Un procedimiento para preparar un complejo metálico que comprende complejar un radiometal a un agentequelante tetradentado de un conjugado de péptido-quelato en presencia de un agente reductor que es una salestañosa,

en el que dicho conjugado de péptido-quelato comprende un péptido que tiene afinidad por el receptor deST conjugado al agente quelante tetradentado, en el que el péptido que tiene afinidad por el receptor de ST se eligede ID. SEC. 1 a 7, y en el que el agente tetradentado se elige de diaminadioximas y ligandos N3S.

Síntesis de conjugados de péptido-quelato tetradentado para el diagnóstico del cáncer colorrectal Campo de la invención La presente invención se refiere a radiofármacos, en particular, la invención se refiere a la preparación de un 5 conjugado de péptido-quelato, cuyo péptido tiene afinidad por el receptor de ST. Este compuesto es adecuado para la obtención de imágenes de diagnóstico del cáncer colorrectal en un mamífero.

El radiomarcado del conjugado de péptido-quelato no interfiere con la afinidad del péptido por el receptor de ST.

También se da a conocer un kit para la producción de un conjugado radiomarcado de péptido-quelato para obtener imágenes de cáncer colorrectal.

10 Antecedentes de la técnica

El carcinoma colorrectal (CCR) es el cuarto trastorno maligno más común en todo el mundo después de los cánceres de pulmón, mama y próstata. Las metástasis que tienen como origen el CCR son la principal causa de muerte en los pacientes diagnosticados con tumores primarios colorrectales. En los EE.UU. se diagnostican aproximadamente entre 150.000 y 200.000 nuevos casos por año y alrededor de 50.000 muertes se atribuyen a esta enfermedad. Muchos pacientes mueren debido a la diseminación metastásica de la enfermedad, con un 60-80 % de los casos que desarrollan lesiones hepáticas durante la enfermedad. La identificación positiva de la metástasis del hígado es por consiguiente una clara indicación de enfermedad latente. Aunque con una frecuencia mucho menor, otros posibles lugares de propagación incluyen los pulmones, el cerebro y, ocasionalmente, los huesos.

Debido a la fuerte correlación entre el grado de afectación hepática (número y localización de metástasis) y la resecabilidad, la evaluación adecuada de la idoneidad de los pacientes con respecto a la cirugía es cada vez más importante (Liver Metastasis: Biology, diagnosis and treatment. Garden O. J., Gereghty J. G., Nagomey D. M. eds. 1998) . La necesidad de un agente capaz de detectar metástasis de pequeño tamaño (< 1 cm) tendrá un profundo impacto en el tratamiento y el manejo de pacientes con CCR. Existe la necesidad de detectar específicamente lesiones metastásicas pequeñas (< 1 cm) en el hígado. La detección precoz del número y la localización de las lesiones metastásicas es fundamental. También hay una necesidad de caracterizar y, específicamente, identificar el origen del tumor, sin interferencia de otras posibles lesiones (por ejemplo, quistes, lesiones benignas, tumores que no se pueden tratar) .

El receptor del péptido intestinal vasoactivo (VIP) se sobreexpresa en las células del cáncer colorrectal, y por lo tanto puede servir como una diana para la detección de lesiones metastásicas. El documento US 600792 enseña un péptido radiomarcado que tiene como diana el VIP para la obtención de imágenes de cáncer colorrectal.

Una toxina termoestable de bajo peso molecular es producida por cepas de E. coli enterotóxica. Esta toxina, conocida como péptido ST, está implicada en la enfermedad diarreica aguda mediante la unión a su receptor en las células colorrectales y la estimulación de la guanilato ciclasa. En los documentos US 4545931 y US 4886663 se dan a conocer péptidos ST sintéticos que se unen al receptor de ST y que no median como enfermedad diarreica aguda.

Estos péptidos producidos sintéticamente son adecuados para su administración a seres humanos con fines terapéuticos y de diagnóstico.

