Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular, seleccionadas en el grupo constituido por la fracción estroma-vascular y una subpoblación de dicha fracción estroma-vascular constituida por células adherentes para utilización como medicamento antitumoral que tiene por efecto la reducción o la inhibición del crecimiento tumoral y la inducción de la muerte de las células cancerosas.

Utilización de células derivadas del tejido adiposo para la preparación de un medicamento antitumoral.

La presente invención se refiere a la utilización de células derivadas del tejido adiposo para la preparación de un medicamento con acción antitumoral.

El tratamiento eficaz del cáncer continúa siendo uno de los mayores desafíos de la medicina hoy en día. La eficacia de las terapéuticas convencionales quirúrgicas o con alcance citolítico (quimioterapia y radioterapia) sigue siendo muy limitada en numerosos cánceres. En efecto, ciertos cánceres muy frecuentes (tracto gastrointestinal, en particular) , son siempre difíciles de tratar teniendo en cuenta su aspecto masivo que se opone a la difusión de los agentes terapéuticos. Su tratamiento requiere entonces en primer lugar la exéresis quirúrgica, seguida de una quimioterapia eventualmente asociada a una radioterapia. No obstante, en los casos en que la cirugía es imposible o ya no es posible, una quimioterapia alternativa y eficaz sin ser tóxica resulta necesaria. No obstante, los productos disponibles presentan una eficacia limitada o una toxicidad inaceptable. Existe entonces una necesidad de nuevos tratamientos anti-cancerosos para poder disponer de una gama suficientemente extensa de tratamientos, para incrementar de este modo las posibilidades de cura.

En el caso por ejemplo de los cánceres del tracto gastrointestinal (esófago, estómago, intestino delgado, intestino grueso, colón) y de sus glándulas anexas (hígado, vesícula biliar, páncreas) , la falta de tratamientos se evidencia cuando la exéresis quirúrgica es imposible o ya no es posible. En efecto, los tratamientos existentes que están esencialmente basados en la quimioterapia (5-fluorouracilo o 5-FU, gemcitabina…) , y la radioterapia, tienen un bajo impacto en la supervivencia y se utilizan fundamentalmente con fines paliativos, principalmente en los casos de cánceres colorectales, gástricos y pancreáticos (para revista, DIAZ-RUBIO, The Oncologist, 2004, 9, 282-294) .

Además de la falta de tratamientos eficaces, la toxicidad de los agentes quimioterapéuticos habitualmente utilizados (fluoro-uracilo, ácido polínico, derivados del platino, tal como la oxaliplatina, mitomicina C, por ejemplo) y los efectos secundarios asociados a dichos tratamientos representan otro inconveniente mayor.

Fueron probados nuevos anticancerígenos, principalmente en los cánceres del tracto gastrointestinal, tales como el pemetrexed (antifolato : agente citotóxico) , vacunas, inhibidores de quinasa (briostatin, UCN-01, flavopiridol, CI-1040) , inhibidores del EGFR (cetuximab, gefitinib, GW572016, CI-1033, erlotinib) e inhibidores del VEGF (bevacizumab, PTK787/ZK 222584, angiosim, ZD6474) .

Por ejemplo:

• El cetuximab es un anticuerpo monoclonal quimérico relacionado específicamente con el campo extra-celular del receptor del factor de crecimiento epidérmico humano (EGFR) e inhibe la proliferación de células tumorales que derivan en EGFR e induce una apoptosis.

• El bevacizumab es un anticuerpo monoclonal de tipo IgG1 que se asocia al VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) e inhibe por lo tanto la unión del VEGF con sus receptores, Flt-1 (VEGFR-1) y Kdr (VEGFR-2) , situados en la superficie de la células endoteliales tanto in vitro como in vivo. Está constituido por una parte constante de origen humano y una parte variable de origen murino.

Los resultados obtenidos con estos nuevos productos solos o en asociación no constituyen ninguna mejora con respecto a los tratamientos anteriores, en particular en el tratamiento de los cánceres del tracto digestivo, tanto desde el punto de vista de la eficacia como de la toxicidad.

