Vacuna contra la gripe de emulsión de aceite en agua.

Una composicion inmunogenica contra la gripe en un volumen de dosis adecuado para uso humano que comprende un antigeno del virus de la gripe o preparacion antigenica en combinacion con un adyuvante de emulsion de aceite en agua,

en la que el adyuvante se selecciona del grupo que consiste en: (i) un adyuvante que consiste en 5-6 mg de escualeno, 2-3 mg de agente emulsionante, 5-7 mg de tocol por dosis humana; (ii) un adyuvante que consiste en 2-3 mg de escualeno, 1-1, 5 mg de agente emulsionante, y 2, 5-3, 5 mg de tocol por dosis humana; (iii) un adyuvante que consiste en 0, 5-1, 5 mg de escualeno, 0, 25-0, 75 mg de agente emulsionante y 0, 5-1, 5 mg de tocol por dosis humana.

Vacuna contra la gripe de emulsion de aceite en agua Campo técnico La presente invencion se refiere a composiciones inmunogenicas de la gripe y a pautas de vacunacion para inmunizar seres humanos contra la enfermedad de la gripe, a su uso en medicina, en particular a su uso en aumentar respuestas inmunitarias a diversos antigenos, y a procedimientos de preparacion. En particular, la invencion se refiere a vacunas contra la gripe que comprenden un antigeno del virus de la gripe o preparacion antigenica en combinacion con un adyuvante de emulsion de aceite en agua, en las que dicho adyuvante de emulsion de aceite en agua comprende un aceite metabolizable y un agente emulsionante, y opcionalmente un tocol yNo un esterol.

Antecedentes técnicos Los virus de la gripe son uno de los virus mas ubicuos presentes en el mundo, afectando tanto a seres humanos como a ganado. La gripe produce una carga economica, morbilidad e incluso mortalidad, que son significativos.

El virus de la gripe es un virus envuelto de ARN con un tamano de particula de aproximadamente 125 nm de diametro. Consiste basicamente en una nucleocapside interna o nucleo de acido ribonucleico (ARN) asociado a nucleoproteina, rodeado por una envuelta virica con una estructura de bicapa lipidica y glucoproteinas externas. La capa interna del la envuelta virica esta compuesta predominantemente de proteinas de la matriz y la capa externa principalmente de material lipidico derivado de huesped. El virus de la gripe comprende dos antigenos de superficie, las glucoproteinas neuraminidasa (NA) y hemaglutinina (HA) , que aparecen como espiculas, 10 a 12 nm de longitud, en la superficie de las particulas. Son estas proteinas de la superficie, particularmente la hemaglutinina, las que determinan la especificidad antigenica de los subtipos de la gripe. La cepas del virus se clasifican segun especies huesped de origen, sitio geografico y ano de aislamiento, numero de serie y, para la gripe A, por propiedades serologicas de los subtipos de HA y NA. Se han identificado 16 subtipos de HA (H1-H16) y nueve subtipos de NA (N1-N9) para los virus de la gripe A [Webster RG y col. Evolution and ecology of influenza A viruses. Microbiol. Rev.

1992;56:152-179; Fouchier RA y col. Characterization of a Novel Influenza A Virus Hemaglutinin Subtype (H16) Obtained from Black-Headed Gulls. J. Virol. 2005;79:2814-2822) . Los virus de todos los subtipos de HA y NA se han recuperado de aves acuaticas, pero solo tres subtipos de HA (H1, H2 y H3) y dos subtipos de NA (N1 y N2) han establecido linajes estables en la poblacion humana desde 1918. Solo un subtipo de HA y uno de NA son reconocidos por los virus de la gripe B.

