Biochip y procedimiento para la comprobación selectiva de infecciones por Chlamydia trachomatis.

Procedimiento para la comprobación selectiva de infecciones por Chlamydia trachomatis y para la averiguación desi se trata de una infección aguda por Chlamydia pneumoniae o de una infección crónica por Chlamydia trachomatiso de una infección aguda por Chlamydia trachomatis,

caracterizado por que se usan al menos tres antígenos parala comprobación de anticuerpos en muestras, estando seleccionados los antígenos del grupo compuesto por:CT017, CT098, CT318-L1P, CT431, CT456-TARP, CT603-TSAP y CT664 así como de fragmentos y subsecuenciasde los anteriores antígenos, presentando los fragmentos al menos aminoácidos consecutivos de los antígenos yal menos un epítopo específico de especie diagnósticamente relevante.

Biochip y procedimiento para la comprobación selectiva de infecciones por Chlamydia trachomatis La presente invención se refiere a un procedimiento para la comprobación selectiva de infecciones por Chlamydia trachomatis, en el que se usan los antígenos CT017, CT098, CT318-L1P, CT431, CT456-TARP, CT603-TSAP y CT664 para la comprobación de anticuerpos específicos de Chlamydia trachomatis en muestras de mamíferos. Además, la invención se refiere a un biochip que presenta los antígenos que se han mencionado anteriormente para la comprobación de los anticuerpos específicos de Chlamydia trachomatis. Además, la presente invención se refiere a un kit de ensayo que es adecuado para la comprobación de infecciones por Chlamydia trachomatis.

Las clamidias son agentes infecciosos extendidos a nivel mundial de considerable relevancia clínica y epidemiológica. Se trata de bacterias de replicación intracelular obligada que existen, morfológica y funcionalmente, en dos formas celulares diferentes (cuerpos elementales altamente infecciosos metabólicamente inactivos y cuerpos reticulares intracelulares con capacidad de replicación) y que recorren un ciclo de vida típico. Las células diana de los patógenos, por norma general, son las células epiteliales de la conjuntiva así como las mucosas del aparato respiratorio y del aparato genital.

El reservorio de patógenos para Chlamydia trachomatis y Chlamydia pneumoniae (nueva nomenclatura también: Chlamydophila pneumoniae) es el ser humano, mientras que para Chlamydia psittaci (nueva nomenclatura también: Chlamydophila psittaci) pueden ser fuentes importantes de infección, sobre todo, las aves, sin embargo, también animales de producción. Debido a su ubicación intracelular, las clamidias han desarrollado estrategias para evitar la defensa inmunitaria del hospedador, de tal manera que no es infrecuente una cronificación de la infección con el riesgo de afecciones secundarias. En tales casos, el diagnóstico mediante la comprobación del patógeno la mayoría de las veces ya no es posible, mientras que la comprobación de anticuerpos específicos de especie adquiere una considerable importancia para el diagnóstico.

Las clamidias se pueden multiplicar también en células de defensa inmunitaria del hospedador, tales como monocitos y linfocitos. Posiblemente, por ello, los patógenos consiguen diseminarse desde el lugar de la primoinfección y llegar, de este modo, a otros compartimentos (articulaciones, vasos) . La primoinfección con frecuencia evoluciona clínicamente de forma no característica y de manera oligosintomática, por lo que se favorece la propagación y la diseminación de la infección. Ya que, al parecer, una primoinfección no induce ninguna inmunidad completa, precisamente en Chlamydia pneumoniae y Chlamydia trachomatis no son infrecuentes las reinfecciones. De forma correspondiente, la terapia con frecuencia es de larga duración y se consigue solamente con antibióticos que alcanzan, dentro de la célula, elevados niveles de principio activo. Precisamente debido a su sintomatología clínica no característica, para la comprobación de infecciones por clamidias el diagnóstico de laboratorio desempeña un papel decisivo.