En el caso del cáncer de páncreas, que representa la quinta causa de fallecimiento por cáncer en los países occidentales, el médico se encuentra aún más desprovisto; además de una agresividad y una revelación clínica a menudo tardía, su pronóstico es muy malo (supervivencia de 5 años inferior a 3.5 %) ; y además, la exéresis quirúrgica sólo es posible entre el 10 y el 15 % de los casos. La radioterapia o la quimioterapia tienen poco efecto en la prolongación de vida de los pacientes cuyo tumor no ha sido resecado (promedio de supervicencia 5-6 meses) (Safioleas MC y al., Hepatogastroenterology, 2004, 51 (57) : 862-868; Jemal A. y al., CA Cancer J Clin, 2002, 52 (1) : 23-47 ; Rosewicz S., y al., Lancet, 1997, 349 (9050) : 485-489., Jafari M. y al., Surg Oncol Clin N Am, 2004, 13 (4) : 751760, xi ; Kullke MH y al., Curr Treat Options Oncol, 2002, 3 (6) : 449-457) . Los cánceres del páncreas no-resecables, principalmente el cáncer de la cabeza del páncreas, son objeto de derivaciones paliativas, de la utilización de endoprótesis biliares o duodenales, incluso de la alcoholización antálgica del plexo celíaco. La prolongación de la vida de los pacientes sigue siendo muy baja:

- En caso de cáncer localmente avanzado no-metastático y no resecable o de cáncer metastático, el tratamiento de referencia actual es la gemcitabina, con la cual se observa una mejoría de los signos clínicos (dolor, trastornos del tránsito) mientras que el pronóstico vital sigue bajo (7 a 10 meses) (Safioleas MC y al., Hepatogastroenterology, 2004, 51 (57) : 862-868 ; Jemal A. y Al., CA Cancer J Clin, 2002, 52 (1) : 23-47 ; Rosewicz S., y al., Lancet, 1997, 349 (9050) : 485-489., Jafari M. y al., Surg Oncol Clin, 2004, 13 (4) : 751-760, xi ; Kullke MH y al., Curr Treat Options Oncol, 2002, 3 (6) : 449-457) .

- Una de las vías de investigación para mejorar el pronóstico del cáncer de páncreas es disponer de un tratamiento eficaz aplicable principalmente a los tumores no resecables con el objetivo de reducir la progresión de la enfermedad.

De este modo, se han establecido unos protocolos de investigaciones clínicas que utilizan la terapia génica o la terapia celular:

• Por ejemplo, MULVIHILL y al. (Gene Therapy, 2001, 8, 308-315) han llevado a cabo ensayos clínicos de fase I, durante los cuales procedieron a la inyección intratumoral, mediante un dispositivo de tomografía asistida por ordenador (CT para "computed tomography") , en pacientes afectados por un carcinoma de páncreas no resecable, del adenovirus ONYX-015 (dl 1520) , un adenovirus fragmentado a nivel del gen E1B-55kD que se replica preferentemente en las células tumorales desprovistas de proteína p53 y las mata. La inyección de adenovirus se tolera bien pero no se ha probado ninguna respuesta objetiva. Los Autores subrayan que la replicación viral intratumoral no es lo suficientemente importante y que la eficacia de los adenovirus podría ser optimizada multiplicando las inyecciones de ONYX-015 o bien asociándolas con un tratamiento quimioterapéutico.

• Más recientemente, HECHT y al. (Clinical Cancer Research, 2003, 9, 555-561) modificaron dicho protocolo proponiendo reemplazar el dispositivo de CT, demasiado molesto y susceptible de provocar serias complicaciones como infecciones o perforaciones, por la endoscopia de ultrasonidos. Sin embargo, los ensayos en fases I/II llevados a cabo por este equipo no demostraron mejoría alguna de la eficacia del tratamiento con ONYX-015.

Además, se observaron casos de perforaciones duodenales debidas a la endoscopia.

• Otros adenovirus fueron probados para tratar tumores digestivos. Es así como el equipo de SANGRO y al. (Journal of Clinical Oncology, 2004, 22, 8, 1389-1397) describió la inyección intratumoral de un adenovirus que deriva en la interleuquina 12 (IL-12) , denominada Ad.IL-12, en pacientes afectados por cánceres pancreáticos, colorectales o hepáticos. Estos ensayos de fase 1 sólo revelaron una actividad antitumoral moderada. Siempre orientando sus investigaciones hacia la expresión intratumoral de IL-12 por el adenovirus Ad.IL-12 (también denominado AFIL-12) , el mismo equipo ha probado más recientemente la inyección intratumoral de células dendríticas transfectadas por el adenovirus AFIL-12 (MAZZOLINI y al., Journal of Clinical Oncology, 2005, 23, 5, 999-1010) . Sin embargo, se requieren ensayos clínicos suplementarios para evaluar la eficacia real de dicho tratamiento.

