Análogos sintéticos manósidos fosfatidil-mio-inositol con actividad inhibidora de la respuesta inflamatoria.

Compuesto de la fórmula general (I):

en la que:• R1 y R2 representan,

independientemente el uno del otro, un átomo de hidrógeno, un radical alquilo C1 -C20, un radical acilo C1 - C20, siendo entendido siempre y cuando uno de los sustituyentes R1 o R2 seaun átomo de hidrógeno, el otro 25 sustituyente sea diferente al de hidrógeno;

• Z1 y Z2 representan, independientemente el uno del otro, un átomo de hidrógeno, al menos un azúcarseleccionado del grupo formado por manosa, glucosa, galactosa siendo entendido siempre y cuandouno de los sustituyentes Z1 o Z2 sea un átomo de hidrógeno, el otro sustituyente sea diferente al dehidrógeno;

• Q representa a - OP (O)2O -, - OCO2 -, NHCO2 -, NHCONH -;

• Y representa un átomo de hidrógeno, un radical hidroxilo, un radical alcoxi en C1 - C6 - (CH2)n - OHdonde n es un número entero igual a 1, 2 o 3, siendo entendido siempre y cuando Y sea un radicalhidroxilo; y Z1 y Z2 no representen a los dos grupos de un átomo de hidrógeno;

•A representa -- CH2 -;

• X representa un átomo de hidrógeno;

• o A y X forman un enlace para conducir a un ciclo de 6 eslabones en el que

• A representa un - CH-,

• X representa un - CH2 -, - CH (OH) -, un átomo de oxígeno, un -NR3 - en el que R3 es unátomo de hidrógeno, un radical alquilo en C1 - C6 o un radical acilo en C1 - C20,siendo entendido siempre y cuando

• A y X formen un enlace para conducir a un ciclo de 6 eslabones,

• X ≥ - CH (OH) -,

• Y ≥ - OH, y

• Z1 y Z2 representen, independientemente el uno del otro, al menos un azúcar seleccionado delgrupo formado por manosa, glucosa y galactosa

el ciclo de 6 miembros tenga una configuración mioinositol con Z1 o Z2 en posición 1 yrepresenten, al menos un azúcar, sabiendo que "alquilo" se refiere a un radical carbonadolineal, ramificado o cíclico, saturado o insaturado, eventualmente sustituido, que comprende 1 a20 átomos de carbono,

sabiendo que "acilo" se refiere a un radical - COR- en el que R- es un radical alquilo tal y comose ha definido anteriormente,

sabiendo que "alcoxi" se refiere a un radical - OR- en el que R- es un radical alquilo tal y comose ha definido anteriormente;

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables;

sabiendo que "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales preparadas conácidos o bases no tóxicas.

Campo de la invención La presente invención se refiere a nuevos derivados sintéticos de fosfatidil – mioinositol manósidos (denominado en adelante PIM) , a su procedimiento de preparación y utilización en la prevención o al tratamiento de una enfermedad asociada a la sobreexpresión de citoquinas o de quimioquinas, en particular TNF y / o IL – 12.

La invención se refiere también a una composición farmacéutica que comprende al menos un derivado sintético de PIM.

En la descripción a continuación, las referencias entre corchetes [ ] remiten a la lista de referencias presentada al final del documento.

Estado de la técnica

La inhibición de la expresión de las citoquinas proinflamatorias como el TNF y la interleucina 12p40 (denominada en adelante como IL – 12) involucradas en las numerosas respuestas inflamatorias, constituye una necesidad médica real.

Las indicaciones relacionadas con la expresión de estas citoquinas incluyen enfermedades inflamatorias, alérgicas y autoinmunes como la artritis reumatoide, la enfermedad de Crohn, la esclerosis múltiple, la psoriasis, la diabetes mellitas, el lupus eritematoso, el choque séptico y las inflamaciones pulmonares y agudas.

Las moléculas utilizadas normalmente en estas indicaciones son esteroides. Numerosos agentes bloqueantes como el TNF (anticuerpos o receptores solubles) se han comercializado desde el 2000. Cuatro tipos de moléculas inhiben la secreción de la IL – 12 cuyos anticuerpos son objeto de la patente / solicitud de patente [1].

