Uso de productos proteínicos secretados para prevención y tratamiento de enfermedades pancreáticas y/u obesidad y/o síndrome metabólico.

Uso de una composición que comprende una proteína SF06 como se caracteriza por SEQ ID Nos:

30 ó 32 y/o una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína SF06 como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32, siendo preferiblemente la molécula de ácido nucleico una molécula de DNA, más preferiblemente una molécula de cDNA o DNA genómico, y opcionalmente portadores, diluyentes, y/o aditivos farmacéuticamente aceptables para la preparación de un agente para detección de enfermedades o disfunciones seleccionadas del grupo constituido por diabetes, obesidad, y/o síndrome metabólico.

Uso de productos proteínicos secretados para prevención y tratamiento de enfermedades pancreáticas y/u obesidad y/o síndrome metabólico.

Esta invención se refiere al uso de proteínas SF06 secretadas, y al uso de polinucleótidos que codifican las mismas, en el diagnóstico y estudio de diabetes, obesidad y/o síndrome metabólico.

Muchas proteínas humanas sirven como compuestos farmacéuticamente activos. Varias clases de proteínas humanas que sirven como tales compuestos activos incluyen hormonas, citoquinas, factores de crecimiento celular, y factores de diferenciación celular. La mayoría de las proteínas que pueden utilizarse como compuestos farmacéuticamente activos caen dentro de la familia de las proteínas secretadas. Las proteínas secretadas se producen generalmente en el interior de las células del retículo endoplasmático rugoso, se exportan luego al complejo de Golgi, y se desplazan después a vesículas o gránulos secretores, donde aquéllas se secretan al exterior de la célula por exocitosis. Ejemplos de proteínas secretadas utilizadas comercialmente son insulina humana, agentes trombolíticos, interferones, interleuquinas, factores estimulantes de colonias, hormona del crecimiento humano, factor beta del crecimiento transformante, activador de plasminógeno tisular, eritropoyetina, y diversas otras proteínas. Los receptores de proteínas secretadas, que son proteínas fijadas a la membrana, tienen también potencial como agentes terapéuticos o diagnósticos. Por consiguiente, es importante para el desarrollo de nuevos compuestos farmacéuticos identificar proteínas secretadas que puedan ser testadas en cuanto a actividad en una diversidad de modelos animales. Así, teniendo en cuenta el papel dominante de las proteínas secretadas en la fisiología humana, existe necesidad de identificar y caracterizar nuevas funciones para las proteínas humanas secretadas y los genes que las codifican. Este conocimiento permitirá detectar, tratar, y prevenir enfermedades, trastornos, y/o afecciones médicas por utilización de proteínas secretadas o los genes que codifican las mismas.

El páncreas es un órgano esencial que posee a la vez una función exocrina implicada en el suministro de enzimas al tracto digestivo y una función endocrina por la cual diversas hormonas son secretadas al torrente sanguíneo. La función exocrina está asegurada por células acinares y centroacinares que producen diversas enzimas digestivas y conductos intercalados que transportan estas enzimas en solución alcalina al duodeno. La unidad funcional del páncreas endocrino es el islote de Langerhans. Los islotes están dispersos por toda la porción exocrina del páncreas y están compuestos de cuatro tipos de células: células alfa, beta, delta y PP, revisadas por ejemplo en Kim S.K. y Hebrok M., (2001) Genes Dev. 15:111-127. Las células beta producen insulina, representan la mayor parte de las células endocrinas y forman el núcleo de los islotes, mientras que las células alfa secretan glucagón y están localizadas en la periferia. Las células delta y las células PP son menos numerosas y secretan somatostatina y polipéptido pancreático, respectivamente.

El desarrollo pancreático inicial ha sido bien estudiado en diferentes especies, que incluyen pollos, pez cebra, y ratones (para una revisión detallada véase Kim & Hebrok, 2001, supra) . El páncreas se desarrolla a partir de primordios distintos dorsales y ventrales. El desarrollo del páncreas requiere la especificación de los primordios pancreáticos a lo largo de ambos ejes anterior-posterior y dorsal-ventral. Diversos factores, que son críticos para el desarrollo pancreático apropiado han sido identificados (véase Kim & Hebrok, 2001, supra; Wilson M.E. et al., (2003) Mech Dev. 120:65-80) .

