Anticuerpos anti-MN y procedimientos de uso de los mismos.

Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene un sitio de unión a antígeno dirigido específicamentecontra una proteína MN,

en el que el sitio de unión a antígeno comprende un conjunto de secuencias de CDRde cadena pesada seleccionadas del grupo constituido por:

[3ee9] SEC ID Nº: 57, 63 y 70;

y un conjunto de secuencias de CDR de cadena ligera seleccionadas del grupo constituido por:

[3ee9] SEC ID Nº: 89, 93 y 97.

Anticuerpos anti-MN y procedimientos de uso de los mismos Antecedentes de la invención 1. Campo de la invención La presente invención se refiere a anticuerpos y/o fragmentos de los mismos que tienen especificidad por la proteína MN. La invención se refiere además a composiciones de anticuerpo y/o inmunoconjugado y a su uso en el tratamiento, prevención y/o diagnóstico de trastornos relacionados con la MN, por ejemplo cáncer.

2. Antecedentes La aparición de cáncer se asocia con mayor frecuencia al envejecimiento, según lo cual el 65 % de todos los casos nuevos de cáncer se registran para pacientes de 65 años de edad y mayores. El cáncer es la segunda causa principal de muerte en Estados Unidos, superada sólo por las enfermedades cardíacas. De hecho, la Sociedad Americana del Cáncer (American Cancer Society) ha estimado que 1 de cada 4 personas morirán por cáncer en EE.UU., suponiendo que las tasas de mortalidad actuales no se muevan. Solo en EE.UU., en 2006 se esperan 1.399.790 casos y 564.830 muertes por cáncer. Cabe esperar que la mayoría de estos casos nuevos sean cánceres de colon (106.680) , pulmón (172.570) y mama (214.640) . Además, se ha previsto que tanto la incidencia como la prevalencia del cáncer aumenten aproximadamente un 15% en los próximos diez años, lo que refleja un índice de crecimiento medio de 1, 4% (American Cancer Society, 2006) .

Se ha descubierto que un antígeno asociado con tumores identificado recientemente, MN, una proteína de superficie celular, se expresa en una serie de carcinomas clínicos. Por ejemplo, se ha hallado que la MN se expresa ectópicamente en el 100% de los carcinomas de células renales (Liao, SY, Cancer Res., 1997, 57:2827 -2831) , el 100% de los carcinomas del esófago (Turner JR, Hum. Pathol., 199, 28:740 -744) , más del 90% de los carcinomas cervicouterinos (Liao, SY, Cancer Res., 1997, 57:2827 -2831) , el 76% de los carcinomas de colon malignos (Saarnio, J. et al., Am. J. Path., 1997, 153:279 -285) , el 80% de los carcinomas de pulmón de células no pequeñas (Vermylen P. et al., Eur. Respir. J., 1999, 14:806 -811) , y en el 48% de los cánceres de mama (Chia SK et al., J. Clin. Oncol., 2001, 19:3660 -3668) . Como otros antígenos asociados a tumores, la proteína MN también está presente en las células de un número limitado de tejidos normales, incluyendo, por ejemplo, estómago, mucosa del conducto biliar y las células normales de alta proliferación en el intestino delgado (Saarnio J. et al., J. Histochem. Cytochem., 1998, 46:497 -504) .

Se ha clonado y secuenciado el ADNc de la MN humana (Pastorek, et al., Oncogene, 1994; 9:2877 -2888) . La proteína predicha está constituida por un péptido señal, una secuencia relacionada con el proteoglicano, un dominio de anhidrasa carbónica, (anhidrasa carbónica IX o CA IX) , un segmento transmembrana y una cola intracelular corta. El dominio de la anhidrasa carbónica IX cataliza la hidratación reversible del dióxido de carbono en ácido carbónico. Esta actividad puede desempeñar un papel en la regulación de la acidificación local de la porción extracelular de los entornos tumorales, que, en consecuencia, puede conducir a la activación de proteasas y, por último, a metástasis. El documento WO 03/048328 describe anticuerpos neutralizantes anti-MN humanos.

También se ha investigado la regulación de la expresión de MN. En un aspecto, por ejemplo, la expresión de MN está regulada por aumento por la hipoxia. El complejo transcripcional conocido como factor inducible de hipoxia 1 (HIF-1) es un regulador de la expresión de MN. De acuerdo con esto, la MN se conoce como un gen efector por HIF1 que tiene implicaciones en la comprensión de la respuesta tumoral a la hipoxia (Wykoff CC et al., Cancer Res., 2000, 60:7075 -7083) . Además, la expresión de MN se correlaciona con los niveles de hipoxia tumoral y es un indicador pronóstico de la supervivencia global y supervivencia sin metástasis en el cáncer cervicouterino (Loncaster, JA et al., Cancer Res., 2000, 60:7075 -7083) . La expresión de MN también se correlaciona con una densidad vascular media alta, un estadio avanzado del cáncer, el grado de necrosis en el carcinoma de cabeza y cuello (Beasley NJP et al., Cancer Res., 2001, 61:5262 -5267) , escasa supervivencia en el carcinoma nasofaríngeo (Hui EP et al., Clin. Cancer Res., 2002, 8:2595 -2604) , necrosis tumoral, grado más alto, estado negativo al receptor de estrógenos, mayor índice de recaídas y escasa supervivencia para el carcinoma de mama invasivo (Chia SK et al., J. Clin. Oncol., 2001, 19:3660 -3668) . Por tanto, la expresión del antígeno MN se correlaciona con un pronóstico de supervivencia malo y con cánceres de mayor grado.