Sin embargo, los esteroides tienen efectos secundarios que limitan la aplicación. Los anticuerpos monoclonales o receptores solubles son proteínas costosas que requieren inyecciones subcutáneas. Además, estos anticuerpos pueden tener efectos no deseables en la resistencia a las infecciones, como se ha demostrado para los anticuerpos anti TNF que pueden inducir la reactivación de la tuberculosis latente. El ácido hialurónico descrito como inhibidor de la producción de la IL – 12, tiene un peso molecular muy elevado, no está molecularmente definido y es difícilmente sintetizable [2].

Existe por tanto una necesidad médica real para encontrar nuevos inhibidores de citoquinas proinflamatorias como el TNF y la IL – 12 que palie estos defectos.

Los fosfatidil – mioinositol manósido (denominados en adelante PIM) , son los precursores de lipoglicanos complejos como, por ejemplo, los lipoarabinomananos (LAM) y los lipomananos (LM) , extraídos de las paredes de las micobacterias. Según su estructura, los PIM pueden tener diferentes actividades inmunomoduladoras.

Los PILAM, proceden de una especie avirulenta de rápido crecimiento como las M. smegmatis, moléculas proinflamatorias que estimulan la producción del TNF y de la IL – 12. En cambio, los LAM cubiertos con residuos de manosilo (ManLAM) , proceden de las micobacterias de lento crecimiento como las M. tuberculosis y la M. bovis BCG, moléculas antiinflamatorias capaces de inhibir la producción de la IL – 12 y el TNF y capaces de aumentar la producción de la IL – 10 por las células dendríticas o por las líneas monocíticas. [8].

Los PILAM, estimulan los macrófagos a través de los receptores Toll-like (TLR) – 2, receptores implicados en la inmunidad innata y estimulan la vía de señalización del NF – kB [9]. Se atribuyen los efectos antiinflamatorios de ManLAM a su enlace con los receptores de manosa [10] o a DC-SIGN [11].

Los LM, precursores biosintéticos de los LAM, están compuestos por un esqueleto de hidratos de carbono con un núcleo constituido de D – manosa y un punto de anclaje de fosfatidilinositol manósido (denominado en adelante PIM) en el extremo reducido manana del dicho núcleo. Los LM están desprovistos del dominio D – arabinano y de cofias encontradas en los LAM [12]. Los LM son proinflamatorios pero los inventores han descrito recientemente que los LM de diferentes orígenes bacterianos, incluyendo a la M. bovis BCG, la M. tuberculosis, la M. chelonae y la M. Kansasii, también presentan importantes propiedades antiinflamatorias [13]. En particular, los LM tri-y tetra – acilados de Mycobacterium bovis BCG inducen a la estimulación de los macrófagos y la expresión de citoquinas proinflamatorias a través de TLR2, de TLR4 y de la proteína adaptadora MyD88 [14], mientras que los LM diacilados y, hasta un cierto nivel los LM triacilados, inhiben la producción de las citoquinas inflamatorias por los macrófagos estimulados a través de la vía TLR4, independientemente de la TLR2 [15]. Por lo tanto, el grado de acilación influye en el efecto modulador de los LM de M. bovis. Los autores propusieron que la acilación diferencial de los LM de la pared miobacteriana puede representar un medio adicional para regular la respuesta inflamatoria del huésped.

Los PIM son moléculas de bajo peso molecular (aproximadamente 1.000 – 2.500) generalmente con 1 a 4 cadenas aciladas, un residuo fosfatidil – mioinositol y 1 a 6 residuos de manosa. Por lo tanto, los PIM naturales pueden presentarse en diferentes formas con un número variable de residuos de manosa y acilo.

Entre los PIM naturales, los fosfatidil – mioinositol dimanósido (denominado en adelante PIM2) y fosfatidil – mioinositol hexamanósido (denominado en adelante PIM6) son los más comunes en la Mycobacterium bovis BCG y en la Mycobacterium tuberculosis H37Rv. Se muestra en la Figura 1 un ejemplo de estructura de PIM6 en su estado natural. Se tiene en cuenta que en estas estructuras naturales, los residuos de manosilo son transportados por el D

– mioinositol en las posiciones 2 y 6.