Los ligandos diana dirigidos a los receptores que se expresan de manera selectiva en las células tumorales de origen colorrectal son un medio para detectar específicamente la presencia de cánceres de origen colorrectal. Por consiguiente, el receptor de ST es un mecanismo de diana potencial. Las células de la mucosa gastrointestinal 40 expresan específicamente el receptor de ST, y la expresión persiste después de que las células de la mucosa del colon y del recto sufren una transformación neoplásica maligna. No se han encontrado péptidos ST en ningún otro tejido extra-intestinal, por lo tanto se mantiene la especificidad de los ligandos por el tejido de origen gastrointestinal. Se han encontrado niveles de expresión similares en tejidos colorrectales humanos primarios y metastásicos con diferentes grados de diferenciación y localización. Un ligando específico para el receptor de ST sólo se unirá a la 45 enfermedad metastásica, puesto que se podrá evitar el acceso a la parte apical de las células intestinales si se inyecta el compuesto por vía intravenosa.

El uso de péptidos ST radiomarcados para la obtención de imágenes y el diagnóstico de CCR ha sido previamente documentado. El documento US 5518888 reivindica agentes de radiodiagnóstico basados en péptidos ST. En una forma de realización de dicha invención, los péptidos pueden unirse a un agente para la obtención de imágenes 50 radiactivo, tales como el yodo radiactivo, 111In o 99mTc. El 99mTc es quelado por DTPA, que se convierte en un anhídrido y se hace reaccionar con un péptido ST. En el documento US 5518888 no se da a conocer ningún otro quelato. El radiomarcado produce de este modo los péptidos adecuados para uso en radioimaginología del cáncer colorrectal metastasizado. El documento US 6060037 da a conocer un procedimiento de radioimaginología de CCR metastásico utilizando tales péptidos ST radiomarcados. La detección de acumulación localizada o agregación de 55 radiactividad después de la administración del péptido ST radiomarcado es indicativa de la presencia de células con receptores de ST. Los documentos WO 95/11694, WO 99/21587 y WO 99/39748 también dan a conocer péptidos

ST radiomarcados para la obtención de imágenes para diagnóstico. El documento WO 95/11694 describe composiciones que comprenden un péptido ST y un resto seleccionado de un agente terapéutico, un marcador adecuado para la detección in vitro y un marcador adecuado para la detección in vivo. Entre otros, el marcador para la detección in vivo puede ser un metal radiactivo quelado, que se conjuga al péptido ST después de la quelación. En el documento WO 99/21587 las clases preferidas de agentes complejantes de radiometales son las terpiridinas y las fenantrolinas. En el documento WO 99/39748, los agentes complejantes comprenden un anillo macrocíclico que contiene oligo-2, 6-piridina que es un derivado de una terpiridina, cuaterpiridina, quinpiridina o sexipiridina. Los quelantes tetradentados son agentes complejantes de más preferencia que los enseñados por los documentos WO 99/21587 y WO 99/21587 (véase por ejemplo Baidoo and Lever Bioconj. Chem. 1990: 1: 132-137) , pero se sabe que las condiciones de marcado para estos quelantes no son compatibles con el mantenimiento de los enlaces disulfuro, de los cuales tres están presentes en el péptido ST.

Breve descripción de los dibujos La figura 1 muestra el efecto del pH 8, 0, 8, 5 y 9, 0 en la reacción de marcado sobre la formación de especie 2 (CAST5-18) .

La figura 2 muestra el efecto de la variación de la temperatura de la reacción de radiomarcado en la formación de especie 2 (CA-ST5-18) . Las temperaturas evaluadas fueron 40 ºC, 60 ºC y 70 ºC.

La figura 3 muestra el efecto de la masa de compuesto en la formación porcentual de especie 2 (CA-ST5-18) , probada en 12, 5 μg, 25 μg, 50 μg y 100 μg de compuesto.

