Combinación de anticuerpos con glucocorticoides para el tratamiento del cáncer.

Uno o más glucocorticoides para reducir la liberación no específica de citoquinas en el tratamiento de cánceres y de enfermedades tumorales con uno o más anticuerpos biespecíficos trifuncionales inmunoestimuladores (ACtr) .

Combinación de anticuerpos con glucocorticoides para el tratamiento del cáncer.

La presente invención se refiere a la utilización de glucocorticoides para la producción de medicamentos que reducen o eliminan los efectos secundarios no deseados que se producen durante el tratamiento de enfermedades con anticuerpos inmunoestimuladores debido a la liberación no específica de citoquinas, así como a una composición farmacéutica que contiene al menos un anticuerpo inmunoestimulador y al menos un glucocorticoide.

Los procedimientos inmunoterapéuticos tienen un papel cada vez más importante en el tratamiento de enfermedades difíciles o poco controlables, en particular en el cáncer e infecciones. Preferentemente se utilizan anticuerpos como medios inmunoestimuladores (véase Glennie y Johnson (2000) , Immunology Today 21 (8) : 403410) . En particular, la eficacia de este tipo de anticuerpos inmunoestimuladores se basa en la posibilidad de unión específica a antígenos definidos. Sin embargo, hasta la fecha, un importante problema de la lucha contra enfermedades como el cáncer y las infecciones con anticuerpos inmunoestimuladores estriba en los graves efectos secundarios provocados por la administración de este tipo de anticuerpos, observándose principalmente una fuerte indisposición, vómitos, reacciones alérgicas, hipotonía, taquicardia, fiebre alta e incluso fallo circulatorio u orgánico mortal, en la mayoría de los casos debido a un SIRS (inglés: “systemic inflammator y response syndrome” - síndrome de respuesta inflamatoria sistémica) .

En la mayoría de los casos, estos fuertes efectos secundarios de los anticuerpos inmunoestimuladores se relacionan con la liberación no específica de citoquinas provocada por los anticuerpos, que es la causa de gran parte de los efectos secundarios clínicos arriba mencionados. La magnitud de la liberación de citoquinas, que depende de la cantidad administrada y de la velocidad de administración del anticuerpo inmunoestimulador, limita la dosis tolerable del anticuerpo inmunoestimulador correspondiente en la aplicación clínica.

Los glucocorticoides son conocidos desde hace tiempo como principios activos antiinflamatorios e inmunosupresores altamente eficaces. Un mecanismo relacionado con el efecto inmunosupresor de los glucocorticoides es su efecto reductor de la transcripción de citoquinas (véase, por ejemplo, Blotta y col. (1997) J. Immunol. 158: 5589 a 5595; Ballow y Nelson (1997) JAMA 278 (22) , capítulo 24: 2008 a 2017) . En los últimos años se han hecho progresos en la investigación del efecto inmunosupresor de los glucocorticoides, en particular en relación con el desarrollo de células T y su función, descritos de forma resumida, por ejemplo, en Ashwell y Vacchio (2000) Annu. Rev. Immunol. 18: 309 a 345. En el desarrollo de terapias inmunosupresoras eficaces, en particular para evitar rechazos (agudos) de trasplantes, se utilizan preferentemente glucocorticoides en combinación con otros agentes inmunosupresores. Por ejemplo, Herbelin y col. (Transplantation (2000) 68 (5) : 616 a 622) informan de una mejora de la terapia inmunosupresora aguda con el anticuerpo anti-CD3 OKT3 por administración previa de glucocorticoides, gracias a la reducción de la producción de TNF-a, IL-2 e IFN-y provocada por éstos. Sin embargo, en el estado actual de la técnica, la administración de glucocorticoides en relación con la estimulación del sistema inmunológico mediante terapias con anticuerpos, por ejemplo con anticuerpos trifuncionales (ACtr) , es totalmente desconocida. Hasta la fecha, los glucocorticoides se administran cuando el objetivo terapéutico es la inmunosupresión.

