Composición portadora para el transporte de ácido nucleico.

Composición portadora para la administración de un ácido nucleico que comprende (A) un lípido catiónico conuna estructura de esteroide y (B) un lípido catiónico de tipo sal de amonio cuaternario.

Composición portadora para el transporte de ácido nucleico.

Campo técnico

La presente invención se refiere a una composición portadora de baja toxicidad y alta seguridad para administración de un ácido nucleico, la composición portadora, cuando se utiliza para administrar un ácido nucleico tal como un ARNsi en una célula u organismo de origen animal, que puede suministrar de manera eficaz el ácido nucleico en las células en tanto que se protege el ácido nucleico de ser degradado; y a una composición para administración de ácido nucleico.

Antecedentes de la técnica Con los recientes avances de la biotecnología, se ha encontrado varios ácidos nucleicos que presentan funciones bioactivas en las células. Por ejemplo, los ARNsi (ARN de pequeña interferencia) son conocidos por causar la degradación de los ARNm de los genes diana en las células y por inhibir con ello la expresión de los genes diana (ARN de interferencia) . La inhibición de la expresión del gen diana por el ARN de interferencia sirve para aliviar o tratar los síntomas de enfermedades causadas por la expresión anormal de genes o grupos de genes específicos, y por lo tanto se espera el desarrollo de los ARNsi como agentes terapéuticos. Sin embargo, a fin de utilizar los ácidos nucleicos tales como los ARNsi como agentes terapéuticos, es importante que dichos ácidos nucleicos presenten sus funciones en las células diana. Con esta finalidad, es indispensable que crear una tecnología para suministrar de manera eficaz los ácidos nucleicos en las células diana.

Tecnologías conocidas para suministrar moléculas de ácidos nucleicos exógenos o genes en células incluyen tratamientos de enfermedades intratables en seres humanos utilizando varios virus, incluyendo retrovirus, adenovirus, herpesvirus, etc. Sin embargo, dichos tratamientos implican dificultades debido a problemas de infecciosidad, inmunorreactividad, productividad y similares. Por lo tanto, se están desarrollando portadores no víricos que están exentos de problemas causados por los virus y que pueden suministrar moléculas de ácido nucleico en las células.

Por ejemplo, el documento de patente 1 ha descrito un lípido catiónico que tiene una estructura específica como un portador de administración de ácidos nucleicos no víricos que estimula la liberación de ácidos nucleicos tales como los ARNsi en células. Sin embargo, el lípido catiónico descrito en el documento de patente 1 tiene un defecto en que presenta toxicidad cuando se administra a las células cultivadas u organismos. El documento de Patente 2 da a conocer una composición portadora que contiene un compuesto anfifílico y policationes como un vehículo con relativamente baja toxicidad que puede suministrar ARNsi a las células. Sin embargo, la composición descrita en el documento de patente 2 también presenta un problema en su toxicidad a las células cuando se introduce una cantidad suficiente de ARNsi a la misma.

Frente a estos antecedentes de la técnica anterior, se desea el desarrollo de una composición portadora de baja toxicidad para la administración de un ácido nucleico que puede suministrar de manera eficaz ácidos nucleicos tales como ARNsi a las células.

[Documento de Patente 1]

Solicitud de patente japonesa no examinada nº de publicación 2002-529439

[Documento de patente 2]

Solicitud de patente japonesa no examinada nº de publicación 2005-508394

Descripción de la invención Problemas que debe resolver la invención Un objetivo de la presente invención es resolver los problemas anteriores de la técnica anterior. Específicamente, un objetivo de la presente invención es proporcionar una composición portadora para administración de ácido nucleico de baja toxicidad y alta seguridad, la composición portadora, cuando se utiliza para administrar un ácido nucleico tal como un ARNsi en una célula u organismo de origen animal, que puede suministrar de manera eficaz los ácidos nucleicos en las células a la vez que las protege de ser degradadas; y una composición para administración de ácido nucleico que contiene la composición portadora y un ácido nucleico.

Medios para resolver los problemas Los presentes inventores realizaron una amplia investigación para resolver los problemas anteriores, y descubrieron

que una composición que contiene (A) un lípido catiónico con una estructura de esteroide (núcleo esteroide) , en combinación con (B) un lípido catiónico del tipo sal de amonio cuaternario, sirve como vehículo para administración de ácido nucleico, ya que tiene baja toxicidad y puede suministrar de manera eficaz los ácidos nucleicos, protegiendo a la vez a los ácidos nucleicos de ser degradados. La presente invención se realizó por investigación adicional basándose en estos descubrimientos.

La presente invención proporciona los puntos siguientes:

Punto 1. Composición portadora para la administración de un ácido nucleico que comprende (A) un lípido catiónico con una estructura de esteroide (núcleo de esteroide) y (B) un lípido catiónico de tipo sal de amonio cuaternario.

Punto 2. Composición portadora según el punto 1, que comprende además (C) un material de base oleosa.

