ARNds para tratar infecciones virales.

Una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble, que comprende una primera secuencia de SEQ ID NO 210 y una segunda secuencia de cadena de SEQ ID NO 314.

ARNds para tratar infecciones virales Antecedentes de la Invención Los virus de cadena de ARN positiva de ARN polimerasa dependientes de ARN constituyen una superfamilia grande de virus de muchas subfamilias distintas. Estos virus cubren tanto el reino vegetal como el animal causando patologías que varían desde fenotipos moderados hasta enfermedades debilitantes severas. La composición del supergrupo de polimerasa de virus de ARN de cadena positiva es como sigue. I. Picorna (HAV, polio, Coxsackie) , noda, como, nepo, poty, bymo, sobemovirus y loteovirus (amarillos, amarillo enano, y virus de hoja enrollada) . II. Carmo, tombus, diantovirus, pestivirus, toga, eco, dengue, virus de la hepatitis C, flavivirus. III. Tobamo, tobra, hordei, tricoma, alfa, rubi,

furovirus, virus de la hepatitis E, potex, carlatimovirus y virus de la mancha de hoja clorótica de la manzana. Los genomas de los virus de cadena positiva de ARN codifican ARN polimerasas dependientes de ARN que es la única proteína viral que contiene motivos conservados a lo largo de esta clase de virus. Esta conservación es significativa puesto que esta clase de virus contiene variabilidad filogenética, con lo que se puede predecir que hay muchas formas en los cuales los virus infectan las células y mantienen una replicación estable. Además de las muchas diferencias,

todos los virus en esta clase dependen de una etapa fundamental de la transcripción de la cadena de ARN positiva dependiente de ARN. Puesto que esta etapa es esencial para el ciclo vital del virus este virus usa muchas proteínas del anfitrión para iniciar y mantener la actividad de la ARN polimerasa dependiente de ARN. Sin la interacción de los factores del anfitrión los virus serian incapaces de sobrevivir. Por lo tanto una intervención terapéutica posible para inhibir la infección viral consistiría en bloquear la interacción anfitrión virus. Si los factores del anfitrión esencial para el

virus pero no esencial para el anfitrión pueden ser manipulados, entonces podría alcanzarse la capacidad para bloquear la infección viral. Apuntar a proteínas del anfitrión ha demostrado ser una metodología eficaz para perturbar la infección viral y la replicación de VIH, HCV, viruela, etc.

El significado de los virus de ARN de cadena positiva es el impacto sobre la salud y viabilidad humanas. Varios virus de cadena positiva de ARN infecta en humanos y en muchos casos lleva a enfermedades y/o morbilidades debilitantes.

Varios virus con una carga particular sobre la salud humana son el virus del dengue (fiebre hemorrágica) , HCV (enfermedad crónica del hígado, fallo, fibrosis y cáncer de hígado) y HEV (fallo hepático fulminante) . Las enfermedades del hígado y la sangre causadas por estos virus producen millones de muertes en el mundo y cuesta a la industria del cuidado de la salud billones de dólares en enfermedades relacionadas con el hígado. El significado del hallazgo de terapias para controlar la infección viral es grande y mejoraría la salud humana alrededor del mundo.

Como tal existe una necesidad no satisfecha por un tratamiento efectivo de infecciones causadas por HCV y otros virus de ARN de cadena positiva (listados anteriormente) .

Esta especificación también se relaciona con moléculas de ARN de cadena doble (dsARN) . Las dsARN han demostrado bloquear la expresión genética en un mecanismo regulador altamente conservado conocido como interferencia por ARN (ARNi) . La WO 99/32b19 (Fire et al.) divulga el uso de dsARN de al menos 25 nucleótidos de longitud para inhibir la 35 expresión de genes en C. elegans. El dsARN también ha demostrado degradar ARN objetivo en otros organismos incluyendo plantas (véase, por ejemplo, WO 99/53050, Waterhouse et al.; y WO 99/61631, Heifetz et al.) , Drosophila (véase, e.g., Yang, D., et al Curr. Biol. (2000) 10: 1191-1200) , and mammals (véase WO 00/44895, Limmer; y DE 101 00 586.5, Kreutzer at al.) . Este mecanismo natural se ha convertido ahora en el foco del desarrollo de una nueva clase de agentes farmacéuticos para tratar trastornos que son causados por la regulación aberrante o indeseada de un gen tal

como la divulgada en WO 2005 119262.

Las publicaciones PCT WO 20030 16572, WO 2003070750, WO 2005028650 y WO 2007001928 divulgan esfuerzos previos para desarrollar medicamentos de ARNi basados en ácidos nucleicos para el tratamiento de una enfermedad causada por infecciones de HCV. La publicación PCT WO 2006074346 divulga esfuerzos previos para tratar la infección por RSV utilizando medicamentos de ARNi.

A pesar de los significativos avances en los campos del ARNi y los avances en el tratamiento de procesos patológicos mediados por infecciones virales, sigue habiendo una necesidad por agentes que inhiban la progresión de la infección viral y que puedan tratar enfermedades asociadas con infecciones virales. La presente invención divulga compuestos, composiciones y métodos para satisfacer esta necesidad, y proveer otros beneficios también.

Resumen de la invención 50 La invención provee una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble, que comprende una primera secuencia de cadena de SEQ ID NO 210 y una segunda secuencia de cadena de SEQ ID NO 314.

Adicionalmente, la invención provee una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble, que comprende una secuencia de cadena antisentido de SEQ ID NO 314 y una secuencia de cadena en sentido de SEQ ID NO 210.