Los virus de la gripe A han evolucionado y experimentan continuamente variabilidad antigenica [Wiley D, Skehel J. The structure and the function of the hemaglutinin membrane glycoprotein of influenza virus. Ann. Rev. Biochem. 1987;56:365-394]. Una falta de correccion eficaz por la ARN polimerasa virica conduce a una alta tasa de errores de transcripcion que pueden producir sustituciones de aminoacidos en glucoproteinas de la superficie. Esto se llama "desviacion antigenica". El genoma virico segmentado permite un segundo tipo de variacion antigenica. Si dos virus de la gripe infectan simultaneamente una celula huesped, el reagrupamiento genetico, llamado "desplazamiento antigenico" puede generar un virus novedoso con nuevas proteinas de la superficie o internas. Estos cambios antigenicos, tanto 'desviaciones' como 'desplazamientos', son impredecibles y pueden tener un espectacular impacto desde un punto de vista inmunologico ya que eventualmente conducen a la emergencia de nuevas cepas de la gripe y que permiten que el virus escape del sistema inmunitario causando las bien conocidas (epidemias) , casi anuales.

Ambas de estas modificaciones geneticas han producido nuevas variantes viricas responsables de pandemias en seres humanos.

La desviacion antigenica del virus de la gripe B es menos frecuente que en las cepas A y el desplazamiento antigenico es desconocido. Aunque linajes antigenicamente distintos (normalmente dos, por ejemplo BNYamagata y BNVictoria) de la gripe B pueden co-circular ocasionalmente, con proporciones variables de ano a ano y pais a pais, 45 es usual que las vacunas contra la gripe contengan solo una cepa de la gripe B.

La HA es el antigeno mas importante en la definicion de la especificidad serologica de las diferentes cepas de la gripe. Esta proteina de 75-80 kD contiene numerosos determinantes antigenicos, varios de los cuales estan en regiones que experimentan cambios de secuencia en diferentes cepas (determinantes especificos de cepa) y otros en regiones que son comunes a muchas moleculas de HA (comunes a determinantes) .

50 Los virus de la gripe producen epidemias casi cada invierno, con tasas de infeccion para el virus de tipo A o B de hasta el 40% durante un periodo de seis semanas. La infeccion de la gripe produce diversos estados de enfermedad, desde una infeccion subclinica pasando por una infeccion respiratoria superior leve a neumonia virica grave. Las epidemias de la gripe tipicas producen aumentos en la incidencia de neumonia y enfermedad respiratoria baja como demuestra el aumento de las tasas de hospitalizacion o mortalidad. La gravedad de la enfermedad se 55 determina principalmente por la edad del huesped, su estado inmunitario y el sitio de infeccion.

Las personas mayores, 65 anos de edad y mas, son especialmente vulnerables, representando el 80-90% de todas las muertes relacionadas con la gripe en paises desarrollados. Los individuos con enfermedades cronicas subyacentes o con una respuesta inmunitaria alterada tambien tienen gran probabilidad de experimentar tales complicaciones. Los lactantes jovenes tambien pueden sufrir enfermedad grave. Por tanto, estos grupos necesitan protegerse en particular. Ademas de estos grupos 'en riesgo', las autoridades sanitarias tambien estan recomendando vacunar al personal sanitario.

La vacunacion desempena una funcion critica en controlar las epidemias de la gripe anuales. Vacunas contra la gripe actualmente disponibles son tanto la vacuna de la gripe inactivada como la atenuada viva. Las vacunas de la gripe inactivadas estan compuestas por tres formas posibles de preparacion de antigeno: virus completo inactivado, subviriones en los que particulas de virus purificadas son rotas con detergentes u otros reactivos para solubilizar la envoltura lipidica (la llamada vacuna "fraccionada") o HA y NA purificadas (vacuna de subunidad) . Estas vacunas inactivadas se administran intramuscularmente (i.m.) , subcutaneamente (s.c) , o intranasalmente (i.n.) .

