Anticuerpos humanos contra la rabia y usos de los mismos.

Un anticuerpo humano aislado, o porción de unión a antígeno del mismo,

que se une a proteína G del virus de la rabia e inhibe la capacidad del virus de infectar células, y que comprende una secuencia CDR3 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 5, una secuencia CDR3 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 8, una secuencia CDR2 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 4, una secuencia CDR2 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 7, una secuencia CDR1 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 3 y una secuencia CDR1 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 6.

Anticuerpos humanos contra la rabia y usos de los mismos

Antecedentes de la invención La rabia es una encefalitis progresiva aguda causada por infección con un virus de ARN de la familia Rhabdoviridae (género lisavirus) . Aunque los fallecimientos humanos por rabia son raros en las naciones desarrolladas (hay habitualmente menos de 5 muertes en los Estados Unidos cada año) , se reseñan números significativos de muertes, por ejemplo en India, donde 50.000 personas mueren por la enfermedad y más de 500.000 son tratadas. Incluso en los Estados Unidos, de 15.000 a 40.000 personas reciben tratamiento antirrábico cada año. Típicamente, los perros son el reservorio principal de la enfermedad, pero otros mamíferos tales como mapaches, mofetas, murciélagos y zorros son reservorios frecuentes. La transmisión del virus desde un reservorio animal a seres humanos ocurre habitualmente mediante un mordisco o arañazo que atraviesa la piel. Puesto que la rabia en seres humanos es casi siempre letal, incluso las infecciones dudosas deben tratarse con un régimen de tratamiento agresivo postexposición.

El tratamiento postexposición de la rabia en seres humanos consiste en una higiene apropiada de la herida, la administración local de inmunoglobulina sérica antirrábica infiltrada en y alrededor de la herida y la administración de múltiples dosis de vacuna de la rabia, habitualmente durante varios días y semanas (para una revisión de la profilaxis contra la rabia véase, por ejemplo, Rupprecht y Gibbons et al., N. Engl. J. Med. 351: 25 (2004) ) . La higiene apropiada de la herida puede reducir la cantidad de virus que sobreviven para entrar en el paciente. La infiltración de la zona con inmunoglobulina sérica antirrábica puede unirse al virus de la rabia y ayudar a eliminarlo, reduciendo así la carga vírica (por inmunización pasiva) . La administración de múltiples dosis de vacuna de la rabia (inmunización activa) , habitualmente en forma de una primera dosis seguida de dosis de recuerdo posteriores, permite al paciente producir una fuerte inmunidad activa, incluyendo respuestas humoral y celular. Las fuentes actuales de inmunoglobulina sérica antirrábica se obtienen de la sangre de donantes humanos vacunados. Otras fuente de inmunoglobulina sérica antirrábica, por ejemplo, de equinos o murinos, se consideran inaceptables. Las fuentes actuales de vacunas de la rabia se producen en líneas celulares, se inactivan químicamente y se liofilizan. Aunque estos agentes, cuando se administran a tiempo, son altamente eficaces, permanecen ciertas trabas.

Por ejemplo, hay pocos fabricantes de estos agentes antirrábicos y siguen siendo relativamente caros, especialmente en los países en desarrollo donde son más necesarios. Además, la inmunoglobulina sérica antirrábica humana, debido a que se recoge del suero de donantes humanos, debe purificarse en gran medida para evitar la transmisión de cualquier agente accidental. Además, la vacuna antirrábica requiere un cultivo celular de trabajo intensivo y extensas etapas de inactivación y purificación. En consecuencia, son necesarias inmunoterapias mejoradas para tratar y prevenir la infección por rabia.