La molécula de ácido nucleico de doble cadena puede comprender al menos un nucleótido modificado químicamente.

El nucleótido modificado puede ser escogido del grupo consistente de: Un nucleótido modificado 2´- O-metilo; un nucleótido que comprende un grupo 5´- fósforotiorato; un nucleótido terminal enlazado a un derivado colesterilo o un grupo de bisdecilamida del ácido dodecanoico; un nucleótido 2´- desoxi-2´-fluoro modificado; un nucleótido 2´-desoxi modificado; un nucleótido asegurado; un nucleótido abásico; un nucleótido 2´-amino modificado; un nucleótido 2´-alquilo modificado; un morfolino nucleótido; un fosforamidato; y un nucleótido que comprende una base no natural.

En una realización la molécula por contacto con una célula que expresa gen PI4KA, inhibe la expresión de dicho gen.

La invención también provee una célula que comprende la molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de acuerdo con las realizaciones.

La invención provee una composición farmacéutica que comprende la molécula de ácido ribonucleico de doble cadena de acuerdo con las realizaciones de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La composición farmacéutica puede comprender un liposoma completamente encapsulado, un complejo lipídico y un polímero. La invención también provee un método in vitro para inhibir la expresión del gen PI4KA en una célula, comprendiendo el método las etapas de:

a. introducir en la célula una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de acuerdo con las realizaciones de la invención,

b. mantener la célula producida en la etapa a durante un tiempo suficiente para obtener la degradación del transcripto 20 de ARNn del gen PI4KA, inhibiendo por lo tanto la expresión del gen PI4KA en la célula.

Adicionalmente, la invención provee una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de acuerdo con realizaciones de la invención para uso como medicamento.

La invención provee el uso de una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de acuerdo con realizaciones de la invención para la manufactura de un medicamento.

La invención también provee la molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de acuerdo con realizaciones de la invención para uso como medicamento contra infecciones con virus de ARN de cadena positiva, en donde el virus de ARN de cadena positiva es el virus de la hepatitis C, (HCV) .

Adicionalmente, la invención provee el uso de la molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de acuerdo con realizaciones de la invención para la manufactura de un medicamento contra infección con virus de ARN de cadena positiva, en donde el virus de ARN de cadena positiva es el virus de la hepatitis C (HCV) .

Resumen de la divulgación La divulgación provee composiciones y métodos para tratar la infección por virus de ARN de cadena positiva (tales como HCV, HPV, dengue y polio) , reduciendo el nivel o actividad del factor anfitrión humano fosfatidilinositol 4-quinasa, catalítico, beta polipéptido (PIK4CB; NM_002651) , y fosfatidilinositol 4-quinasa, catalítico, alfa polipéptido (PIK4CA;

NM_002650) en células donde tales virus pueden replicarse, tal como el hígado.

Se divulga aquí que... [Seguir leyendo]

1. Una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble, que comprende una primera secuencia de SEQ ID NO 210 y una segunda secuencia de cadena de SEQ ID NO 314.

2. Una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble, que comprende una secuencia de cadena antisentido de SEQ 5 ID NO 314 y una secuencia de cadena en sentido de SEQ ID NO 210.

3. La molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de las reivindicaciones 1 o 2 que comprende al menos un nucleótido modificado químicamente.

4. La molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de la reivindicación 3, en donde dicho nucleótido modificado se escoge del grupo consistente del nucleótido modificado 2´-O-metilo, un nucleótido que comprende un grupo 5´

fósforotioato; un nucleótido terminal enlazado a un derivado colesterilo o a un grupo bisdecilamida de ácido dodecanoico; un nucleótido modificado 2´-desoxi-2´-fluoro; un nucleótido modificado 2´-desoxi; un nucleótido asegurado; un nucleótido abásico; un nucleótido modificado 2´-amino; un nucleótido modificado 2´-alquilo; un nucleótido morfolino; un fosforamidato; y un nucleótido que comprende una base no natural.

5. La molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la 15 molécula por contacto con una célula que expresa un gen PI4KA, inhibe la expresión de dicho gen.

6. Una célula que comprende una molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

7. Una composición farmacéutica que comprende la molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Una composición farmacéutica de la reivindicación 7, que comprende un liposoma completamente encapsulado, un complejo lipídico y/o un polímero.

9. Un método in vitro para inhibir la expresión del gen de PI4KA en una célula, comprendiendo el método las etapas de:

a. Introducir en la célula un ácido ribonucleico de cadena doble de las reivindicaciones 1 a 5, y

b. Mantener la célula producida en la etapa a durante un tiempo suficiente para obtener la degradación del transcripto 25 de ARNm en PI4KA, inhibiendo por lo tanto la expresión del gen PI4KA en la célula.

10. La molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de las reivindicaciones 1 a 5 para uso como un medicamento.

11. Uso de la molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de las reivindicaciones 1 a 5 para la manufactura de un medicamento.

12. La molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de las reivindicaciones 1 a 5 para uso como un medicamento

contra infección por virus de ARN de cadena positiva, en donde el virus de ARN de cadena positiva es el virus de la hepatitis C (HCV) .

13. Uso de la molécula de ácido ribonucleico de cadena doble de las reivindicaciones 1 a 5 para la manufactura de un medicamento contra una infección por virus de ARN de cadena positiva, en donde el virus de ARN de cadena positiva es el virus de la hepatitis C, (HCV) .