Las vacunas contra la gripe para uso interpandemico, de todos los tipos, son normalmente vacunas trivalentes. Generalmente contienen antigenos derivados de dos cepas del virus de la gripe A y una cepa de la gripe B. Una dosis inyectable estandar de 0, 5 ml en la mayoria de los casos contiene (al menos) 15 Ig de componente de antigeno de hemaglutinina de cada cepa, como se mide por inmunodifusion radial simple (SRD) (J.M. Wood y col.: An improved single radial immunodiffusion technique for the assay of influenza hemaglutinin antigen: adaptation for potency determination of inactivated whole virus and subunit vaccines. J. Biol. Stand. 5 (1977) 237-247; J. M. Wood y col., International collaborative study of single radial diffusion and immunoelectrophoresis techniques for the assay of hemaglutinin antigen of influenza virus. J. Biol. Stand. 9 (1981) 317-330) . Tambien se ha informado de vacunas tetravalentes que contienen, ademas de las tres cepas clasicas, una cepa de B adicional (Commun Dis Intell 2006, 30, 350-357) o una cepa H3N2 adicional (Vaccine 1992, 10, 506-511) .

Las cepas del virus de la gripe interpandemica que van a incorporarse en la vacuna contra la gripe cada temporada son determinadas por la Organizacion mundial de la salud en colaboracion con las autoridades sanitarias nacionales y los fabricantes de vacunas. Las vacunas contra la gripe interpandemica actualmente disponibles se consideran seguras en todos los grupos de edad (De Donato y col. 1999, Vaccine, 17, 3094-3101) .

Sin embargo, la eficacia de la vacuna esta afectada por la edad y el estado inmunitario de los receptores y la coincidencia entre vacuna y cepas de la gripe en circulacion. Hay pocas pruebas de que las presentes vacunas contra la gripe funcionen en ninos pequenos de menos de dos anos de edad. Ademas, las tasas informadas de eficacia de la vacuna para la prevencion de enfermedad de la gripe confirmada tipica son del 23-72% para los ancianos, que son significativamente inferiores a las tasas de eficacia del 60-90% informadas... [Seguir leyendo]

1. Una composicion inmunogenica contra la gripe en un volumen de dosis adecuado para uso humano que comprende un antigeno del virus de la gripe o preparacion antigenica en combinacion con un adyuvante de emulsion de aceite en agua, en la que el adyuvante se selecciona del grupo que consiste en: (i) un adyuvante que consiste en 5-6 mg de escualeno, 2-3 mg de agente emulsionante, 5-7 mg de tocol por dosis humana; (ii) un adyuvante que consiste en 2-3 mg de escualeno, 1-1, 5 mg de agente emulsionante, y 2, 5-3, 5 mg de tocol por dosis humana; (iii) un adyuvante que consiste en 0, 5-1, 5 mg de escualeno, 0, 25-0, 75 mg de agente emulsionante y 0, 5-1, 5 mg de tocol por dosis humana.

2. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 1, en la que dicho agente emulsionante es un tensioactivo no ionico.

3. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 2, en la que dicho agente emulsionante es un monooleato de polioxietilensorbitano o un trioleato de sorbitano o una mezcla de ambos.

4. La composicion inmunogenica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicho tocol es alfatocoferol.

5. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1-4, en la que el adyuvante comprende ademas un ligando TLR seleccionado de: un agonista de TLR-1, TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-7, TLR-8, TLR-9 o combinacion de los mismos.

6. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1-5, en la que dicho antigeno del virus o preparacion antigenica es 15 Ig o inferior a 15 Ig de HA por dosis humana por cepa de la gripe.

7. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 6, en la que dicho antigeno del virus o preparacion antigenica es inferior a 10 Ig, o inferior a 8 Ig, o inferior a 4 Ig, o inferior a 2 Ig de HA, o inferior a 1 Ig de HA, o inferior a 0, 5,

o inferior a 0, 1 Ig de HA por dosis humana por cepa de la gripe.

8. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 6 o 7, en la que dicho antigeno del virus o preparacion antigenica esta entr.

2. 7, 5 Ig, o de 1 - 5 Ig de HA por dosis humana por cepa de la gripe.

9. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 6-8, en la que dicho antigeno del virus o preparacion antigenica esta entre inferior a o exactamente 5 Ig de HA, o inferior a o exactamente 2, 5 Ig, o inferior a o exactamente 1 Ig por dosis humana por cepa de la gripe.

10. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1-9, en la que dicha composicion es una composicion monovalente que comprende un antigeno del virus o preparacion antigenica de al menos una cepa de la gripe que esta asociada a un brote pandemico o que tiene el potencial a asociarse a un brote de pandemia.

11. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1-9, en la que dicha composicion es una composicion multivalente que comprende un antigeno del virus o preparacion antigenica de al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, o al menos cinco cepas de la gripe.

12. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 11, en la que dicha composicion comprende un antigeno del virus o preparacion antigenica de al menos tres de las cepas estacionales de la gripe (interpandemicas) y opcionalmente comprende un antigeno del virus o preparacion antigenica de al menos una cepa de la gripe que esta asociada a un brote pandemico o que tiene el potencial a asociarse a un brote de pandemia.

13. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 11 o 12, en la que dicha composicion multivalente comprende un antigeno del virus o preparacion antigenica seleccionada del grupo que consiste en: (i) dos cepas A interpandemicas elegidas del grupo de: H1N1 y H3N2 y dos cepas B elegidas del grupo de: BNYamagata y BNVictoria; (ii) tres cepas A interpandemicas elegidas del grupo de: H1N1 y H3N2 y una cepa B elegida del grupo de: BNYamagata y BNVictoria; (iii) dos cepas A interpandemicas elegidas del grupo de: H1N1 y H3N2, una cepa A pandemica, en la que la cepa es H5N1, y una cepa B elegida del grupo de BNYamagata y BNVictoria.

14. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 10, 12-13, en la que dicha cepa del virus de la gripe pandemica se selecciona del grupo que consiste en: H5N1, H9N2, H5N8, H5N9, H7N4, H7N7, H2N2, H10N7, H5N2, H7N2, H7N1 y H7N3.

15. La composicion inmunogenica segun cualquier reivindicacion precedente en la que dicho antigeno del virus de la gripe o preparacion antigenica del mismo es del virus de la gripe cultivado en huevos o en cultivo celular.

16. La composicion inmunogenica segun cualquier reivindicacion precedente, en la que dicho antigeno del virus de la gripe o preparacion antigenica del mismo comprende un virus completo, un virus fraccionado, un virosoma o uno o mas antigenos purificados elegidos de: HA, NA, M1, M2.

17. La composicion inmunogenica segun la reivindicacion 16 en la que dicho (s) antigeno (s) purificado (s) se

prepara (n) a partir del virus de la gripe cultivado en celulas de mamifero, aviares o de insecto.

18. La composicion inmunogenica segun cualquier reivindicacion precedente, en la que dicha dosis humana se selecciona de: 0, 5 ml o menos, entre 0, 5 y 1, 5 ml, entre 0, 2 y 1, 2 ml, entre 0, 2 y 0, 7 ml y menos que o exactamente 0, 25, o 0, 5, o 0, 7, o 1 ml.

19. Un procedimiento para la preparacion de una vacuna contra la gripe adyuvantada segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 que comprende una etapa de mezclar un primer volumen de una emulsion de aceite en agua y un segundo volumen de una suspension acuosa que comprende un virus de la gripe o preparacion antigenica del mismo.

20. Un procedimiento segun la reivindicacion 19, en el que el segundo volumen es mayor que el primer volumen.

21. Un procedimiento segun la reivindicacion 19, en el que el primer y segundo volumenes son volumenes sustancialmente iguales.

22. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21 que comprende una etapa de diluir la emulsion de aceite en agua antes de mezclar la emulsion diluida resultante con dicha suspension acuosa de la gripe.

23. Un kit de vacuna que comprende un componente de antigeno del virus de la gripe o un componente de

preparacion antigenica del virus de la gripe como se define en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 17 y que comprende ademas para administracion concomitante o secuencial un adyuvante como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

24. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1-18 para su uso en medicina.

25. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1-18 para su uso en la prevencion de enfermedad 20 producida por infeccion de la gripe.