Se han atribuido recientemente numerosas funciones a los PIM.

Se ha demostrado que los PIM son los agonistas de TLR2 [3] y son reconocidos por las células T CD4-CD8-α / β humanas en el contexto de las células que presentan antígenos que expresan CD1b [4]. Se estableció la interacción de la alta afinidad entre las proteínas CDb1 y las cadenas laterales aciladas de PIM2 [5]. La fracción fosfatilidinositol parece desempeñar un papel central en el proceso de enlace de los PIM a las proteínas CD1b. Por otra parte, se ha demostrado que los PIM2 pueden aumentar el reclutamiento de células NKT ( Natural Killer T cells) , que desempeñan un papel crucial en la respuesta granulomatosa [6], [7].

Se ha descubierto que las cepas de Mycobacterium bovis BCG, Mycobacterium tuberculosis H37Rv y Mycobacterium smegmatis 607 contenían esencialmente dos familias de PIM, los dimanósidos (PIM2) y hexamanósidos (PIM6) [7]. Se observan PIM1, PIM3, PIM4 y PIM5 en cantidades reducidas que sugieren que estos son los intermediarios biosintéticos. Se sintetizan los PIM a partir del fosfatilidinositol por adición secuencial de residuos de manosa en posiciones específicas. Se conocen ahora los tres genes que codifican las manosil transferasas implicadas en la adición de tres primeras unidades de α – Manp. La etapa de iniciación, catalizada por la enzima pimA [16], consiste en la transferencia de un residuo α – Manp al mioinositol del fosfatilidinositol para formar PIM1. La adición de un segundo residuo α – Manp al – inositol del fosfatilidinositol para formar PIM2 , está catalizado por la enzima pimB [17]. La elongación se produce gracias al pimC [18] para crear PIM3 por adición de un tercer residuo α –Manp.

Se han purificado y caracterizado diferentes formas aciladas de PIM, en particular las de PIM2 y PIM6 [7]. Se han descrito cuatro principales formas aciladas (mono – o tetra – aciladas) para PIM2 y PIM6 (AC1 -a AC4 – PIM2 y PIM6 ; véase la Tabla 1) . Se ha puesto igualmente en evidencia su actividad biológica consistente en la estimulación de macrófagos para producir citoquinas.

Tabla 1: Formas principales aciladas de PIM6 puestas en evidencia M. bovis BCG.

Se ha determinado la abundancia relativa de las diferentes especies para cada forma acilada a partir de la integración de las señales monoisotópicas correspondientes [19].

Los inventores han mostrado previamente que PIM2 y PIM6 inducen una activación reducida de macrófagos para secretar TNF por TLR2 y el adaptador MyD88, cualquiera que sea su estructura acilada [7], [19].

Sin embargo, como los PIM son los precursores de LM, y en vista de la reciente demostración de los inventores, según la cual el LM diacilado y triacilado posee un efecto antiinflamatorio fuerte, han determinado que, algunos PIM naturales, incluyendo los PIM6 di – y tri – acilados, son los inhibidores de la liberación por los

macrófagos de citoquina proinflamatoria.... [Seguir leyendo]

1. Compuesto de la fórmula general (I) : 5

en la que:

C20, un radical acilo C1 –C20, siendo entendido siempre y cuando uno de los sustituyentes R1 o R2 sea 25 un átomo de hidrógeno, el otro sustituyente sea diferente al de hidrógeno;

• Z1 y Z2 representan, independientemente el uno del otro, un átomo de hidrógeno, al menos un azúcar seleccionado del grupo formado por manosa, glucosa, galactosa siendo entendido siempre y cuando uno de los sustituyentes Z1 o Z2 sea un átomo de hidrógeno, el otro sustituyente sea diferente al de hidrógeno;

• Q representa a – OP (O) 2O -, -OCO2 -, NHCO2 -, NHCONH -;