En los humanos post-natales/adultos, las células acinares y ductales retienen una capacidad proliferativa importante que puede asegurar la renovación y el crecimiento de las células, mientras que las células de los islotes se vuelven en su mayoría mitóticamente inactivas. Esto está en contraste con los roedores, en los cuales la replicación de las células beta es un mecanismo importante en la generación de células beta nuevas. Se ha sugerido que, durante el desarrollo del embrión, los islotes pancreáticos de Langerhans se originan por la diferenciación de las células ductales u otras células con morfología epitelial (Bonner-Weir S. y Sharma A., (2002) J Pathol. 197: 519-526; Gu G. et al., (2003) Mech Dev. 120: 35-43) . En los humanos adultos, células beta nuevas surgen en la vecindad de los conductos (Butler A.E. et al., (2003) Diabetes 52: 102-110; Bouwens L. y Pipeleers D.G., (1998) Diabetologia 41: 629-633) . Sin embargo, se ha sugerido también una localización intra-islotes o un origen en la médula ósea para las células precursoras de las células beta adultas (Zulewski H. et al., (2001) Diabetes 50: 521-533; lanus A. et al., (2003) J Clin Invest. 111: 843-850) . Zulewski H. et al. (2001) Diabetes 50: 521-533; lanus A. et al., (2003) J Clin Invest. 111: 843850) . El crecimiento de los islotes pancreáticos es dinámico y responde a cambios en la demanda de insulina, tal como ocurre durante el embarazo o durante el aumento de la masa corporal que tiene lugar durante la infancia. En los adultos, existe una buena correlación entre masa corporal y masa de los islotes (Yoon K.H. et al., (2003) J. Clin. Endocrinol Metab. 88:2300-2308) .

Las células beta pancreáticas secretan insulina, que es estimulada por niveles elevados de glucosa en sangre. La insulina, entre otras hormonas, juega un papel fundamental en la regulación del metabolismo del combustible. La insulina conduce al almacenamiento de glucógeno y triglicéridos y a la síntesis de proteínas. La entrada de glucosa en los músculos y las células adiposas está estimulada por la insulina. En los pacientes que sufren diabetes mellitus, la cantidad de insulina producida por las células de los islotes pancreáticos es demasiado baja, dando como resultado niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia) . En la diabetes tipo I, las células beta se pierden debido a destrucción autoinmune. En los pacientes diabéticos tipo II, las células del hígado y las musculares pierden su capacidad para responder a los niveles normales de insulina en sangre (resistencia a la insulina) . Los niveles de glucosa en sangre elevados (y también los niveles elevados de lípidos en sangre) conducen a un deterioro de la función de las células beta y a un aumento en la apoptosis de las células beta. Es interesante observar que la tasa de neogénesis de células beta no parece cambiar en los diabéticos tipo II (Butler et al., 2003 supra) , causando así una reducción en la masa total de células beta a lo largo del tiempo. Finalmente, la aplicación de insulina exógena llega a hacerse necesaria en los diabéticos tipo II.

La mejora de los parámetros metabólicos tales como azúcar en sangre y niveles de lípidos en sangre (v.g. por cambios dietéticos, ejercicio, medicación o combinaciones de los mismos) antes que la masa de células beta haya caído por debajo de un umbral crítico conduce a un restablecimiento relativamente rápido de la función de las células beta. Sin embargo, después de dicho tratamiento la función pancreática endocrina se mantendría deteriorada debido a la sólo ligeramente incrementada tasa de regeneración.

En los diabéticos tipo I, la duración de vida de los islotes pancreáticos está espectacularmente acortada debido a destrucción autoinmune. Se han ideado tratamientos que modulan el sistema inmunitario y pueden ser capaces de detener o reducir acusadamente la destrucción de los islotes (Raz I. et al., (2001) Lancet 358: 1749-1753; Chatenoud L. et al., (2003) Nat Rey Immunol. 3: 123-132) . Sin embargo, debido a la regeneración relativamente lenta de las células beta humanas, dichos tratamientos podrían ser completamente satisfactorios sólo para mejorar la afección diabética si se combinan con un agente que pueda estimular la regeneración de las células beta.

Así pues, tanto para la diabetes tipo I como para la del tipo II (fases temprana y tardía) hay necesidad de descubrir nuevos agentes que estimulen la regeneración de las células beta.