Chlamydia trachomatis pertenece, en los países industrializados, a las causas más frecuentes de enfermedades de transmisión sexual (ETS) . Según estimaciones del "Center of Disease Control and Prevention" de Estados Unidos, más de 700 millones de seres humanos están infectados por Chlamydia trachomatis. La incidencia anual se sitúa en 50 millones. A nivel de Alemania se cuenta con una incidencia anual de 300.000 (en total aproximadamente 1, 15 millones) . En los países en vías de desarrollo, el patógeno causa, con el tracoma, una queratoconjuntivitis crónica que, al igual que antes, en estos países es la causa más frecuente de la ceguera evitable.

El espectro de enfermedades de Chlamydia trachomatis depende del serotipo del patógeno. Los serotipos A-C causan el tracoma, los serotipos L1-L3 causan el linfogranuloma venéreo, una enfermedad de transmisión sexual que cursa de forma invasiva en estadios con aparición, sobre todo, en zonas tropicales. Por el contrario, los serotipos D-K desempeñan en los países industrializados el papel decisivo como causa de infecciones urogenitales que pueden conducir a esterilidad debida a infección y artritis postinfecciosa. La transmisión perinatal del patógeno de la madre infectada al recién nacido conduce a la denominada conjuntivitis del recién nacido o también a la neumonía del recién nacido. Debido a las graves afecciones secundarias que pueden causar las infecciones por Chlamydia trachomatis no reconocidas y, por tanto, no tratadas, en los países escandinavos y angloamericanos se ofrecen pruebas de despistaje para grupos de riesgo. Actualmente todavía no está claro si se introducirán en 55 Alemania también pruebas de despistaje.

Chlamydia pneumoniae es un patógeno conocido desde hace tan solo aproximadamente 15 años que puede causar, normalmente, infecciones del aparato respiratorio, tales como sinusitis, faringitis, bronquitis y neumonía. Los estudios seroepidemiológicos indican que Chlamydia pneumoniae está muy extendida con prevalencias de anticuerpos de más del 50 %.

Sin embargo, finalmente la relevancia clínica de Chlamydia pneumoniae no se ha aclarado de forma definitiva. En el marco de la red de competencia del BMBF (Ministerio de Educación e Investigación) "neumonía extrahospitalaria" (CAPNETZ) , actualmente se intenta aclarar la importancia del patógeno en la neumonía extrahospitalaria, lo que 65 resulta, sin embargo, extremadamente difícil debido a dificultades metodológicas en el diagnóstico de laboratorio, particularmente en la serología. Sin embargo, es aún más difícil estimar la relevancia del patógeno en enfermedades extrapulmonares. Es de importancia clave y también en cuanto a la política sanitaria y la economía nacional la cuestión de si Chlamydia pneumoniae interviene en la aterogénesis y, por tanto, también es corresponsable de las enfermedades sociales infarto cardiaco e ictus.

Chlamydia psittaci es el patógeno de la ornitosis o también de la psitacosis. A este respecto se trata de una zooantroponosis que se transmite al ser humano, por norma general, por aves decorativas o de producción infectadas mediante secreción y excreción de secreciones y excrementos que contienen patógeno, por vía aérea o, más infrecuentemente, a través del contacto directo. Por tanto, están en riesgo de infección, además de los dueños de aves decorativas y de producción, sobre todo los pajareros y los empleados en la industria procesadora de aves. Globalmente, la enfermedad en Alemania se ha hecho poco frecuente, no obstante, debido al difícil diagnóstico se ha de partir de una cifra desconocida relativamente alta.

La principal forma de manifestación de la infección es una neumonía atípica que puede ir acompañada de una sintomatología sistémica grave. No tratada, la infección puede tener un curso letal. Hasta ahora no se ha observado una transmisión de persona a persona, sin embargo, el patógeno se considera altamente contagioso y se clasifica, según el reglamento de sustancias biológicas, en el nivel 3 de seguridad de laboratorio.

Además de esto, Chlamydia psittaci tiene una gran importancia económica en el ámbito de la tenencia de animales de producción, donde pueden aparecer infecciones graves de evolución sistémica y que tienen en cabañas infectadas, particularmente en ovejas, sin embargo, también otros animales de producción, elevados índices de abortos.

