Una prueba pronóstica de alergia para una alergia prolongada en un niño,

que comprende:

proporcionar suero procedente de un niño alérgico; poner en contacto el suero con al menos un epítopo lineal de un alérgeno seleccionado en condiciones que permitan que los anticuerpos específicos del epítopo, si están presentes en el suero, se unan al epítopo; y observar los niveles de anticuerpo de tipo IgE que se unen a dicho epítopo; en la que la observación de niveles estadística y significativamente elevados de anticuerpo de tipo IgE que se une a dicho epítopo con respecto a un nivel control de anticuerpo de tipo IgE que se une a dicho epítopo observado con individuos no alérgicos es indicativa de una alergia.

Prueba pronóstica de alergia

5 Antecedentes de la invención

Las reacciones de hipersensibilidad a los alimentos afectan hasta al 6 % de los niños durante los primeros años de vida (Bock, SA 1987. Pediatrics 79:683-688) , siendo la leche, el huevo y los cacahuetes las respuestas alérgicas más documentadas (James JM y Sampson HA. 1992. Pediatr Allergy & ImmunoI 3:67-78) . En la mayoría de los niños alérgicos a la leche, la hipersensibilidad a la leche de vaca se desarrolla durante el primer año de vida y aproximadamente el 80 % de ellos "han superado" su reactividad (es decir, se convierten en clínicamente tolerantes) a los tres años de edad (Host, A. 1994. Pediatr Allergy Immunol 5:5-36) . La hipersensibilidad a los huevos de gallina y a los cacahuetes se suele reconocer durante el segundo año de vida. La alergia al huevo parece ser más persistente que la alergia a la leche de vaca, mientras que la alergia a los cacahuetes muy rara vez se "supera"

(Bock, SA 1982. J Allergy Clin Immunol 69: 173-17; Sampson, H.A. y S.M. Scanlon. 1989. J Pediatr 115:23-27; Bock, SA y F.M. Atkins. 1989. J Allergy Clin Immunol 83:900-904) . La base de estas diferencias respecto a la persistencia de la hipersensibilidad clínica a diferentes alérgenos alimentarios se desconoce.

La alergia al huevo está presente en casi dos tercios de los niños con dermatitis atópica (Sampson, H.A. J. 1997 Roy. Soc. Med. 90 (supl. 30) :3-9) . Cuando se somete a los niños alérgicos al huevo a una dieta desprovista de toda proteína de huevo, alrededor de un tercio desarrolla tolerancia clínica al huevo en un plazo de 2 años, aunque los anticuerpos de tipo IgE frente al huevo (pruebas de punción cutánea positivas) persisten durante varios años (Sampson 1989) . El ovomucoide (Gal d 1) es el alérgeno dominante en los huevos de gallina y los niños con alergia persistente al huevo presentan concentraciones de anticuerpos de tipo IgE anti-ovomucoide significativamente mayores que aquéllos que "superan" su reactividad (Bernhisel-Broadbent, J., y col. 1994. J Allergy Clin Immunol 93:1 047-1 059) . El ovomucoide es una glicoproteína compuesta por 186 aminoácidos dispuestos en tres dominios en tándem que contienen nueve puentes disulfuro dentro de los dominios y cinco cadenas laterales de hidratos de carbono (Kato y col. 1987. Biochemistr y 26: 193-201) .

Es un objeto de la presente invención proporcionar un ensayo que incluya procedimientos y reactivos para predecir la probabilidad de que los niños superen una alergia, especialmente una alergia alimentaria.

Por tanto, la presente invención proporciona una prueba pronóstica de alergia que comprende:

proporcionar suero procedente de un niño alérgico; poner en contacto el suero con al menos un epítopo lineal de un alérgeno seleccionado en condiciones que permitan que los anticuerpos específicos del epítopo, si están presentes en el suero, se unan al epítopo; y observar los niveles de anticuerpo de tipo IgE que se unen a dicho epítopo; en la que la observación de niveles estadística y significativamente elevados de anticuerpo de tipo IgE que se une a dicho epítopo con respecto a un nivel control de anticuerpo de tipo IgE que se une a dicho epítopo observado con individuos no alérgicos es indicativa de una alergia En el presente documento también se describe un procedimiento y reactivos para la detección selectiva de la presencia de anticuerpos contra epítopos conformacionales frente a lineales en muestras de pacientes.

45 Sumario de la invención

Se proporcionan procedimientos y reactivos para usar en la predicción de la probabilidad de que un niño supere una alergia, especialmente una alergia alimentaria, realizando detección selectiva de la inmunorreactividad de anticuerpos de tipo IgE con epítopos lineales en comparación con epítopos conformacionales. En primer lugar, se realiza detección selectiva del niño mediante técnicas estándar para determinar a qué antígenos es alérgico el niño. Después, las inmunoglobulinas de la muestra del paciente se caracterizan usando el antígeno natural purificado, el antígeno recombinante, el antígeno reducido y alquilado, fragmentos proteolíticos del antígeno o péptidos sintéticos de entre cuatro y 40 aminoácidos de longitud, preferentemente de seis a diez aminoácidos, que se pueden 55 inmovilizar para una detección selectiva rápida y precisa. Los anticuerpos del paciente normalmente presentes en una muestra de suero o plasma reaccionan con la proteína o los péptidos para determinar qué péptidos se unen a los anticuerpos. Después, estos anticuerpos se caracterizan para determinar si los epítopos a los que se unen son lineales o conformacionales. Los pacientes que tienen anticuerpos reactivos principalmente contra epítopos conformacionales (es decir, reactivos con la proteína nativa o los fragmentos proteolíticos, en comparación con la proteína reducida y alquilada o péptidos lineales sintéticos) normalmente superan sus alergias. Aquéllos en los que son reactivos principalmente con los epítopos lineales pueden no superar su reactividad y pueden tener que ser tratados para inducir tolerancia.