La diabetes es una enfermedad muy incapacitante, dado que las medicaciones no controlan los niveles de azúcar en sangre suficientemente bien para prevenir la fluctuación entre los niveles de azúcar en sangre altos y bajos. Los pacientes diabéticos corren el riesgo de complicaciones importantes, que incluyen cetoacidosis diabética, enfermedad renal de etapa final, retinopatía... [Seguir leyendo]

1. Uso de una composición que comprende una proteína SF06 como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32 y/o una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína SF06 como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32, siendo preferiblemente la molécula de ácido nucleico una molécula de DNA, más preferiblemente una molécula de cDNA o DNA genómico, y opcionalmente portadores, diluyentes, y/o aditivos farmacéuticamente aceptables para la preparación de un agente para detección de enfermedades o disfunciones seleccionadas del grupo constituido por diabetes, obesidad, y/o síndrome metabólico.

2. Uso de una composición que comprende una proteína SF06 como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32 y/o una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína SF06 como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32, siendo dicha molécula de ácido nucleico preferiblemente una molécula de DNA, más preferiblemente una molécula de cDNA o DNA genómico, y opcionalmente portadores, diluyentes, y/o aditivos farmacéuticamente aceptables para la preparación de un medicamento para el tratamiento, alivio y/o prevención de enfermedades o disfunciones seleccionadas del grupo constituido por diabetes, obesidad, y/o síndrome metabólico.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la molécula de ácido nucleico es un ácido nucleico SF06 de mamífero como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32, que codifica particularmente el polipéptido humano SF06 como se caracteriza por SEQ ID NO: 32 y/o una molécula de ácido nucleico, que es complementaria al mismo.

4. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde dicha molécula de ácido nucleico se selecciona del grupo constituido por

(a) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido, teniendo el polipéptido una secuencia como se muestra en SEQ ID NO: 30 o SEQ ID NO: 32, o una isoforma del polipéptido de acuerdo con SEQ ID NO: 30 o SEQ ID NO: 32;

(b) una molécula de ácido nucleico que comprende o es la molécula de ácido nucleico de acuerdo con SEQ ID NO: 30 o SEQ ID NO: 32;

(c) una molécula de ácido nucleico que está degenerada, como resultado del código genético, con las secuencias de ácido nucleico que se definen en (a) o (b) ;

(d) una molécula de ácido nucleico que se hibrida a 50ºC en una solución que contiene 1 x SSC y 0, 1% SDS a una molécula de ácido nucleico como se define en la reivindicación 3 o como se define en (a) a (c) y/o una molécula de ácido nucleico que es complementaria de la misma;

(e) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que es al menos 85%, preferiblemente al menos 90%, más preferiblemente al menos 95%, más preferiblemente al menos 98% y hasta 99, 6% idéntico al SF06 humano como se define en la reivindicación 3 o a un polipéptido como se define en (a) .

5. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde dicha molécula de ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico recombinante y/o un vector, particularmente un vector de expresión y/o una sonda de hibridación, un cebador o un oligonucleótido antisentido.

6. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el polipéptido es un polipéptido recombinante y/o un polipéptido de fusión.

7. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para monoterapia o terapia de combinación junto con al menos un agente farmacéutico adicional, seleccionándose el al menos un agente farmacéutico adicional del grupo constituido por derivados de 2-amino-1, 3-propanodiol, hidrocloruro de 2-amino-2-[2- (4-octilfenil) etil]propano-1, 3-diol.

4. O (2-hidroxietil) -rapamicina, SDZ-RAD, Everolimus, 6- (3-dimetil-aminopropionil) -forskolina, 6mercaptopurina (6-MP) , A-420983, ABX-CBL (CBL-1) , Alefacept, inhibidor ICAM-1 antisentido (ISIS 2302) , Enlimomab, BIRR1, Alicaforsén, Inmunoglobulina antitimocitos (ATGAM) , Azatioprina, Baohuosido-1, basiliximab, BMS279700, BTI-322, Cladribina, CP- 690550, Ciclofosfamida (CTX) , Ciclosporina (ciclosporina A, ciclosporina) , Daclizumab, HAT (Anti-Tac humanizado) , Anti-Tac SMART, anti-CD25, receptor anti-IL2 humanizado, Dexametasona (Decadrón, Dexona, Dexasona) , DIAPEP-277, dipéptido de ácido borónico (DPBA) , ácido docosahexaenoico (DHA) , efalizumab, Efomicina M, FTY720 (derivado de miriocina oral) , Glatiramer acetato (copolímero-1) , proteína ácida Glial Fibrilar (GFAP) , Gusperimus (15-desoxiespergualina) , péptido HLA-B2702, hu1124 (anti-CD11a) , hOKT31y (Ala-Ala) , Infliximab, Interferón, ISAtx247, isotretinoína, L-683, 742, Leflunomida (ARAVA) , Medi-500 (T10B9) , Medi507, Metotrexato, Mitoxantrona, micofenolato-mofetil, OKT4A, Muromonab-CD3, Prednisolona, Psora-4, Rifampicina, Rituximab, S100º, Sirolimus, Rapamicina, Tacrolimus (Prograf; FK-506) , o Triptolida.

