Receptores heterodiméricos solubles y usos de estos.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2007/056276.
Solicitante: NOVO NORDISK A/S.
Nacionalidad solicitante: Dinamarca.
Dirección: Novo Allé 2880 Bagsvaerd DINAMARCA.
Inventor/es: PADKÆR,Søren,Berg, SPEE,Petrus Johannes Louis, FRIEDRICHSEN,Birgitte Nissen, NØRBY,Inga Sig Nielsen.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/50 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).
PDF original: ES-2385754_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Receptores heterodiméricos solubles y usos de estos Campo de la invención [0001] Esta invención se refiere a receptores heterodiméricos solubles para aplicaciones diagnósticas y terapéuticas, y a métodos de diseño y producción de tales receptores heterodiméricos solubles. Composiciones ejemplares de la invención comprenden fragmentos solubles de receptores heterodiméricos al igual que la porción Fc de las inmunoglobulinas.
Antecedentes de la invención [0002] Receptores solubles, tales como TNFR soluble (Enbrel®) , han probado gran valor para aplicaciones terapéuticas. Receptores solubles pueden también ser usados para fines de diagnóstico, también, por ejemplo, para la selección de expresión de ligandos en tejidos enfermos, tales como tejidos tumorales en pacientes con cáncer.
La familia de receptores CD94/NKG2 está compuesta de elementos receptores heterodiméricos con activación o potencial inhibitorio. Estos receptores se expresan predominantemente en células NK y un subconjunto de células CD8+T, y han mostrado jugar un papel importante en las respuestas de regulación contra células tumorigénicas e infectadas. El ligando principal para el receptor CD94/NKG2 es HLA-E. La patente US n°. 6262244 a Houchins et al. describe la secuencia humana NKG2A (SEC ID nº: 1) , y Chang et al. (Eur J Immunol. 1995, 25:2433-7) informó de la secuencia CD94 humana (SEC ID nº: 2) .
Versiones solubles de receptores CD94/NKG2 son de interés no solo como herramientas de investigación, sino también como agentes terapéuticos. Ambas aplicaciones diagnóstica y terapéutica, no obstante, requieren receptores solubles estables que se pueden producir eficazmente en un biosistema adecuado. Para muchos receptores heterodiméricos tales como, por ejemplo, CD94/NKG2, esto se ha mostrado, hasta el momento, difícil. Cuestiones potenciales son homo-dimerización de las subunidades individuales, y la estructura más compleja de receptores heterodiméricos los hace más difíciles para diseñar versiones solubles que son suficientemente estables.
Ciertas construcciones solubles CD94/NKG2A, basadas en la expresión de partes etiquetadas solubles de CD94 y proteínas NKG2A, se han propuesto en la literatura (Brooks et al., J Immunol 1999:162:305-13; Ding et al Scand. J. Immunol. 1999, 49:459-465; y Kaiser et al. Journal of Immunology, 2005, 174: 2878-2884) . Versiones solubles de otros receptores multiméricos, algunos del cuales fusionados a partes Fc de inmunoglobulina, han sido descritos en, por ejemplo, WO9937772, WO200208272, y WO20023237, en relación a moléculas receptoras multiméricas IL-18; Wu et al. (Protein Sci. 1999;8:482-9) , describe formas solubles del receptor IL-2; WO200222153, describe un receptor soluble IL20; WO200212345, en relación a receptores de citocina solubles ZCY-TOR 11, WO2002101006, en relación a proteínas heteromultiméricas tales como receptores de células T, WO9533059, describe un receptor heterodimérico de gp130 y cadena beta receptora de oncostatina M, y US6238890, describe formas solubles de varias glicoproteínas. Versiones solubles de receptores de células T heterodiméricas o subunidades de estas también han sido descritas en, por ejemplo, Clements et al., Acta Cr y stallogr D Biol Cr y stallogr. 2002; 58:2131-4; Laugel et al., J. Biol. Chem. 2005;280:1882-1892; Kim et al., J Mol Biol. 2000;302:899-916.
Además, las publicaciones de patentes US nº 20030195338 y 20040072256 describen varios tipos de proteínas de secuencia receptoras Fc enlazadas, la patente US n° 6, 018, 026 se refiere a proteínas de fusión dimerizadas; la patente US n° 6, 033, 041 se refiere a métodos para generar heteromultímeros quiméricos; las WO92/06204 y WO03012069 se refieren a, por ejemplo, técnicas para producir bibliotecas de receptores heterodiméricos; la publicación de patente US n° 20040138417 describe adhesinas heteromultiméricas. También, principios para promover formación de heteromultímeros se describen en la publicación de patente US n° 20030078385, y se revisa en Marvin y Zhu, Acta Pharmacol Sino 2005, 26 (6) :649-658 (ver también Kontermann, Acta Pharmacol. Sin. 2005, 26:1-9) .
Además, Hayer et al., Nat. lmmun. 1998;16:78, Brooks et al., J Immunol. 1999;162:305-313 y Vales-Gomez et al., Embo. J 1999, 18:4250-4260 todos revelan receptores diméricos solubles CD94/NKG2.