Por ello, la presente invención tiene por objetivo proponer un nuevo sistema para reducir en la mayor medida posible los efectos secundarios de los anticuerpos con actividad inmunoestimuladora.

Este objetivo se resuelve mediante las formas de realización de la presente invención caracterizadas en las reivindicaciones.

En particular, de acuerdo con la invención se propone la utilización de uno o más glucocorticoides en la producción de un medicamento para reducir la liberación no específica de citoquinas durante el tratamiento de enfermedades con uno o más anticuerpos inmunoestimuladores, según las reivindicaciones.

Esta novedosa indicación de los glucocorticoides en relación con la terapia con anticuerpos para la inmunoestimulación en caso de ciertas enfermedades, en particular cáncer, se basa en la sorprendente constatación de que la combinación de anticuerpos inmunoestimuladores de especificidad definida junto con los glucocorticoides conduce a reducir la liberación no específica de citoquinas por las células inmunológicas, sin que ello influya negativamente en el efecto de los anticuerpos inmunoestimuladores dirigido contra el o los antígenos definidos. Principalmente en relación con la utilización de anticuerpos para la inmunoestimulación (por ejemplo contra células tumorales) , la combinación de anticuerpos con glucocorticoides conduce a una modulación de la actividad inmunológica resultante: la actividad inmunológica del o de los anticuerpos dirigida contra el o los antígenos definidos se mantienen en gran medida inalterada, mientras que los efectos no específicos que se producen con la administración de anticuerpos inmunoestimuladores independientemente de la unión con el antígeno o los antígenos diana, como la liberación no específica de citoquinas anteriormente descrita, se reducen de forma significativa.

Gracias a la combinación de glucocorticoides (esto es uno o más glucocorticoides) con uno o más anticuerpos inmunoestimuladores se obtienen diversas ventajas en comparación con las terapias inmunoestimuladoras conocidas del estado actual de la técnica, que amplían considerablemente la aplicabilidad clínica de los anticuerpos en la terapia inmunológica:

1. Con una misma dosificación y un efecto específico en gran medida inalterado (es decir contra el antígeno o los antígenos diana) , los efectos secundarios no deseados provocados se reducen considerablemente (como se ha indicado más arriba) debido a que disminuye la liberación de citoquinas.

2. La reducción de los efectos secundarios no deseados permite aumentar considerablemente la dosificación del anticuerpo o los anticuerpos a administrar. De este modo, la combinación con glucocorticoides posibilita un aumento considerable del efecto con el aumento de la dosis de anticuerpo.

3. Sorprendentemente, los glucocorticoides a utilizar según la invención sólo reducen la liberación no específica de citoquinas independiente de la unión del antígeno diana (sistémica) . Por consiguiente, la liberación de citoquinas sólo se produce en el lugar de la unión con el antígeno (por ejemplo en el lugar de unión y destrucción intencionada de células tumorales) . Así, gracias a este efecto, además de la nueva posibilidad de mayor dosificación arriba descrita, el efecto del anticuerpo inmunoestimulador se focaliza en el lugar de la unión de antígeno sin que influya en las citoquinas liberadas de forma sintética.

En el sentido de la presente invención, el concepto “anticuerpo” incluye anticuerpos monoclonales, quiméricos, humanizados, pudiendo todos ellos estar presentes en forma combinada o soluble, así como también fragmentos de los anticuerpos arriba mencionados. Además de los fragmentos de anticuerpos según la invención de forma aislada, también se pueden presentar anticuerpos según la invención en forma recombinante como proteínas de fusión con otros componentes (proteínicos) . Los fragmentos como tales o los fragmentos de anticuerpos según la invención como componentes de proteínas de fusión se obtienen habitualmente por métodos de disociación enzimática, síntesis de proteínas o métodos de recombinación usuales para los especialistas. De acuerdo con la invención se trata de un anticuerpo trifuncional (ACtr) .