El procedimiento de detección selectiva se demuestra en un ejemplo usando sueros combinados de pacientes 65 alérgicos al huevo y solapando los decapéptidos sintéticos derivados de la secuencia del ovomucoide. Se descubrió que el ovomucoide poseía cinco epítopos de unión a IgE alergénicos. La evaluación de epítopos alergénicos con sueros de pacientes individuales reveló tres patrones de unión a epítopo: unión extensa de IgE a los decapéptidos en los tres dominios del ovomucoide, unión de IgE predominantemente a los péptidos del primer dominio y prácticamente ausencia de unión de IgE a ningún péptido sintético, lo que indica que la mayoría de los anticuerpos de tipo IgE en el último grupo reconocía epítopos conformacionales. Todos los pacientes tenían una extensa unión de anticuerpos de tipo IgG a los péptidos sintéticos lineales, mientras que los controles no alérgicos al huevo solo reconocían epítopos conformacionales. Los pacientes del grupo con unión extensa de IgE a decapéptidos lineales tendían a ser de más edad y a tener síntomas alérgicos generalizados más graves tras la ingestión de huevo que el grupo de pacientes con pocos anticuerpos de tipo IgE a los péptidos sintéticos. Estos hallazgos indican que el procesamiento antigénico diferencial y el reconocimiento estructural del anticuerpo-epítopo desempeñan un papel en la evolución clínica de la sensibilidad al alérgeno.

Un procedimiento similar de la evaluación de los anticuerpos de tipo IgG o IgA se puede usar para predecir el pronóstico de ciertos trastornos inflamatorios, especialmente los que afectan al tracto gastrointestinal, tal como enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y enfermedad celíaca.

Breve descripción de las figuras

Figure 1. Puntuaciones de la DO acumulada de IgE de Gal d 1 en SPOT para cada uno de los 89 decapéptidos sintéticos solapantes generados en la membrana de SPOT. Las puntuaciones reflejan la unión total de los 17 pacientes alérgicos al huevo estudiados. Figure 2. Puntuaciones de la DO acumulada de IgG de Gal d 1 en SPOT para cada uno de los 89 decapéptidos sintéticos solapantes generados en la membrana de SPOT. Las puntuaciones reflejan la unión total de los 17 pacientes alérgicos al huevo estudiados. Figuras 3a-c. Patrones de la unión de IgE específica del ovomucoide a decapéptidos sintetizados, mostrados como las puntuaciones de la DO acumulada de la IgE de Gal d 1 en SPOT: el Grupo 1; Figura 3a, poseía anticuerpos de tipo IgE frente a epítopos en los tres dominios del ovomucoide, el Grupo 2, Figura 3b, tenía anticuerpos de tipo IgE específicos del ovomucoide principalmente frente a los epítopos en el primer dominio del ovomucoide, y el Grupo 3, Figura 3c, tenía una cantidad insignificante de anticuerpos de tipo IgE frente a cualquier decapéptido sintético. Figuras 4a-e. Puntuaciones de la mediana de la DO acumulada de IgG de Gal d 1 en SPOT, pacientes alérgicos al huevo (Figuras 4a-4c) y controles no alérgicos al huevo: pacientes con dermatitis atópica sin alergia al huevo (Figura 4d) y controles normales no alérgicos (Figura 4e) . Figuras 5a-b. Se comparó la proporción de anticuerpos de tipo IgE (Figura 5a) e IgG (Figura 5b) específica del ovomucoide frente al ovomucoide nativo y "linealizado" (reducido y alquilado) para cada grupo de pacientes alérgicos al huevo.

Descripción detallada de la invención

En la generación de anticuerpos específicos de IgE, los linfocitos B se activan... [Seguir leyendo]

1. Una prueba pronóstica de alergia para una alergia prolongada en un niño, que comprende:

proporcionar suero procedente de un niño alérgico; poner en contacto el suero con al menos un epítopo lineal de un alérgeno seleccionado en condiciones que permitan que los anticuerpos específicos del epítopo, si están presentes en el suero, se unan al epítopo; y observar los niveles de anticuerpo de tipo IgE que se unen a dicho epítopo; en la que la observación de niveles estadística y significativamente elevados de anticuerpo de tipo IgE que se une a dicho epítopo con respecto a un nivel control de anticuerpo de tipo IgE que se une a dicho epítopo observado con individuos no alérgicos es indicativa de una alergia 2. La prueba pronóstica de alergia de la reivindicación 1, en el que el epítopo deriva de un alérgeno seleccionado del grupo que consiste en proteínas de alimentos, pólenes, polvo, mohos, insectos, animales y plantas. 15

3. La prueba pronóstica de alergia de la reivindicación 2, en el que el alérgeno deriva de alimentos.

4. La prueba pronóstica de alergia de la reivindicación 3, en el que el epítopo deriva de un alérgeno seleccionado del

grupo que consiste en cacahuetes, huevos, nueces, leche, pescado y marisco. 20