No obstante, permanece una necesidad de versiones solubles monocatenarias de receptores heterodiméricos tales como CD94/NKG2 para diagnóstico o usos terapéuticos, y métodos eficaces para producción de receptores heterodiméricos monocatenarios solubles estables. La presente invención se dirige a estas y otras necesidades en la técnica.
Resumen de la invención [0009] La presente invención proporciona una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 comprendiendo una parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2 y una parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94. En algunos aspectos, las construcciones, comprenden además un polipéptido de inmunoglobulina
comprendiendo todo o parte de un dominio Fc o variante de este, una o dos porciones Fc de una molécula de inmunoglobulina.
En un aspecto ejemplar, la proteína de fusión monocatenaria soluble CD94/NKG2, comprende además un polipéptido de inmunoglobulina comprendiendo todo o parte de un dominio Fc o variante de este. En otro aspecto ejemplar, la invención proporciona para una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 donde el C-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94 se une al N-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2, y el C-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2 se enlaza al polipéptido de inmunoglobulina.
En otro aspecto ejemplar, la invención proporciona una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2, donde el C-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2 se une al N-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94, y el C-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94 se enlaza al polipéptido de inmunoglobulina.
En todavía otro aspecto ejemplar, la invención proporciona una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2, donde la parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2 y parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94 se unen por un enlazador peptídico comprendiendo glicina y serina.
En un aspecto, la invención proporciona una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2, que es un receptor cD94/NKG2A CD94/NKG2B CD94/NKG2C CD94/NKG2E, o CD94/NKG2F. En todavía otro aspecto ejemplar, la invención proporciona una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2, que es CD94/NKG2A. En todavía otro aspecto ejemplar, la invención proporciona una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2A, comprendiendo residuos los 99-233 de SEC ID nº: 1.
En todavía un aspecto ejemplar, la invención proporciona una proteína de fusión monocatenaria soluble CD94/NKG2, que es CD94/NKG2C. En un aspecto más ilustrativo, la invención proporciona una proteína de fusión monocatenaria soluble CD94/NKG2C, comprendiendo los residuos 96-231 de la SEC ID nº: 3.
En todavía un aspecto más ilustrativo, la invención proporciona una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 comprendiendo los residuos 35-179 de la SEC ID nº: 2. En un aspecto, la invención proporciona una proteína de fusión receptora soluble CD94/NKG2A comprendiendo la secuencia de cualquiera de las SEC ID nº: 37
39.
En todavía otro aspecto ejemplar, la invención proporciona un dímero de proteína de fusión receptor monocatenario soluble CD94/NKG2 según cualquiera de los aspectos ejemplares precedentes.
En un aspecto más ilustrativo, la invención proporciona un método para producir una proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2, comprendiendo cultivo de una célula comprendiendo un ácido nucleico que codifica la proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 de cualquiera de los aspectos ejemplares precedentes bajo condiciones adecuadas para la expresión de la proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2. En todavía otro aspecto ejemplar, la invención proporciona una composición farmacéutica comprendiendo una cantidad eficaz de la proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 de cualquiera de... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 comprendiendo una parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2 y una parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94.
2. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 según la reivindicación 1, comprendiendo además un polipéptido de inmunoglobulina comprendiendo todo o parte de un dominio Fc o variante de éste.
3. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 según la reivindicación 2, donde el C-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94 se une al N-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2, y el C-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2 se une al polipéptido de inmunoglobulina.
4. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 según la reivindicación 2, donde el C-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2 se une al N-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94, y el C-terminal de la parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94 se une al polipéptido de inmunoglobulina.
5. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 de cualquiera de las reivindicaciones 3 y 4, donde la parte soluble de una secuencia de aminoácidos NKG2 y parte soluble de una secuencia de aminoácidos CD94 se unen por un enlazador peptídico comprendiendo glicina y serina.
6. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que es un receptor CD94/NKG2A, CD94/NKG2B, CD94/NKG2C, CD94/NKG2E, o CD94/NKG2F.
7. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 según la reivindicación 6, que es CD94/NKG2A.
8. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2A según la reivindicación 7, comprendiendo los residuo.
9. 233 de la SEC ID nº: 1.
9. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 según la reivindicación 6, que es CD94/NKG2C.
10. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2C según la reivindicación 9, comprendiendo los residuo.
9. 231 de la SEC ID nº: 3.
11. Proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, comprendiendo los residuo.
3. 179 de la SEC ID nº: 2.
12. Proteína de fusión receptora soluble CD94/NKG2A comprendiendo la secuencia de cualquiera de las SEC ID nº: 37
39.
13. Dímero de la proteína de fusión receptora monocatenaria soluble CD94/NKG2 de cualquiera de las reivindicaciones precedentes.
14. Método para producción de una proteína de fusión receptora soluble CD94/NKG2, comprendiendo cultivo de una célula comprendiendo un ácido nucleico que codifica el receptor soluble CD94/NKG2 de cualquiera de las reivindicaciones precedentes bajo condiciones adecuadas para expresión del receptor soluble CD94/NKG2.
15. Composición farmacéutica comprendiendo una cantidad eficaz de la proteína de fusión receptora soluble CD94/NKG2 de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 y un portador farmacéuticamente aceptable o excipiente.
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