Los anticuerpos quiméricos según la invención son moléculas de acuerdo con las reivindicaciones y que contienen diferentes componentes, derivándose éstos de diferentes tipos de animales (por ejemplo anticuerpos que presentan una región variable derivada un anticuerpo monoclonal de ratón y una región constante de una inmunoglobulina humana) . Por un lado, los anticuerpos quiméricos según las reivindicaciones se utilizan preferentemente para reducir la inmunogenicidad durante el uso y, por otro lado, para aumentar los rendimientos de producción. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales murinos tienen mayores rendimientos en líneas celulares de hibridoma, pero también conducen a una mayor inmunogenicidad en humanos, de modo que, preferentemente, se utilizan anticuerpos quiméricos... [Seguir leyendo]

1. Uno o más glucocorticoides para reducir la liberación no específica de citoquinas en el tratamiento de cánceres y de enfermedades tumorales con uno o más anticuerpos biespecíficos trifuncionales inmunoestimuladores (ACtr) .

2. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según la reivindicación 1, caracterizados porque son sintéticos.

3. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según la reivindicación 2, caracterizados porque el glucocorticoide sintético se selecciona de entre el grupo consistente en prednisona, prednisolona, metilprednisolona, triamcinolona, betametasona, dexametasona, acetato de cortisona, prednilideno, deflazacort, cloprednol, fluocortolona y budenósido.

4. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizados porque el cáncer se selecciona de entre el grupo consistente en carcinoma de estómago, adenocarcinoma, melanoma maligno, carcinoma de colon, carcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de útero, carcinoma hepatocelular, todos los tipos histológicos del carcinoma bronquial, linfomas, sarcomas, blastomas, tumor estromal gastrointestinal (GIST) .

5. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizados porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico y/o un anticuerpo humanizado.

6. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizados porque el anticuerpo presenta en cada caso al menos una especificidad contra un antígeno tumoral y contra un marcador CD.

7. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según la reivindicación 6, caracterizados porque el marcador CD se selecciona de entre el grupo consistente en CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28 y CD44.

8. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según la reivindicación 6 o 7, caracterizados porque el antígeno tumoral se selecciona de entre el grupo consistente en EpCAM, HER2/neu, HER3/neu, G250, CEA, MAGE, VEGF, GD3, EGFR, aV13-integrina, HLA, HLA-DR, ASC, CD1, CD2, CD4, CD6, CD7, CD8, CD11, CD13, CD14, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD33, CD40, CD41, CD52, c-erb-2, CALLA, MHCII, CD44v3, CD44v6, CD117, p97, gangliósido GD2, GD3, C215, antígeno del anticuerpo 9.2.27, antígeno del anticuerpo NE150 y antígeno del anticuerpo CA125.

9. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, caracterizados porque el anticuerpo tiene una especificidad EpCAM x anti-CD3 o anti-HER2/neu x anti-CD3.

10. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizados porque el anticuerpo y/o el glucocorticoide se administra vía intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intradérmica, subcutánea, intratumoral o selectivamente en un órgano definido.

11. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según la reivindicación 10, caracterizados porque la administración selectiva en un órgano definido se lleva a cabo a través de un catéter en el vaso que abastece dicho órgano.

12. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según la reivindicación 11, caracterizados porque la administración en el hígado se lleva a cabo a través de un catéter en la arteria hepática.

13. Glucocorticoide o glucocorticoides a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizados porque el glucocorticoide y el anticuerpo se administran de forma simultánea.

14. Composición farmacéutica que incluye al menos un anticuerpo biespecífico trifuncional inmunoestimulador y al menos un glucocorticoide, presentando el anticuerpo una especificidad EpCAM x anti-CD3 o anti-HER2/neu x anti-CD3.