El documento WO 2005/002511 describe el tratamiento y la prevención de la rabia con una mezcla de anticuerpos neutralizantes del virus de la rabia, a saber, los anticuerpos humanos SOJA, SOJB y SO57, a cada uno de los cuales se hace referencia también como MAb JA, MAb JB.1 y MAb 57, respectivamente. Kankanamge et al. (Microbiology and immunology, 2003, vol. 47, nº 7, páginas 507-519) describe la cartografía del epítopo conformacional sensible a pH bajo de glucoproteína del virus de la rabia reconocido por el anticuerpo monoclonal nº 30-44. Ray et al. (Clinical and experimental immunology, 2001, vol. 125, nº 1, páginas 94-101) describe la selección de fragmentos variables monocatenarios (scFv) frente al antígeno de glucoproteína del virus de la rabia de una colección de presentación en fago de scFV sintéticos humanos y su fusión con la región Fc de IgG1 humana. Enssle et al. (Hybridoma, 1991, vol. 10, nº 5, páginas 547-556) describe un anticuerpo monoclonal humano específico de rabia que protege a ratones frente a la rabia letal.

Sumario de la invención La presente invención, como se define en las reivindicaciones, resuelve los problemas anteriores al proporcionar un anticuerpo monoclonal antirrábico totalmente humano recombinante que se une específicamente a una amplia variedad de aislamientos de virus de la rabia e inhibe la capacidad del virus de infectar células.

En una realización, esto se demuestra por la capacidad de los anticuerpos de neutralizar (concretamente, inhibir o bloquear) el virus de la rabia in vitro (por ejemplo, en un ensayo de RFFIT) . En otra realización, esto se demuestra por la capacidad de los anticuerpos de inhibir la infectividad del virus de la rabia in vivo en un sujeto tal como un animal o un ser humano.

Los anticuerpos monoclonales humanos de la invención pueden prepararse eficazmente en cantidades prácticamente ilimitadas en forma altamente purificada. En consecuencia, los anticuerpos son adecuados para el pronóstico, diagnóstico y/o tratamiento de un individuo expuesto, o sospechoso de haberse expuesto, a la rabia. Los anticuerpos de la invención son particularmente ventajosos para la profilaxis postexposición a rabia (PPE) ya que eliminan la necesidad de una fuente donante de inmunoglobulina sérica antirrábica humana. Los anticuerpos pueden producirse usando una variedad de técnicas para preparar anticuerpos humanos conocidas en la materia. Por ejemplo, como se ejemplifica en la presente memoria, los anticuerpos pueden generarse en animales transgénicos que expresan segmentos de genes de inmunoglobulina humana, por ejemplo, ratones transgénicos que comprenden un locus de Ig humana. Además, los anticuerpos pueden administrarse solos o en combinación, por ejemplo, con una vacuna antivirus de la rabia u otros anticuerpos, para aumentar los índices de supervivencia de sujetos (por ejemplo, animales y seres humanos) infectados con virus de la rabia.

En consecuencia, la invención proporciona:

- un anticuerpo aislado, o porción de unión a antígeno del mismo, que se une a la proteína G del virus de la rabia e inhibe la capacidad del virus de infectar células, y que comprende una secuencia CDR3 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 5, una secuencia CDR3 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 8, una secuencia CDR2 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 4, una secuencia CDR2 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 7, una secuencia CDR1 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 3 y una secuencia CDR1 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 6;

- una composición que comprende el anticuerpo de la invención, o porción de antígeno del mismo, en un portador farmacéuticamente aceptable;

- un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de anticuerpo del anticuerpo de la invención, siendo dicho ácido nucleico idéntico a la SEQ ID NO:13, en combinación con un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena ligera de anticuerpo de la invención, siendo dicho ácido nucleico idéntico a la SEQ ID NO: 14;

- un vector de expresión que comprende (i) un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de anticuerpo del anticuerpo de la invención, siendo dicho ácido nucleico idéntico a la SEQ ID NO:13 y (ii) un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena ligera de anticuerpo de la invención, siendo dicho ácido nucleico idéntico a la SEQ ID NO:14;

- una célula hospedadora que comprende el vector de expresión de la invención; y

- un anticuerpo de la invención, o porción de unión a antígeno del mismo, o una composición de la invención para uso en un procedimiento de tratamiento de infección por rabia en un cuerpo humano o animal, en la que el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, se administra solo o en combinación con otro agente terapéutico.

