Anticuerpos que se unen a CCX-CKR2.

Anticuerpo que se une a CCX-CKR2, que comprende:

i) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 12 y las regionesdeterminantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 14;

o

ii) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 16 y las regionesdeterminantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 18

Anticuerpos que se unen a CCX-CKR2.

Antecedentes de la invención Las quimiocinas constituyen una familia de citocinas pequeñas que son producidas, entre otros, en la inflamación y que regulan el reclutamiento, activación y proliferación de los leucocitos (Baggiolini M. et al., Adv. Immunol. 55:97179, 1994; Springer T.A., Annu. Rev. Physiol. 57:827-872, 1995, y Schall T.J. y K.B. Bacon, Curr. Opin. Immunol. 6:865-873, 1994) . Las quimiocinas son capaces de inducir selectivamente la quimiotaxis de los elementos formados de la sangre (aparte de los glóbulos rojos) , incluyendo leucocitos tales como neutrófilos, monocitos, macrófagos, eosinófilos, basófilos, mastocitos y linfocitos, incluyendo las células T y las células B. Además de estimular la quimiotaxis, las quimiocinas pueden inducir selectivamente otros cambios en las células sensibles, incluyendo cambios de la forma celular, incrementos transitorios de la concentración de iones de calcio libre intracelular (Ca2+) , la exocitosis de gránulos, la regulación positiva de integrina, la formación de lípidos bioactivos (por ejemplo leucotrienos) , la expresión de citocinas y el estallido respiratorio, asociados a la activación, crecimiento y proliferación de los leucocitos. De esta manera, las quimiocinas son inductores tempranos de la respuesta inflamatoria, causando la liberación de mediadores inflamatorios, la quimiotaxis y la extravasación a los sitios de infección o de inflamación.

Se distinguen dos subfamilias de quimiocinas, denominadas quimiocinas CXC y CC, por la disposición de los primeros dos de cuatro residuos cisteína conservados, los cuales se encuentran separados por un aminoácido (tal como en las quimiocinas CXC SDF-1, IL-8, IP-10, MIG, PF4, ENA-78, GCP-2, GROa, GROº, GROy, NAP-2, NAP-4, I-TAC) o son residuos contiguos (tal como en las quimiocinas CC MIP-1a, MIP-1º, RANTES, MCP-1, MCP-2, MCP3, I-309) . La mayoría de quimiocinas CXC atraen los leucocitos neutrófilos. Por ejemplo, las quimiocinas CXC interleucina-8 (IL-8) , el factor plaquetario 4 (PF4) y el péptido 2 activador de neutrófilos (NAP-2) son potentes quimioatrayentes y activadores de neutrófilos. Las quimiocinas CXC denominadas MIG (monocinas inducidas por el interferón gamma) e IP-10 (proteína de 10 kDa inducible por el interferón-y) son particularmente activas en la inducción de la quimiotaxis de los linfocitos sanguíneos periféricos activados. Las quimiocinas CC generalmente son menos selectivas y pueden atraer una diversidad de tipos celulares de leucocitos, incluyendo monocitos, eosinófilos, basófilos, linfocitos T, granulocitos y células asesinas naturales. Las quimiocinas CC tales como las proteínas quimotácticas 1-3 de monocitos humanos (MCP-1, MCP-2 y MCP-3) , RANTES (células T normales expresadas y secretadas) y las proteínas inflamatorias 1a y 1º de macrófagos (MIP-1a y MIP-1º) han sido caracterizadas como quimioatrayentes y activadoras de monocitos o linfocitos, pero aparentemente no son quimioatrayentes de los neutrófilos.