• Finalmente, la administración intratumoral de un vector adenoviral codificante para el TNF-α asociado a una radio-quimoterapia con 5-FU fue igualmente probada. Este ensayo mostró una actividad antitumoral en las dosis máximas de vector adenoviral - TNF-α (Senzer N. y al., J Clin Oncol, 2004, 22 (4) : 592-601) . No obstante, la inyección de un vector adenoviral produce generalmente reacciones indeseables tales como fiebre,

náuseas, una linfopenia, etc…

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1. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular, seleccionadas en el grupo constituido por la fracción estroma-vascular y una subpoblación de dicha fracción estroma-vascular constituida por células adherentes para utilización como medicamento antitumoral que tiene por efecto la reducción o la inhibición del crecimiento tumoral y la inducción de la muerte de las células cancerosas.

2. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular para utilización según la reivindicación 1, caracterizadas porque dicha subpoblación de células adherentes es susceptible de ser obtenida mediante un procedimiento que comprende:

- la obtención de la fracción estroma-vascular a partir del tejido adiposo blanco extramedular;

- la purificación de dicha fracción estroma-vascular ;

- el aislamiento de dicha subpoblación de células a partir de dicha fracción purificada mediante la puesta en cultivo primario en un medio líquido conveniente, la selección de las células adherentes en un soporte de cultivo, la recuperación de las células después de la confluencia, en un medio conveniente, centrifugado y la recuperación del residuo.

3. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular para ser utilizadas según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizadas porque están asociadas a un vehículo farmacéuticamente aceptable.

4. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizadas porque comprenden un gen heterólogo, cuyo producto de traducción es una proteína de interés terapéutico, tal como una enzima capaz de metabolizar una prodroga en compuesto

(s) activo (s) tóxico (s) para la célula tumoral.

5. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular para su utilización según las reivindicaciones 1 a 4, caracterizadas porque dicho medicamento antitumoral está constituido por el sobrenadante de cultivo de dicha subpoblación de células adherentes.

6. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular para su utilización según la reivindicación 5, caracterizadas porque dicho sobrenadante se obtiene a partir de un co-cultivo de dicha subpoblación de células con células cancerosas o con células de una línea celular cancerosa.

7. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizadas porque dicho cáncer es un cáncer sólido o un cáncer líquido.

8. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular para su utilización según la reivindicación 7, caracterizadas porque dicho cáncer es un cáncer sólido del tracto gastrointestinal.

9. Células aisladas del tejido adiposo blanco extramedular para su utilización según la reivindicación 7, caracterizadas porque dicho cáncer se selecciona en el grupo constituido por el cáncer de páncreas, el cáncer gástrico y el cáncer colorrectal.

10. Agente antitumoral tal como está definido en las reivindicaciones 1 a 6, a saber seleccionado en el grupo constituido por células del tejido adiposo blanco extramedular, tales como las definidas en la reivindicación 1, el sobrenadante de cultivo de dichas células o el sobrenadante de un co-cultivo de dichas células con células cancerosas o células de una línea celular cancerosa conveniente, para utilizar como adyuvante en terapia anticancerosa.

11. Utilización de un agente antitumoral tal como se define en las reivindicaciones 1 a 6, a saber seleccionado en el grupo constituido por células del tejido adiposo blanco extramedular, tales como están definidas en la reivindicación 1, el sobrenadante de cultivo de dichas células o el sobrenadante de un co-cultivo de dichas células con células cancerosas o células de una línea celular cancerosa conveniente, para cribar in vitro otros medicamentos antitumorales, principalmente aptos para actuar en sinergia con dichas células o sobrenadante de dichas células.

FIGURA 1

% de progresión tumoral Días post transferencia Testigo Subpoblación de células de la FSV seleccionadas en base a su adherencia en el soporte de cultivo

FIGURA 2

Testigo Subpoblación de células de la FSV seleccionadas en base a suPeso del adherencia en el tumor (mg) soporte de cultivo Testigo Subpoblación Testigo Subpoblación

FIGURA 5

FIGURA 6