La figura 4 muestra imágenes por SPECT (tomografía computerizada por emisión de fotón único) de ratones portadores de tumores T84 subcutáneos. Las imágenes son imágenes bidimensionales posteriores estáticas con colimador LEUHR obtenidas utilizando CA1-ST5-18 marcado con 99mTc purificado por HPLC a razón de 20MBq por animal. Las relaciones tumor a hígado fueron: 1, 1 a los 15 minutos, 2 a los 60 minutos y 4 a los 120 minutos. La calidad de las imágenes era comparable cuando se utilizaron preparaciones brutas.

La figura 5 muestra la retención relativa de CA1-ST5-18 frente al control negativo, CA1-ST5-18 (cys-ala) .

La figura 6 muestra una comparación de la captación de CA1-ST5-18 marcado con 99mTc purificado por HPLC y CA1ST5-18 (cys-ala) en ratones atímicos CD-1 portadores de tumores T84 subcutáneos. Imágenes bidimensionales posteriores estáticas con colimador LEUHR utilizando CA1-ST5-18 purificado por HPLC a razón de 20MBq por animal.

La figura 7 muestra la biodistribución de CA1-ST5-18 purificado a razón de 2MBq por animal en ratas y ratones atímicos RNU/rnu portadores de tumores T84 en el hígado. Los datos están expresados como la retención relativa... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para preparar un complejo metálico que comprende complejar un radiometal a un agente quelante tetradentado de un conjugado de péptido-quelato en presencia de un agente reductor que es una sal estañosa, en el que dicho conjugado de péptido-quelato comprende un péptido que tiene afinidad por el receptor de ST conjugado al agente quelante tetradentado, en el que el péptido que tiene afinidad por el receptor de ST se elige de ID. SEC. 1 a 7, y en el que el agente tetradentado se elige de diaminadioximas y ligandos N3S.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el radiometal de dicho complejo metálico se elige de 64Cu, 65Cu y99mTc.

3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que el radiometal de dicho complejo metálico es 99mTc.

4. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho agente quelante tetradentado es de fórmula A:

en la que RA1 a RA6 son todos CH3 y Q es - (CH2) 2NR (CH2) 2- y en el que R es hidrógeno o alquilo C1-10, alquilarilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo, fluoroalquilo, aminoalquilo o carboxialquilo.

5. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho agente quelante tetradentado es de fórmula B:

en la que RB1 y RB2 son ambos H y X es un grupo protector tiol.

6. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la conjugación del conjugado de péptido-quelato es en el extremo N terminal o en el extremo C terminal del péptido.

7. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho conjugado de péptido-quelato además comprende 20 un grupo conector entre el péptido y el agente quelante tetradentado.

8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que el grupo conector comprende una secuencia peptídica de 5 a 9 aminoácidos.

9. El procedimiento de las reivindicaciones 7 u 8, en el que el grupo conector se selecciona de –poly-Lys-, -poly-Glu-,

- (Gly) 2-Glu- (Lys) 3-, (Gly) 2-Glu-Lys-Glu-Lys-, (Phe) 2- (CH2) 5-, (Lys) 6-Gly-, - (Gly) 3- (DGlu) 3-y - (Gly) 3- (ácido 25 aminocaproico) 2-.

10. Un kit para llevar a cabo el procedimiento de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende:

i) un conjugado de péptido-quelato y ii) un agente reductor que es una sal estañosa, en el que dicho conjugado de péptido-quelato comprende un péptido que tiene afinidad por el receptor de ST conjugado a un agente quelante tetradentado, en el que el 30 péptido que tiene afinidad por el receptor de ST se elige de ID. SEC. Nº 1 a 7, y en el que el agente quelante tetradentado se elige de diaminadioximas y ligandos N3S.

11. El kit de la reivindicación 10 y que además comprende uno o más estabilizantes; antioxidantes; agentes de carga para liofilización; y solubilizantes.