8. Método de identificación de un (poli) péptido implicado en la regulación de la homeostasis de la energía y/o el metabolismo en un mamífero, que comprende los pasos de

(a) poner en contacto una colección de (poli) péptidos con un polipéptido SF06 como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32 o una proteína SF06 codificada por un ácido nucleico seleccionado del grupo constituido por:

(i) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido, teniendo el polipéptido una secuencia como se muestra en SEQ ID NO: 30 ó SEQ ID NO: 32, o una isoforma del polipéptido de acuerdo con SEQ ID NO: 30 ó SEQ ID NO: 32;

(ii) una molécula de ácido nucleico que comprende o es la molécula de ácido nucleico de acuerdo con SEQ ID NO: 30 ó SEQ ID NO: 32;

(iii) una molécula de ácido nucleico que está degenerada, como resultado del código genético, con las secuencias de ácido nucleico como se definen en (i) o (ii) ;

(iv) una molécula de ácido nucleico que se hibrida a 50ºC en una solución que contiene 1 x SSC y 0, 1% de SDS a un ácido nucleico SF06 de mamífero como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32 o como se defina en (i) a (iii) y/o una molécula de ácido nucleico que es complementaria de la misma;

(v) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que es al menos 85%, preferiblemente al menos 90%, más preferiblemente al menos 95%, más preferiblemente al menos 98% y hasta 99, 6% idéntico al SF06 humano como se caracteriza por SEQ ID NO: 32 o a un polipéptido como se defina en (i) en condiciones que permiten la fijación de dicho o dichos (poli) péptidos;

(b) retirar los (poli) péptidos que no se fijan y

(c) identificar los (poli) péptidos que se fijan a dicho polipéptido SF06 como se caracteriza por SEQ ID Nos: 30 ó 32 o a dicha proteína SF06 codificada por un ácido nucleico seleccionado del grupo constituido por

(i) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido, teniendo el polipéptido una secuencia como se muestra en SEQ ID NO: 30 o SEQ ID NO: 32, o una isoforma del polipéptido de acuerdo con SEQ ID NO: 30 o SEQ ID NO: 32;

(ii) una molécula de ácido nucleico que comprende o es la molécula de ácido nucleico de acuerdo con SEQ ID NO: 30 o SEQ ID NO: 32;

(iii) una molécula de ácido nucleico que está degenerada, como resultado del código genético, con las secuencias de ácido nucleico que se definen en (i) o (ii) ;

(iv) una molécula de ácido nucleico que se hibrida a 50ºC en una solución que contiene 1 x SSC y 0, 1% SDS a un ácido nucleico SF06 de mamífero como se caracteriza por SEQ ID NOs: 30 ó 32 o como se defina en (i) a (iii) y/o una molécula de ácido nucleico que es complementaria de la misma;

(v) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que es al menos 85%, preferiblemente al menos 90%, más preferiblemente al menos 95%, más preferiblemente al menos 98% y hasta 99, 6% idéntica a la SF06 humana como se caracteriza por SEQ ID NO: 32 o a un polipéptido como se defina en (i) en condiciones que permiten la fijación de dicho o dichos (poli) péptidos.

9. Método para cribado de un agente, que afecta/modula la actividad de un polipéptido SF06 como se caracteriza por SEQ ID NOs: 30 ó 32, que comprende los pasos de

(a) incubar una mixtura que comprende (aa) un polipéptido SF06 como se caracteriza por SEQ ID NO: 30 ó 32; y (ab) un agente candidato en condiciones en las cuales dicho polipéptido SF06 o fragmento del mismo exhibe una actividad de referencia,

(b) detectar la actividad de dicho polipéptido SF06 para determinar una actividad para el agente; y

(c) determinar una diferencia entre la actividad para el agente y la actividad de referencia.

parte del lóbulo hepático Región del páncreas ventral intestino Región del páncreas ventral