Anticuerpo anti-beta amiloide y usos del mismo.

Anticuerpo anti-beta amiloide humano aislado o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende unaregión variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena ligera (VL),

en el que la VH comprende unaprimera región determinante de la complementariedad (VHCDR1) con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 20, unaVHCDR2 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 21 y una VHCDR3 con la secuencia de aminoácidos SEQ IDNO: 22 y en el que la VL comprende una VLCDR1 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 23, una VLCDR2 conla secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 24 y una VLCDR3 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 25.

Anticuerpo anti-beta amiloide y usos del mismo Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere a nuevas moléculas de unión específicas, particularmente anticuerpos humanos así como fragmentos, derivados y variantes de los mismos que reconocen epítopos asociados con enfermedades, incluyendo neoepítopos, de proteínas que derivan de proteínas nativas endógenas, y que son predominantes en el cuerpo de un paciente en una forma variante y/o fuera de su contexto fisiológico normal. Además, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dichas moléculas de unión, anticuerpos y miméticos de los mismos en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, amiloidosis y patología beta-amiloide.

Antecedentes de la invención [0002] El éxito de la generación de anticuerpos monoclonales se basa en la fusión eficaz y selectiva de células B estimuladas por antígeno con una línea celular de mieloma murina seguido de la selección de híbridos que producen anticuerpos de forma estable como describieron originalmente Köhler y Milstein, Nature 256 (1975) , 495-497. Sin embargo, la utilidad terapéutica de los anticuerpos murinos en los seres humanos está dificultada por la respuesta de anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA) debido a su origen no humano. Las estrategias para preparar anticuerpos monoclonales humanos o semejantes a humanos han sido posibles mediante la ingeniería genética. Sin embargo, los métodos disponibles hasta ahora presentan el inconveniente de que no son adecuados para producir anticuerpos con las características de los producidos en el curso de una respuesta inmune fisiológica humana. Además, dichos anticuerpos pueden no ser lo suficientemente específicos debido a la reactividad cruzada con otras proteínas y/o la proteína diana en contexto con la función fisiológica normal. En el caso de la enfermedad de Alzheimer o de Parkinson, por ejemplo, se considera que los anticuerpos que también reaccionan de manera cruzada con alta afinidad con derivados fisiológicos de la proteína precursora del amiloide (APP) o alfa sinucleína presentan efectos secundarios relacionados con las funciones normales de las estructuras fisiológicas diana. A este respecto, una enfermedad autoinmune no deseada se induciría de forma completa -un riesgo difícilmente calculable en el diseño conceptual de experimentos de inmunización activa que emplean estructuras proteicas que, en forma variante, también ocurren fisiológicamente. Los efectos secundarios no relacionados con la estructura diana son, por ejemplo, reacciones anafilácticas, como se esperaría como efectos secundarios no deseados y temidos de la administración sistémica de proteínas exógenas. Según descubrimientos recientes, éste también puede ser el caso en los anticuerpos denominados humanizados, que surgen originariamente de organismos no humanos, habitualmente de ratones. Por otra parte, la inmunización activa con antígenos patológicos relevantes presenta el riesgo considerable de que los pacientes desarrollen anticuerpos y respuestas de células T que también reconocen variantes fisiológicas de dichas proteínas y, consecuentemente, dan lugar a una respuesta autoinmune peligrosa e incontrolable.

De este modo, existe una necesidad de proporcionar agentes que sean específicos para una diana implicada en un trastorno y que se toleren por el cuerpo humano.

Características de la invención [0004] El problema técnico que subyace a la presente invención se ha resuelto por las realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones.

La presente invención hace uso del descubrimiento sorprendente de que los anticuerpos también pueden estar dirigidos frente a variantes patofisiológicamente relevantes de proteínas endógenas, en particular frente a neoepítopos, que se forman debido a la alteración patológica de la de transcripción, traducción o modificación posterior a la transcripción o posterior a la traducción o procesamiento proteolítico o agregación. Dichos anticuerpos están dirigidos frente a proteínas endógenas que, debido a su nueva estructura que se desvía de la fisiología normal, se vuelven patofisiológicamente relevantes mediante el desarrollo de efectos patológicos. Por razones de tolerancia inmune, los anticuerpos conectados con la respuesta inmune correspondiente a neoepítopos en dichas variantes patológicas no presentan normalmente, sin embargo, ninguna reacción cruzada frente a las proteínas fisiológicamente funcionales, a diferencia del caso de las enfermedades autoinmunes. Esto se debe a que la formación de anticuerpos con reactividad cruzada potencial se suprime específicamente por los mecanismos conocidos de tolerancia, mientras que el desarrollo de una respuesta inmune a neoepítopos patológicos puede escapar de la tolerancia.

La presente invención está dirigida a anticuerpos humanos y fragmentos de unión a antígeno de los mismos que comprenden una región variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena ligera (VL) , en el que la VH comprende una primera región determinante de la complementariedad (VHCDR1) con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 20, una VHCDR2 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 21 y una VHCDR3 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 22, y en el que la VL comprende una VLCDR1 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 23, una VLCDR2 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 24 y una VLCDR3 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 25. Alternativamente, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado, xenogénico o quimérico humano-murino, siendo el último particularmente útil para los métodos de diagnóstico y estudios en animales. También están incluidas las composiciones terapéuticas que incluyen el anticuerpo o fragmentos activos del mismo, o agonistas y moléculas cognadas, o alternativamente, antagonistas del mismo, y los métodos de uso de dichas composiciones en la prevención, diagnóstico o tratamiento de una enfermedad usando estas composiciones, en el que una cantidad eficaz de la composición se administra a un paciente que necesita dicho tratamiento.