15. Composición farmacéutica para reducir la liberación no específica de citoquinas en el tratamiento de cánceres y enfermedades tumorales con uno o más anticuerpos biespecíficos trifuncionales inmunoestimuladores (ACtr) , que contiene al menos un anticuerpo biespecífico trifuncional inmunoestimulador y al menos un glucocorticoide, en caso dado junto con uno o más vehículos y/o coadyuvantes farmacéuticamente compatibles.

16. Composición farmacéutica según la reivindicación 14 o a utilizar según la reivindicación 15, caracterizada porque el glucocorticoide es un glucocorticoide sintético.

17. Composición farmacéutica o composición farmacéutica a utilizar según la reivindicación 16, caracterizada porque el glucocorticoide sintético se selecciona de entre el grupo consistente en prednisona, prednisolona, metilprednisolona, triamcinolona, betametasona, dexametasona, acetato de cortisona, prednilideno, deflazacort, cloprednol, fluocortolona y budenósido.

18. Composición farmacéutica o composición farmacéutica a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17, caracterizada porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico y/o un anticuerpo humanizado.

19. Composición farmacéutica o composición farmacéutica a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, caracterizada porque el anticuerpo presenta en cada caso al menos una especificidad contra un antígeno tumoral y contra un marcador CD.

20. Composición farmacéutica o composición farmacéutica a utilizar según la reivindicación 19, caracterizada porque el marcador CD se selecciona de entre el grupo consistente en CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28 y CD44.

21. Composición farmacéutica o composición farmacéutica a utilizar según la reivindicación 19 o 20, caracterizada porque el antígeno tumoral se selecciona de entre el grupo consistente en EpCAM, HER2/neu, HER3/neu, G250, CEA, MAGE, VEGF, GD3, EGFR, aV13-integrina, HLA, HLA-DR, ASC, CD1, CD2, CD4, CD6, CD7, CD8, CD11, CD13, CD14, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD33, CD40, CD41, CD52, c-erb-2, CALLA, MHCII, CD44v3, CD44v6, CD117, p97, gangliósido GD2, GD3, C215, antígeno del anticuerpo 9.2.27, antígeno del anticuerpo NE150 y antígeno del anticuerpo CA125.

22. Composición farmacéutica o composición farmacéutica a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, caracterizada porque el anticuerpo tiene una especificidad EpCAM x anti-CD3 o anti-HER2/neu x anti-CD3.

23. Composición farmacéutica según la reivindicación 14 para el tratamiento de enfermedades seleccionadas de entre el grupo consistente en cánceres y enfermedades tumorales.

24. Composición farmacéutica a utilizar según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 23, seleccionándose el cáncer entre el grupo consistente en carcinoma de estómago, adenocarcinoma, melanoma maligno, carcinoma de colon, carcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de útero, carcinoma hepatocelular, todos los tipos histológicos del carcinoma bronquial, linfomas, sarcomas y blastomas.

25. Kit que contiene al menos un anticuerpo biespecífico trifuncional (ACtr) inmunoestimulador y al menos un glucocorticoide, teniendo el anticuerpo una especificidad EpCAM x anti-CD3 o anti-HER2/neu x anti-CD3, estando separados entre sí el o los anticuerpos biespecíficos trifuncionales inmunoestimuladores y el o los glucocorticoides.

26. Kit según la reivindicación 25, caracterizado porque el glucocorticoide se selecciona de entre el grupo consistente en prednisona, prednisolona, metilprednisolona, triamcinolona, betametasona, dexametasona, acetato de cortisona, prednilideno, deflazacort, cloprednol, fluocortolona y budenósido.

sin HCT8 con HCT8

sin HCT8 con HCT8

sin HCT8 con HCT8

sin HCT8 con HCT8 sin HCT8 con HCT8

Receptor IL-2 (ng/ml)

Interleuquina-6 (pg/ml)

Amilasa Lipasa Total bilirrubina Leucocitos Linfocitos Receptor IL-2 (ng/ml)

Interleuquina-6 (pg/ml)

A-amilasa Lipasa Total bilirrubina % Citotox

% Citotox

Análisis FACS