Las quimiocinas CC y CXC actúan mediante receptores que pertenecen a una superfamilia de siete receptores acoplados a proteína G transmembranales (Murphy P.M., Pharmacol. Rev. 52:145-176, 2000) . Esta familia de receptores acoplados a proteína G comprende un grupo de gran tamaño de proteínas integrales de membrana que contienen siete regiones transmembranarias. Los receptores pueden acoplarse a la proteína G, que son proteínas reguladoras heterotriméricas capaces de unirse a GTP y mediar en la transducción de señales de receptores acoplados, por ejemplo mediante la producción de mediadores intracelulares. Además, los receptores de quimiocinas pueden actuar independientemente del acoplamiento de las proteínas G. Por ejemplo, el receptor Duffy expresado predominantemente sobre los glóbulos rojos es un receptor promiscuo de la unión de quimiocinas que se cree actúa como una quimiocina, eliminando quimiocinas del ambiente circulatorio.

En general, las interacciones de quimiocina y receptor de quimiocina tienden a ser promiscuas en el aspecto de que una quimiocina puede unirse a muchos receptores de quimiocina y, a la inversa, un único receptor de quimiocina puede interactuar con varias quimiocinas. Existen unas cuantas excepciones a esta regla; una de estas excepciones es la interacción entre SDF-1 y CXCR4 (Bleul et al., J. Exp. Med. 184 (3) :1101-9, 1996; Oberlin et al., Nature 382 (6594) :833-5, 1996) . Originalmente identificado como un factor estimulante del crecimiento de células pre-B (Nagasawa et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 (6) :2305-9, 1994) , SDF-1 es el único ligando humano informado de CXCR4. El gen SDF-1 codifica dos proteínas, denominadas SDF-1a y SDF-1º, mediante corte y empalme alternativo. Estas dos proteínas son idénticas excepto por cuatro residuos aminoácidos que se encuentran presentes en el extremo N-terminal de SDF-1º y ausentes de SDF-1a.

Existen muchos aspectos de la señalización y selectividad para ligandos de los receptores de quimiocinas que anteriormente no se entendían. Por ejemplo, existen varios receptores huérfanos para los que no se ha determinado ninguna función. El RDC1, por ejemplo, aunque anteriormente se creía que era un receptor del péptido intestinal vasoactivo (PIV) , hasta recientemente no se ha considerado un receptor huérfano debido a que no se ha identificado cuál es su ligando endógeno. Ver, por ejemplo, Cook et al., FEBS Lett. 300 (2) :149-152, 1992.

Recientemente se ha determinado que el RDC1, que ha pasado a denominarse CCX-CKR2, se une a las quimiocinas SDF-1 e I-TAC. Ver, por ejemplo, el documento PCT nº US04/3487 (WO 2005/044792) y las solicitudes de patente US nº 10/698.541 (US 2004/0170634 A1) , nº 10/912.638 (US 2005/0074826 A1) y nº 11/050.345 (US 2005/0074826 A1) .

Breve sumario de la invención La presente invención proporciona un anticuerpo que se une a CCX-CKR2, que comprende: i) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 12 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 14 o ii) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 16 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 18.

En algunas formas de realización, el anticuerpo se une a un marcador detectable. En algunas formas de realización comprendidas dentro del alcance de la invención según las reivindicaciones, el anticuerpo se une a un isótopo radioactivo o a un compuesto químico citotóxico.

En algunas formas de realización, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En algunas formas de realización, el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo. En algunas formas de realización, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

Un anticuerpo según la invención, según las reivindicaciones, comprende las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 12 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 14. En algunas formas de realización, el anticuerpo comprende SEC ID nº 12 y/o SEC ID nº 14.

Un anticuerpo según la invención, según las reivindicaciones, comprende las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 16 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 18. En algunas formas de realización, el anticuerpo comprende SEC ID nº 16 y/o SEC ID nº 18.

La presente invención proporciona además métodos para detectar una célula que expresa CCX-CKR2 en una muestra biológica. Según la invención, los métodos comprenden poner en contacto la muestra biológica con un anticuerpo y detectar la presencia del anticuerpo, en la que el anticuerpo se une a CCX-CKR2 y comprende: i) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 12 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 14, o ii) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 16 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 18.