El fragmento de unión a antígeno del anticuerpo puede ser un fragmento de cadena única Fv, un fragmento F (ab') , un fragmento F (ab) y un fragmento F (ab') 2 o cualquier otro fragmento de unión a antígeno. En una realización específica, infra, el anticuerpo o fragmento del mismo es un anticuerpo humano de isotipo IgG.

La presente invención también se refiere a polinucleótidos que codifican al menos una región variable de una cadena de inmunoglobulina del anticuerpo de la invención. Dicha región variable comprende al menos la región determinante de la complementariedad (CDR) del anticuerpo de la presente invención.

Por consiguiente, la presente invención también engloba vectores que comprenden dichos polinucleótidos y células huésped transformadas con éstos así como su uso para la producción de un anticuerpo y moléculas de unión equivalentes que son específicas para neoepítopos que son indicativos y/o causales de la enfermedad de Alzheimer.

El anticuerpo, la cadena o cadenas de inmunoglobulina, fragmentos de unión del mismo y la unión a antígeno a dicho anticuerpo pueden usarse en composiciones farmacéuticas y de diagnóstico para inmunoterapia y diagnóstico, respectivamente. Sin embargo, se prefiere el uso de las composiciones anteriores en la preparación de un medicamento.

Por lo tanto, es un objeto particular de la presente invención proporcionar composiciones farmacéuticas para uso en el tratamiento o prevención o retraso del inicio de enfermedades asociadas con la acumulación y depósito del péptido beta amiloide en un sujeto, tal como enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down, disfunción cognitiva leve, angiopatía amiloide cerebral, demencia vascular, demencia multi-infarto. El tratamiento comprende administrar una concentración eficaz de un anticuerpo o derivado de anticuerpo al sujeto en el que el anticuerpo se une a la forma patológica de la proteína o el depósito de proteínas con una afinidad mayor que a la forma fisiológica normal de la proteína. Las realizaciones adicionales de la presente invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción.

Descripción breve de los dibujos [0012] Figura 1: Anticuerpo frente a beta-amiloide. A: Anticuerpos humanos. B: Tinción control con anticuerpo conocido frente a beta-amiloide humano. Los pacientes excepcionalmente estables clínicamente con enfermedad de Alzheimer contienen anticuerpos frente a las placas beta-amiloides. La tinción inmunohistoquímica con anticuerpos de pacientes excepcionalmente estables clínicamente en secciones cerebrales obtenidas de pacientes con enfermedad de Alzheimer confirmada patológicamente... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo anti-beta amiloide humano aislado o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende una región variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena ligera (VL) , en el que la VH comprende una primera región determinante de la complementariedad (VHCDR1) con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 20, una VHCDR2 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 21 y una VHCDR3 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 22 y en el que la VL comprende una VLCDR1 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 23, una VLCDR2 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 24 y una VLCDR3 con la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 25.

2. Anticuerpo o fragmento del mismo, según la reivindicación 1, que comprende las secuencias de aminoácidos de VH y VL tal como se representa en SEQ ID NO. 6 y SEQ ID NO: 8.

3. Anticuerpo o fragmento del mismo, según la reivindicación 1 ó 2, que se selecciona del grupo que consiste en un fragmento de cadena única Fv (scFv) , un fragmento F (ab') , un fragmento F (ab) y un fragmento F (ab') 2.

4. Polinucleótido que codifica el anticuerpo o fragmento del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Vector que comprende el polinucleótido según la reivindicación 4.

6. Célula huésped que comprende el polinucleótido según la reivindicación 4 o el vector según la reivindicación 5.

7. Método para preparar un anticuerpo específico de beta-amiloide o fragmento del mismo, comprendiendo dicho método

(a) cultivar la célula según la reivindicación 6; y

(b) aislar dicho anticuerpo o fragmento del mismo del cultivo.

8. Anticuerpo o fragmento del mismo codificado por el polinucleótido según la reivindicación 4 o que se puede obtener por el método según la reivindicación 7.

9. Anticuerpo o fragmento del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 u 8, que

(a) se marca de forma detectable, preferiblemente en el que el marcaje detectable se selecciona del grupo que consiste en una enzima, un radioisótopo, un fluoróforo y un metal pesado; o

(b) se une a un fármaco.

10. Composición que comprende el anticuerpo o fragmento del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, 8 ó 9, el polinucleótido según la reivindicación 4, el vector según la reivindicación 5 o la célula huésped según la reivindicación 6, preferiblemente en la que

(a) la composición es una composición farmacéutica y comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable, opcionalmente que comprende además un agente adicional útil para tratar la enfermedad de Alzheimer, seleccionado del grupo que consiste en moléculas orgánicas pequeñas, anticuerpos anti-Abeta y combinaciones de los mismos; o

(b) la composición es una composición o kit de diagnóstico y comprende además reactivos usados convencionalmente en métodos de diagnóstico basados en el sistema inmune o ácido nucleico.

11. Composición, según la reivindicación 10, que es una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

12. Composición, según la reivindicación 10 o la composición según la reivindicación 11 para uso según la reivindicación 11, que se diseña para ser administrada intravenosamente, intramuscularmente, subcutáneamente, intraperitonealmente, intranasalmente, parenteralmente o como un aerosol.

13. Composición, según la reivindicación 10 para el diagnóstico o cribado de un sujeto para la presencia de la enfermedad de Alzheimer o para determinar el riesgo de un sujeto de desarrollar la enfermedad de Alzheimer.