• Y representa un átomo de hidrógeno, un radical hidroxilo, un radical alcoxi en C1 –C6 – (CH2) n –OH donde n es un número entero igual a 1, 2 o 3, siendo entendido siempre y cuando Y sea un radical hidroxilo; y Z1 y Z2 no representen a los dos grupos de un átomo de hidrógeno;

• A representa –-CH2 -; 35 • X representa un átomo de hidrógeno;

• o A y X forman un enlace para conducir a un ciclo de 6 eslabones en el que ! A representa un – CH-,

! X representa un -CH2 -, -CH (OH) -, un átomo de oxígeno, un –NR3 – en el que R3 es un átomo de hidrógeno, un radical alquilo en C1 –C6 o un radical acilo en C1 –C20,

siendo entendido siempre y cuando ! A y X formen un enlace para conducir a un ciclo de 6 eslabones,

! X =-CH (OH) -,

! Y = -OH, y

! Z1 y Z2 representen, independientemente el uno del otro, al menos un azúcar seleccionado del

grupo formado por manosa, glucosa y galactosa el ciclo de 6 miembros tenga una configuración mioinositol con Z1 o Z2 en posición 1 y representen, al menos un azúcar, sabiendo que “alquilo” se refiere a un radical carbonado lineal, ramificado o cíclico, saturado o insaturado, eventualmente sustituido, que comprende 1 a 20 átomos de carbono, sabiendo que “acilo” se refiere a un radical – COR´ en el que R´ es un radical alquilo tal y como se ha definido anteriormente, sabiendo que “alcoxi” se refiere a un radical – OR´ en el que R´ es un radical alquilo tal y como se ha definido anteriormente;

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables;

sabiendo que “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a las sales preparadas con ácidos o bases no tóxicas.

2. Compuesto según la reivindicación 1 en el que A y X forman un enlace para conducir un ciclo de 6 eslabones, fórmula (Ia)

en la que:

• A representa –-CH -;

• X representa un -CH2 -, -CH (OH) -, un átomo de oxígeno, un –NR3 – en el que R3 es un átomo de hidrógeno, un radical alquilo en C1 –C6 o un radical acilo en C1 –C20,

siendo entendido siempre y cuando

• X =-CH (OH) -,

• Y = -OH, y

• Z1 y Z2 representen, independientemente el uno del otro, al menos un azúcar seleccionado del grupo formado por manosa, glucosa y galactosa el ciclo de 6 miembros tenga una configuración mioinositol con Z1 o Z2 en posición 1 y representen, al

menos un azúcar o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

3. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que A y X forman un enlace para conducir un ciclo de 6 eslabones en el que • R1 y R2 son aquellos definidos de la reivindicación 1;

• Q representa a – OP (O) 2O -;

• A representa –-CH -;

• X representa un -CH (OH) -,

• Y representa un radical hidroxilo;

• Z1 y Z2 representan, independientemente el uno del otro, al menos un azúcar seleccionado del grupo formado por manosa, glucosa y galactosa el ciclo de 6 miembros tiene una configuración mioinositol con Z1 o Z2 en posición 1 y representan, al menos un azúcar o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 en el que A y X forman un enlace para conducir un ciclo de 6 eslabones en el que • R1 y R2, Z1 y Z2 Q e Y son aquellos definidos de la reivindicación 1;

• Q representa a – OP (O) 2O -; 50 • A representa –-CH -;

• X representa un –NR3 – en el que R3 es un átomo de hidrógeno, un radical alquilo en C1 –C6 o un radical acilo en C1 –C20, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

5. Compuesto según la reivindicación 1 de la fórmula (Ib) 55

•

• A representa –-CH2-;

• X representa un átomo de hidrógeno o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 en el que A y X forman un enlace para conducir un ciclo de 6 eslabones en el que • R1 y R2 representan, independientemente el uno del otro, un radical acilo en C1 –C20 25 • Z1 representa la manosa;

• Z2 representa el átomo de hidrógeno;

• Q representa a – OP (O) 2O -;

• A representa –-CH -;

• X representa un -CH (OH) -,

• Y representa un radical hidroxilo;

• El ciclo de 6 eslabones tiene una configuración mioinositol con Z1 en posición 1

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en el que las sales farmacéuticamente aceptable son las sales de sodio, potasio, calcio, amonio, magnesio, las sales derivadas de ácido clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrógeno carbónico, fosfórico, monohidrógeno fosfórico, dihidrógeno fosfórico, sulfúrico, monohidrógeno sulfúrico e iodhídrico, las sales derivadas de ácido acético, propiónico, isobutírico, maléico, malónico, benzóico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, bencensulfónico, p – tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metansulfónico.