El diagnóstico de infecciones por clamidias generalmente es difícil, complejo y caro. Para la comprobación de infecciones crónicas por Chlamydia trachomatis hasta ahora no están disponibles procedimientos de comprobación suficientemente sensibles, normalizados y fáciles de evaluar que, además, no generen resultados de falsos positivos.

La comprobación de una infección por Chlamydia trachomatis hasta ahora se ha llevado a cabo, por ejemplo, con ensayos de amplificación de ácido nucleico (NAAT, nucleic acid amplification test) . Estos procedimientos se llevaron a cabo para la comprobación de infecciones genitales de forma rutinaria en laboratorios clínicos. Sin embargo, tales ensayos disponibles en el mercado son bastante caros y demasiado complejos para utilizarlos a gran escala. Precisamente debido a la elevada selectividad de este procedimiento de ensayo existe el riesgo de contaminaciones cruzadas o de resultados de ensayo erróneos debido a una incorrecta manipulación de las muestras. Por tanto, este procedimiento de ensayo requiere una gran atención con respecto al control de calidad y la formación del personal

1. Procedimiento para la comprobación selectiva de infecciones por Chlamydia trachomatis y para la averiguación de si se trata de una infección aguda por Chlamydia pneumoniae o de una infección crónica por Chlamydia trachomatis o de una infección aguda por Chlamydia trachomatis, caracterizado por que se usan al menos tres antígenos para la comprobación de anticuerpos en muestras, estando seleccionados los antígenos del grupo compuesto por: CT017, CT098, CT318-L1P, CT431, CT456-TARP, CT603-TSAP y CT664 así como de fragmentos y subsecuencias de los anteriores antígenos, presentando los fragmentos al menos 15 aminoácidos consecutivos de los antígenos y al menos un epítopo específico de especie diagnósticamente relevante.

2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que se usan al menos cuatro antígenos para el procedimiento.

3. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que el procedimiento 15 para la detección de los anticuerpos comprende la comprobación de un complejo de antígeno/anticuerpo.

4. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que el procedimiento para la detección de los anticuerpos se realiza mediante un procedimiento de ensayo de ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) , transferencias de Western o Ensayos de Línea.

5. Procedimiento para el análisis del curso de la enfermedad in vitro de una infección por Chlamydia trachomatis, caracterizado por que en determinados intervalos de tiempo se toman muestras de un paciente y las muestras se examinan según el procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores.

6. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que las muestras a examinar se someten a una lisis celular antes de ponerse en contacto con los antígenos.

7. Kit de ensayo para la comprobación selectiva de infecciones por Chlamydia trachomatis, caracterizado por que el kit de ensayo contiene al menos tres antígenos seleccionados del grupo compuesto por: CT017, CT098, CT31830 L1P, CT431, CT456-TARP, CT603-TSAP y CT664.

8. Biochip, caracterizado por que presenta al menos tres antígenos seleccionados del grupo compuesto por: CT017, CT098, CT318-L1P, CT431, CT456-TARP, CT603-TSAP y CT664 para la comprobación de anticuerpos específicos de Chlamydia trachomatis.

9. Biochip de acuerdo con la reivindicación 8, caracterizado por que los antígenos específicos de Chlamydia trachomatis están aplicados sobre un punto de la membrana del biochip que está separado espacialmente de otros puntos sobre la membrana, sobre los cuales están aplicados otros antígenos.

10. Biochip de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, caracterizado por que, separados espacialmente de los antígenos específicos de Chlamydia trachomatis, están aplicados otros antígenos sobre la membrana que posibilitan una comprobación específica de Chlamydia pneumoniae o Chlamydia psittaci.

11. Uso de un antígeno para el diagnóstico diferencial de una infección por clamidias, concretamente para la 45 averiguación de si se trata de una infección aguda por Chlamydia pneumoniae, una infección crónica por Chlamydia trachomatis o una infección aguda por Chlamydia trachomatis, caracterizado por que el antígeno se selecciona de CT456-TARP así como subsecuencias de este antígeno que presentan al menos 20 aminoácidos consecutivos de la secuencia con la SEC ID Nº: 5 y al menos un epítopo específico de especie diagnósticamente relevante.