra serogrupos B y C de N. meningitidis (Rodriguez y col 1999 Mem Inst. Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro 94; 433-440) . Esta vacuna se diseñó para combatir un brote de enfermedad invasiva por meningococos en Cuba que no se había eliminado por un programa de vacunación usando una vacuna de polisacárido capsular AC. Los serogrupos prevalentes eran B y C y la vacuna VA-MENGOC-BC ® fue satisfactoria en el control del brote con una eficacia de vacuna estimada del 83% contra cepas del serogrupo B de N. meningitidis (Sierra y col 1990 In Neisseria, Walter Gruyter, Berlin, m. Atchman y col (eds) p 129-134, Sierra y col 1991, NIPH Ann 14; 195-210) . Esta vacuna fue eficaz contra un brote específico, sin embargo la respuesta inmune provocada no protegería contra otras cepas de N. meningitidis.

Estudios de eficacia posteriores realizados en América latina durante epidemias causadas por cepas de meningococos homólogas y heterólogas de serogrupo B han demostrado alguna eficacia en niños mayores y adultos pero su eficacia fue significativamente inferior en niños más pequeños que estaban en mayor riesgo de infección (Milagres y col 1994, Infect. Immun. 62; 4419-4424) . Es cuestionable cómo de eficaz sería dicha vacuna en países

con enfermedad endémica multicepa tal como el Reino Unido. Estudios de inmunogenicidad contra cepas heterólogas han demostrado actividad bactericida en suero de reacción cruzada solamente limitada, especialmente en bebés (Tappero y col 1999, JAMA 281; 1520-1527) .

Se desarrolló una segunda vacuna de vesícula de membrana externa en Noruega usando un aislado de serotipo B

típico de los prevalentes en Escandinavia (Fredriksen y col 1991, NIPH Ann, 14; 67-80) . Esta vacuna se ensayó en ensayos clínicos y se encontró que tenía una eficacia protectora después de 29 meses del 57% (Bjune y col 1991, Lancet, 338; 1093-1096) .

Sin embargo, el uso de vesículas de membrana externa en vacunas está asociado con algunos problemas. Por ejemplo, las VME contienen lipopolisacáridos tóxicos y pueden contener antígenos inmunodominantes que son específicos de cepa o se expresan de forma variable. Se han descrito varios procedimientos que podrían usarse para superar algunos de los problemas de las vacunas de preparación de vesícula de membrana externa. El documento WO01/09350 describe procedimientos que abordan algunos de estos problemas por ejemplo reduciendo la toxicidad y modificando los antígenos presentes en las vesículas de membrana externa.

Una vacuna de vesícula de membrana externa que comprende LPS y proteínas de membrana externa de clases 1, 15 3, 4 y 5 se desvela en Andersen y col 1997, Microbial Pathogenesis 23:139-155.

El documento WO01/52885 describe la posibilidad de combinar vesículas de membrana externa con otros antígenos y se incluye una lista de más de 2.000 proteínas potenciales de Neisseria a partir de las cuales se especula que podría desarrollarse una vacuna con eficacia contra un intervalo más amplio de serotipos.

Una vacuna de membrana externa nativa intranasal preparada a partir de una cepa negativa de cápsula de grupo B

de Neisseria meningitidis, cultivada en condiciones limitantes de hierro para inducir proteínas reguladas por hierro, se desvela en Katial y col 2002, Infection and Immunity, 70:702-707.

Existen diversos problemas con las vacunas anti-meningococos actualmente disponibles.

Las vacunas de membrana externa basadas en proteína tienden a ser específicas y eficaces contra unas pocas cepas solamente. Las vacunas de polisacárido también son sub-óptimas ya que tienden a provocar respuestas inmunes pobres y cortas, particularmente contra el serogrupo B (Lepow y col 1986; Peltola 1998, Pediatrics 76; 9196) .

Las infecciones por Neisseria representan un problema sanitario considerable para el cual no hay vacunas disponibles en el caso de N. gonorrhoeae o están disponibles vacunas con limitaciones en su eficacia y capacidad para proteger contra cepas heterólogas en el caso de N. meningitidis. Existe claramente una necesidad de desarrollar vacunas superiores contra infecciones por Neisseria que mejoren la eficacia de las vacunas actualmente disponibles y permitan la protección contra un intervalo más amplio de cepas.

Descripción de las Figuras Figura 1. Detección de TbpA y Hsf en VME preparadas a partir de una cepa de N. meningitidis recombinante regulada positivamente para la expresión de tbpA y hsf. Separación de preparaciones de VME (10 !g) por

análisis de SDS-PAGE (geles de gradiente del 4-20%) teñidas con azul brillante de Coomassie.... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunogénica que comprende:

(i) un antígeno de proteína autotransportadora de Neisseria que es NadA o Hsf;

(ii) un antígeno de proteína de adquisición de Fe de Neisseria que es Lipo28 o TbpA; y

(iii) una composición de vesícula de membrana externa que comprende LPS inmunotipo L3;

y en la que dichos antígenos, cuando están presentes en una vesícula de membrana externa, han sido regulados positivamente en la vesícula de membrana externa.

2. La composición inmunogénica de la reivindicación 1, en la que el antígeno de proteína autotransportadora de Neisseria y el antígeno de proteína de adquisición de Fe de Neisseria están aislados.

3. La composición inmunogénica de la reivindicación 1 ó 2, en la que dicha composición inmunogénica comprende tanto una composición de subunidad como la composición de vesícula de membrana externa.

4. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, en la que la composición de vesícula de membrana externa comprende LPS inmunotipo L3, 7, 9.

5. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, en la que la composición de vesícula de membrana externa comprende una concentración de LPS inmunotipo L3 que se puede obtener usando extracción con desoxicolato al 0, 02-0, 4%.

6. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, en la que al menos uno de los antígenos de Neisseria es derivado de Neisseria meningitidis.

7. La composición inmunogénica de la reivindicación 6, en la que todos los antígenos de Neisseria son derivados de

Neisseria meningitidis.

8. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, que comprende adicionalmente uno o más polisacáridos u oligosacáridos capsulares bacterianos.

9. La composición inmunogénica de la reivindicación 8, en la que los polisacáridos u oligosacáridos capsulares son derivados de bacterias seleccionadas entre el grupo que consiste en: Neisseria meningitidis serogrupo A, C, Y y W

135.

10. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, que comprende adicionalmente un adyuvante.

11. La composición inmunogénica de la reivindicación 10, en la que el adyuvante comprende una sal de aluminio.

12. La composición inmunogénica de la reivindicación 11, en la que la sal de aluminio es gel de hidróxido de aluminio.

13. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, en la que el antígeno de proteína autotransportadora de Neisseria es NadA.

14. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, en la que el antígeno de proteína de adquisición de Fe de Neisseria es Lipo28.

15. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, que comprende un antígeno adicional que es una proteína asociada a membrana de Neisseria.

16. La composición inmunogénica de cualquier reivindicación precedente, que comprende un antígeno adicional seleccionado entre el grupo que consiste en: GNA1870, Hap, LbpB y Omp85.

17. La composición inmunogénica de la reivindicación 15 ó 16, en la que el antígeno adicional está aislado.