En algunas formas de realización, el anticuerpo se une a un marcador detectable.

La presente invención proporciona además métodos para identificar un modulador de CCX-CKR2. Según la invención, el método comprende:

(a) combinar con un agente de ensayo (i) una célula que expresa un polipéptido CCX-CKR2, en la que dicha célula no es una célula humana in vivo, o (ii) un extracto de una célula que expresa un polipéptido CCX-CKR2, y

(b) llevar a cabo un ensayo para detectar si el agente de ensayo compite con un anticuerpo competidor para la unión al polipéptido CCX-CKR2, en el que el anticuerpo competidor se une a CCX-CKR2 y comprende: i) las regiones determinantes... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo que se une a CCX-CKR2, que comprende:

i) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 12 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 14; o ii) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 16 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 18. 10

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, que comprende las CDR de Kabat de SEC ID nº 12 y las CDR de Kabat de SEC ID nº 14.

3. Anticuerpo según la reivindicación 1 o 2, que comprende las SEC ID nº 12 y SEC ID nº 14. 15

4. Anticuerpo según la reivindicación 1, que comprende las CDR de Kabat de SEC ID nº 16 y las CDR de Kabat de SEC ID nº 18.

5. Anticuerpo según la reivindicación 1 o 4, que comprende las SEC ID nº 16 y SEC ID nº 18. 20

6. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el anticuerpo se enlaza a un marcador detectable.

7. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. 25

8. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

9. Método de detección de una célula que expresa CCX-CKR2 en una muestra biológica, comprendiendo el método

poner en contacto la muestra biológica con un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y detectar la 30 presencia del anticuerpo.

10. Método para identificar un modulador de CCX-CKR2, que comprende:

(a) combinar con un agente de ensayo: 35

i) una célula que expresa un polipéptido CCX-CKR2, en el que dicha célula no es una célula humana in vivo, o ii) un extracto de una célula que expresa un polipéptido CCX-CKR2; y 40

(b) llevar a cabo un ensayo para detectar si el agente de ensayo compite con un anticuerpo competidor para la unión al polipéptido CCX-CKR2, en el que el anticuerpo competidor es un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y en el que la competición entre el anticuerpo competidor y el agente de ensayo para la unión al polipéptido CCX-CKR2 es una indicación de que el agente de ensayo es un modulador de la 45 actividad de CCX-CKR2.

11. Método para someter a ensayo la eficacia de un agente de ensayo que modula la actividad de CCX-CKR2, comprendiendo el método:

(a) administrar el reactivo de ensayo a un primer animal no humano,

(b) administrar a un segundo animal no humano un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5; y

(c) comparar el efecto del reactivo de ensayo sobre el primer animal no humano con el efecto del anticuerpo 55 sobre el segundo animal no humano, determinando de esta manera la eficacia de un agente de ensayo.

12. Polinucleótido codificante de un anticuerpo quimérico que se une a CCX-CKR2, comprendiendo dicho anticuerpo quimérico:

i) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 12 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 14; o ii) las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 16 y las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 18. 65

13. Polinucleótido según la reivindicación 12, en el que el anticuerpo comprende las CDR de Kabat de SEC ID nº 12 y las CDR de Kabat de SEC ID nº 14.

14. Polinucleótido según la reivindicación 12, en el que el anticuerpo comprende las CDR de Kabat de SEC ID nº 16 5 y las CDR de Kabat de SEC ID nº 18.

15. Método de producción de un anticuerpo según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo quimérico, comprendiendo el método:

ligar funcionalmente los polinucleótidos codificantes de las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de Kabat de SEC ID nº 12 y SEC ID nº 14 o SEC ID nº 16 y SEC ID nº 18 con polinucleótidos heterólogos codificantes de por lo menos las regiones marco de una cadena pesada o ligera de un anticuerpo, con el fin de formar polinucleótidos de fusión codificantes de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo;

y

expresar las cadenas pesada y ligera a partir de los polinucleótidos de fusión.