Nuevas y mejores terapias para luchar contra estos cánceres agresivos, en particular los dirigidos a la expresión de MN, son altamente deseables y representarían un avance en la técnica. Como tal, la presente invención divulga nuevas composiciones de anticuerpos e inmunoconjugados de los mismos que son útiles en el tratamiento, prevención y/o diagnóstico de los cánceres relacionados con la MN.

Sumario de la invención La presente invención se refiere a anticuerpos, por ejemplo anticuerpos monoclonales, o fragmentos de anticuerpos, que se unen a la proteína de superficie celular MN y que se pueden usar en el tratamiento, prevención y/o diagnóstico del cáncer. Los anticuerpos de la invención se pueden conjugar además con agentes citotóxicos, por

ejemplo monometillauristatina-E y/o coadministrarse o formularse con uno o más agentes anticancerosos adicionales. Los anticuerpos anti-MN e inmunoconjugados de la invención se pueden usar en los procedimientos de la invención para tratar y/o diagnosticar y/o vigilar cánceres, por ejemplo tumores sólidos.

En un aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, o una composición que incluye el anticuerpo o fragmento de anticuerpo, teniendo el anticuerpo o fragmento un sitio de unión a antígeno que está específicamente dirigido a una proteína MN.

El sitio de unión a antígeno se selecciona de un conjunto de secuencias de CDR específicas que incluyen los siguientes conjuntos de seis CDR:

(a) [3ee9] SEC ID Nº: 57, 63, 70, 89, 93 y 97;

El sitio de unión a antígeno incluye un conjunto de secuencias de CDR de cadena pesada seleccionadas del grupo constituido por:

(a) [3ee9] SEC ID Nº: 57, 63 y 70;

El sitio de unión a antígeno incluye un conjunto de secuencias de CDR de cadena ligera seleccionadas del grupo constituido por:

(a) [3ee9] SEC ID Nº: 88, 93 y 97.

Los anticuerpos divulgados en el presente documento tienen sitios de unión a antígeno que contienen un par de regiones variables de cadena pesada y regiones variables de cadena ligera seleccionadas del grupo constituido por:

(a) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 133 y la región variable de cadena ligera SEC ID Nº 134;

(b) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 135 y la región variable de cadena ligera SEC ID Nº 36;

(c) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 137 y la región variable de cadena ligera SEC ID Nº: 138;

(d) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 139 y la región variable de cadena ligera de SEC ID Nº: 140;

(e) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 141 y la región variable de cadena ligera de SEC ID Nº: 142;

(f) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 143 y la región variable de cadena ligera SEC ID Nº 144;

(g) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 145 y la región variable de cadena ligera SEC ID Nº 146;

(h) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 147 y la región variable de cadena ligera SEC ID Nº: 148;

(i) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 149 y la región variable de cadena ligera SEC ID Nº 150; y

(j) la región variable de cadena pesada de SEC ID Nº: 151 y la región variable de cadena ligera SEC ID Nº:

152.

Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos de la invención se pueden unir a la proteína MN con una constante de disociación de 0, 15 nM a 50 nM.

En otro aspecto, los anticuerpos o fragmentos de la invención son anticuerpos IgG o fragmentos de IgG. Los anticuerpos o fragmentos también pueden ser anticuerpos IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgM, IgD, IgE, IgA, o IgM, fragmentos Fab, fragmentos F (ab') 2, fragmentos scFv, fragmentos Fv, diacuerpos, anticuerpos lineales, anticuerpos de cadena sencilla, anticuerpos bioespecíficos, anticuerpos multiespecíficos o anticuerpos quiméricos (p. ej., que comprenden una estructura de anticuerpo humano injertado... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene un sitio de unión a antígeno dirigido específicamente contra una proteína MN, en el que el sitio de unión a antígeno comprende un conjunto de secuencias de CDR de cadena pesada seleccionadas del grupo constituido por:

[3ee9] SEC ID Nº: 57, 63 y 70;

y un conjunto de secuencias de CDR de cadena ligera seleccionadas del grupo constituido por:

[3ee9] SEC ID Nº: 89, 93 y 97.

2. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se une a la proteína MN con una constante de disociación de 0, 15 nM a 50 nM.

3. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1-2, en el que el anticuerpo es una IgG, preferentemente IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3; IgM; IgD; IgE; IgA; IgM; fragmento Fab; fragmento F (ab') 2; fragmento scFv; fragmento Fv; un diacuerpo; anticuerpo lineal; anticuerpo monocatenario; anticuerpo biespecífico; anticuerpo quimérico o anticuerpo multiespecífico.

4. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, estando el 15 anticuerpo o fragmento de anticuerpo humanizado.

5. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, estando el anticuerpo o fragmento de anticuerpo conjugado con un agente citotóxico.

6. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la reivindicación 5, en el que el agente citotóxico se selecciona del grupo constituido por: monometilauristatina-E o un análogo funcional de la misma, monometilauristatina-F o 20 un análogo funcional de la misma, aplidina, azaribina, anastrozol, azacitidina, bleomicina, bortezomib, briostatina-1, busulfán, caliqueamicina, camptotecina, 10-hidroxicamptotecina, carmustina, celebrex, clorambucilo, cisplatino, irinotecán (CPT-I 1) , SN-38, carboplatino, cladribina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, docetaxel, dactinomicina, daunomicina glucurónido, daunorrubicina, dexametasona, dietilestilbestrol, doxorrubicina, doxorrubicina glucurónido, epirrubicina glucurónido, etinilestradiol, 25 estramustina, etopósido, etopósido glucurónido, etopósido fosfato, floxuridina (FUdR) , 3', 5'-O-dioleoil-FudR (FUdR-dO) , fludarabina, flutamida, fluorouracilo, fluoximesterona, gemcitabina, caproato de hidroxiprogesterona, hidroxiurea, idarrubicina, ifosfamida, L-asparaginasa, leucovorina, lomustina, mecloretamina, acetato de medroxiprogesterona, acetato de megestrol, melfalán, mercaptopurina, 6mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, mitramicina, mitomicina, mitotano, fenil butirato, prednisona,

procarbazina, paclitaxel, pentostatina, PSI-341, semustina estreptozocina, tamoxifeno, taxanos, taxol, propionato de testosterona, talidomida, tioguanina, tiotepa, tenipósido, topotecán, mostaza de uracilo, velcade, vinblastina, vinorelbina, vincristina, ricina, abrina, ribonucleasa, onconasa, rapLRl, DNasa I, enterotoxina A de Staphylococcus, proteína antivírica de la hierba carmín, gelonina, toxina diftérica, exotoxina de Pseudomonas y endotoxina de Pseudomonas o combinaciones de los mismos.

7. Una composición para usar en el tratamiento de un sujeto que tiene un cáncer relacionado con MN, opcionalmente cuando el cáncer es un tumor de, o que se origina en, mama, tracto respiratorio, pulmón, cerebro, órganos reproductores, tracto digestivo, colon, tracto urinario, riñón, esófago, cuello uterino, ojo, hígado, piel, cabeza, cuelo, tiroides y paratiroides, comprendiendo la composición un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y un agente anti-canceroso.

8. La composición para uso de acuerdo con la reivindicación 7, en la que el agente anti-canceroso se selecciona del grupo constituido por bleomicina, docetaxel (Taxotere) , doxorrubicina, edatrexato, erlotinib (Tarceva) , etopósido, finasterida (Proscar) , flutamida (Eulexin) , gemcitabina (Gemzar) , genitinib (Iresa) , acetato de goserelina (Zoladex) , granisetrón (Kytril) , imatinib (Gleevec) , irinotecán (Campto/Camptosar) , ondansetrón (Zofran) , paclitaxel (Taxol) , pegaspargasa (Oncaspar) , pilocarpina clorhidrato (Salagen) , porfímero sódico

(Photofrin) , interleucina-2 (Proleukin) , rituximab (Rituxan) , topotecán (Hycamtin) , trastuzumab (Herceptin) , Triapine, vincristina, tartrato de vinorelbina (Navelbine) , angiostatina, bevacizumab (Avastin®) , sorafenib (Nexavar®) , baculostatina, canstatina, maspina, anticuerpos o péptidos anti-VEGF, anticuerpos o péptidos anti-factor de crecimiento placentario, anticuerpos anti-Flk-1, anticuerpos o péptidos anti-Fit-1, péptidos de laminina, péptidos de fibronectina, inhibidores del activador de plasminógeno, inhibidores de la 50 metaloproteinasa tisular, interferones, interleucina 12, IP-IO, Gro-β, trombospondina, 2-metoxiestradiol, proteína relacionada con la proliferina, carboxiamidotriazol, CM101, Marimastat, polisulfato de pentosán, angiopoyetina 2, interferón alfa, herbimicina A, PNU145156E, fragmento de prolactina 16K, Linomida, talidomida, pentoxifilina, genisteína, TNP-470, endostatina, paclitaxel, acutina, cidofovir, vincristina, bleomicina, AGM-1470, factor plaquetario 4 y minociclina.

9. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento de anticuerpo del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Un anticuerpo IgG anti-MN codificado por la secuencia de nucleótidos SEC ID Nº: 153.