Punto 3. Composición portadora según el punto 1, en la que el componente (A) es 3º-[N- (N', N'-dimetilaminoetano) carbamoil]colesterol y/o yoduro de 3º-[N', N', N'-trimetilaminoetano]colesterol.

Punto 4. Composición portadora según el punto 1, en la que el componente (B) es por lo menos un miembro seleccionado de entre el grupo constituido por sal bromuro de dimetildioctadecilamonio, dioleiltrimetilamonio propano e hidrocloruro de N-[1- (2, 3-bis (oleoiloxi) propil) -N, N, N-trimetilamonio.

Punto 5. Composición portadora según el punto 1, en la que el componente (B) está contenido en una proporción de 10 a 200 partes en peso por 100 partes en peso del componente (A) .

Punto 6. Composición portadora según el punto 1, siendo la composición portadora es una composición portadora para la administración de un ARNsi.

Punto 7. Composición para administración de ácido nucleico que comprende una composición portadora según cualquiera de los puntos 1 a 5 y un ácido nucleico.

Punto 8. Composición para administración de ácido nucleico según el punto 7, en el que el ácido nucleico es un ARNsi.

Punto 9. Método de introducción de ácido nucleico in vitro que comprende poner en contacto una composición para administración de ácido nucleico según el punto 7 con una célula para introducir el ácido nucleico en la célula.

Punto 10. Utilización de (A) un lípido catiónico con una estructura de esteroide, en combinación con (B) tipo lípido catiónico de tipo sal de amonio cuaternario para la producción de una composición portadora para la administración de un ácido nucleico.

Breve descripción de los dibujos La figura 1 muestra los resultados del examen microscópico de las imágenes de fluorescencia procedentes del ácido nucleico de las células después del tratamiento utilizando cada una de las muestras de ensayo;

la figura 2 muestra gráficos que ilustran los resultados de la medición de las actividades de luciferasa de las células después del tratamiento con cada una de las muestras de ensayo;

la figura 3 muestra los resultados de la medición de las actividades de neprilisina (NEP) , en los pulmones de ratas;

la figura 4 muestra los resultados de la medición del número de células vivas después del tratamiento utilizando cada una de las muestras de ensayo; y

la figura 5 muestra los resultados de la tinción de lonchas de tejidos pulmonares de ratas con hematoxilina y eosina, en los que se tiñen los núcleos, ribosomas, etc. de azul a azul celeste con hematoxilina, y el citoplasma, fibras, y los glóbulos rojos se tiñen de rojo con eosina.

Efectos de la invención La composición portadora para la administración de un ácido nucleico y la composición para administración de ácidos nucleicos de la presente invención consiguen los siguientes efectos destacables.

(1) Los ácidos nucleicos pueden suministrarse de manera eficaz a las células para que éstos puedan poner de manifiesto sus funciones en las células.

(2) La degradación de los ácidos nucleicos puede suprimirse en los organismos y medios de cultivo.

(3) El vehículo y la composición tienen baja toxicidad y alta seguridad.

La composición portadora para la administración de un ácido nucleico y la composición para administración de ácidos nucleicos sirven por lo tanto para tratar varias enfermedades mediante la introducción de ácidos nucleicos, y en particular para el tratamiento... [Seguir leyendo]

1. Composición portadora para la administración de un ácido nucleico que comprende (A) un lípido catiónico con una estructura de esteroide y (B) un lípido catiónico de tipo sal de amonio cuaternario. 5

2. Composición portadora según la reivindicación 1, que comprende además (C) un material de base oleosa.

3. Composición portadora según la reivindicación 1, en la que el componente (A) e.

3. [N- (N', N'

dimetilaminoetano) carbamoil]colesterol y/o yoduro d.

3. [N', N ', N'-trimetilaminoetano] colesterol. 10

4. Composición portadora según la reivindicación 1, en la que el componente (B) es al menos un miembro seleccionado de entre el grupo constituido por sal bromuro de dimetildioctadecilamonio, dioleiltrimetilamonio propano e hidrocloruro de N-[1- (2, 3-bis (oleoiloxi) propil) -N, N, N-trimetilamonio.

5. Composición portadora según la reivindicación 1, en la que el componente (B) está contenido en una proporción de 10 a 200 partes en peso por 100 partes en peso del componente (A) .

6. Composición portadora según la reivindicación 1, siendo la composición portadora una composición portadora para la administración de un ARNsi. 20

7. Composición para administración de ácido nucleico, que comprende una composición portadora según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un ácido nucleico.

8. Composición para administración de ácido nucleico según la reivindicación 7, en el que el ácido nucleico es un 25 ARNsi.

9. Procedimiento de introducción de ácido nucleico in vitro que comprende la puesta en contacto de una composición para administración de ácido nucleico según la reivindicación 7 con una célula para introducir el ácido nucleico en la célula.

10. Utilización de (A) un lípido catiónico con una estructura de esteroide, en combinación con (B) un lípido catiónico del tipo sal de amonio cuaternario para la producción de una composición portadora para la administración de un ácido nucleico.