Los anticuerpos de la invención, o porciones de unión a antígeno de los mismos, se unen específicamente a glucoproteína G del virus de la rabia. Los anticuerpos, o porciones de unión a antígeno de los mismos, se unen específicamente a un epítopo en la mitad N-terminal de la glucoproteína G del virus de la rabia, concretamente, entre los residuos aminoacídicos 19-422. En otra realización, el epítopo de glucoproteína G de la rabia comprende los residuos aminoacídicos 336-442. En... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo humano aislado, o porción de unión a antígeno del mismo, que se une a proteína G del virus de la rabia e inhibe la capacidad del virus de infectar células, y que comprende una secuencia CDR3 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 5, una secuencia CDR3 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 8, una secuencia CDR2 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 4, una secuencia CDR2 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 7, una secuencia CDR1 de la región variable de cadena pesada que comprende la SEQ ID NO: 3 y una secuencia CDR1 de la región variable de cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 6.

2. El anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1 que comprende las secuencias aminoacídicas de la región variable de cadena pesada y ligera mostradas en los residuos 20 a 144 de la SEQ ID NO: 1 y los residuos 21 a 127 de la SEQ ID NO: 2, respectivamente.

3. El anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1 que comprende las secuencias aminoacídicas de la región variable de cadena pesada mostrada en los residuos 20 a 144 de la SEQ ID NO: 1.

4. El anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1 que comprende las secuencias aminoacídicas de la región variable de cadena ligera mostrada en los residuos 21 a 127 de la SEQ ID NO: 2.

5. El anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo:

(a) inhibe la unión de virus de la rabia a células de mamífero; o

(b) inhibe la unión de proteína G de virus de la rabia a células de mamífero.

6. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo es un anticuerpo completo.

7. Un polipéptido aislado que comprende la porción de unión a antígeno de un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

8. El anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, es un anticuerpo monocatenario o un fragmento Fab.

9. El anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, está ligado a un marcaje o toxina.

10. Una composición que comprende el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en un portador farmacéuticamente aceptable.

11. Un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de anticuerpo del anticuerpo de la reivindicación 1, siendo dicho ácido nucleico idéntico a la SEQ ID NO:13, en combinación con un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena ligera del anticuerpo de la reivindicación 1, siendo dicho ácido nucleico idéntico a la SEQ ID NO:14.

12. Un vector de expresión que comprende (i) un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de anticuerpo del anticuerpo de la reivindicación 1, siendo dicho ácido nucleico idéntico a la SEQ ID NO: 13 y (ii) un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena ligera del anticuerpo de la reivindicación 1, siendo dicho ácido nucleico idéntico a la SEQ ID NO: 14.

13. Una célula hospedadora que comprende los vectores de expresión de la reivindicación 11 o el vector de expresión de la reivindicación 12.

14. Un anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una composición de la reivindicación 10, para uso en un procedimiento de tratamiento de infección por rabia en un cuerpo humano o animal, en el que el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, se administra solo o en combinación con otro agente terapéutico.

15. El anticuerpo para uso, o porción de unión a antígeno del mismo para uso, o la composición para uso según la reivindicación 14, en el que el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, se administra por vía intravenosa, intramuscular o subcutánea al sujeto.

16. El anticuerpo para uso, o porción de unión a antígeno del mismo para uso, o composición para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 15, en el que el agente terapéutico es un segundo anticuerpo monoclonal

humano terapéutico o porción de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a un segundo aislamiento de la rabia.

17. El anticuerpo para uso, o porción de unión a antígeno del mismo para uso, según la reivindicación 14, en el que 5 el agente terapéutico es un agente antivírico o vacuna del virus de la rabia.

18. El anticuerpo para uso, o porción de unión a antígeno del mismo para uso, según la reivindicación 17, en el que la vacuna del virus de la rabia es una proteína G de virus de la rabia o fragmento de la misma.

19. Un anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una composición de la reivindicación 10, para uso en un procedimiento de tratamiento de infección por rabia en un cuerpo humano o animal, en el que el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, se administra en combinación con un segundo anticuerpo antivirus de la rabia humano, o porción de unión a antígeno del mismo.

20. Un anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una composición de la reivindicación 10, para uso en un procedimiento de tratamiento de infección por rabia en un cuerpo humano o animal, en el que el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, no se administra con un segundo agente.