8. Procedimiento de preparación de los compuestos definidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que:

en la que • G = OH o NH2

en la que • J = OH o NH,

• K = P –Obn, P (O) n o C = O, 15 • L = grupo saliente b) el intermediario (IV) se condensa con un derivado de poliol o un aminopoliol de la fórmula general (V)

en la que • G = OH o NH2,

• Z3 y Z4, representan independientemente el uno del otro, un hexopiranosa con configuración mano,

gluco o galacto y llevando a los grupos protectores de acetilo o metoxiacetilo o un grupo bencilo, siendo 40 entendido siempre que al menos uno de los grupos Z3 y Z4 represente un azúcar protegido.

• R4 representa un grupo protector seleccionado del grupo que contiene un grupo bencilo o un radical alcoxiacetilo en C1 –C6,

o se condensa el intermediario (IV) con un compuesto cíclico de la fórmula general (VI)

en la que

• G = OH o NH2,

• Z3 y Z4, tienen las mismas definiciones que anteriormente

• Y2 = H o un grupo – OR4 o un grupo – (CH2) n OR4 en el que R4 tiene la misma definición que 65 anteriormente • X2 = -CH2 , -CHOR 4, –NR3, u O en el que R3 es un átomo de hidrógeno, un radical alquilo en C1 –C6

o un radical acilo en C1 –C20 y R4 representa un grupo protector, como un grupo bencilo o un radical alcoxiacetilo en C1 –C6

eventualmente en presencia de un agente de acoplamiento;

c) eventualmente, se somete el compuesto obtenido de la etapa b) a una reacción de oxidación para dar un compuesto de la fórmula general (VII)

en la que

• J y J´ = OH o NH

• M = P (O) OBn o C = O

o un compuesto de la fórmula general (VIII)

en la que

• J y J´ = OH o NH

• M = P (O) OBn o C = O

• X2 Y2, Z3, R1, R2 R4 tienen las mismas definiciones que anteriormente,

d) se somete el producto de la fórmula general (VII) o de la fórmula general (VIII) a una desprotección en dos etapas que consiste primero en el tratamiento con una alquilamina seleccionada del grupo formado por t – butilamina para luego someter los productos desacilados a una hidrogenación catalítica.

9. Compuesto definido como medicamento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.

10. Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y en cualquier excipiente farmacéuticamente aceptable.

11. Utilización de un compuesto tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la fabricación de un medicamento destinado a la prevención o al tratamiento de una enfermedad asociada a la

sobreexpresión de citoquinas o de quimioquinas, particularmente de TNF y / o de la IL – 12, dicha enfermedad

comprende:

A) Las enfermedades inmunes o autoinmunes seleccionadas del grupo formado por la artritis reumatoide,

5 la diabetes mellitas, el lupus eritematoso sistémico o la enfermedad de Basedow.

B) El rechazo del injerto.

C) Las infecciones virales y / o parasitarias.

D) Los choques resultantes de una infección crónica o aguda de origen bacteriano, viral y / o parasitario.

E) Las enfermedades inflamatorias seleccionadas del grupo formado por las enfermedades crónicas y las

10 enfermedades inflamatorias vasculares.

F) Enfermedades neurodegenerativas seleccionadas del grupo formado por las enfermedades

desmielinizantes, las enfermedades extrapiramidales y las cerebelosas.

G) Las patologías malignas que implican tumores secretores de TNF o que implican al TNF, seleccionadas

del grupo formado por leucemia y linfoma.

15 H) Hepatitis inducida por alcohol.

12. Utilización según la reivindicación 11, según la cual el medicamento se destina a la prevención o al tratamiento

de una enfermedad inflamatoria.

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