Proteínas de fusión a interleucina-11.

Una proteína de fusión de albúmina que comprende

i) IL-11 humana de longitud completa o fragmentos de IL-11 humana de longitud completa y

ii) albúmina humana de longitud completa o fragmentos de albúmina humana de longitud completa,

teniendo dichos fragmentos uno o más restos delecionados del extremo amino terminal y/o del extremo carboxilo terminal en la que dichos fragmentos son idénticos al menos un 90% a la IL-11 humana de longitud completa y/o la albúmina humana de longitud completa y en la que dichas deleciones no causan una pérdida sustancial de la función biológica, en la que la función biológica es la estimulación de la trombocitopoyesis.

Proteínas de fusión a interleucina-11

Campo de la invención La invención se refiere a nuevas composiciones para el tratamiento o la profilaxis de la trombocitopenia, enfermedad de von Willebrand (EVW) o enfermedades inflamatorias, tal como la enfermedad inflamatoria intestinal (EII) .

Antecedentes de la invención Función fisiológica de la IL-11

La interleucina once (IL-11) es una citocina hematopoyética que promueve la megacariocitopoyesis y la trombocitopoyesis estimulando la proliferación de células madre primitivas, células progenitoras multipotentes y comprometidas (en sinergia con otros factores de crecimiento hematopoyéticos como IL-3, IL-6, FEC-GM) , dando como resultando la maduración de megacariocitos y la producción de plaquetas aumentada. Debido a la actividad descrita anteriormente, como efecto secundario, estimula la eritropoyesis, pero muestra poco efecto sobre la proliferación de neutrófilos. También tiene efectos tróficos sobre las células de la mucosa intestinal. Además la IL-11 induce en los hepatocitos la secreción de proteínas de fase aguda (ferritina, haptoglobina, PCR, fibrinógeno) . También muestra propiedades antiinflamatorias inhibiendo a macrófagos y la función efectora de linfocitos T. Inhibe la producción del FNT-a, la IL-1º, IL-12, IL-6 y NO de macrófagos activados in vitro. Fisiológicamente, la IL-11 se produce por una diversidad de células estromales, como fibroblastos, células epiteliales, condrocitos y osteoblastos. Generalmente, en individuos normales no se detecta en plasma. La degradación y la eliminación de la IL-11 continúan sin comprenderse bien.

Características bioquímicas de la IL-11

La IL-11 es un polipéptido de 19 kDa que consiste en 178 aminoácidos (AA) , más una secuencia líder secretora de 21 AA, que no contiene restos de glucosilación potenciales, enlaces disulfuro u otras modificaciones post-traduccionales, y tiene una estrecha similitud con la IL- 6. Se une a un complejo receptor multimérico que contiene una subunidad a receptora específica de IL-11 y una subunidad º promiscua (gp130) .

La IL-11 humana recombinante (Oprelvekin, Neumega® de Genetics Institute/Wyeth) es una interleucina-11 de 2178 aminoácidos producida en E. coli que carece del resto de prolina amino-terminal. Esto puede ser necesario para lograr la secreción de la célula huésped pero supuestamente no afecta a la actividad de la citocina.

Trombocitopenia inducida por quimioterapia La trombocitopenia es un problema significativo para los pacientes que reciben quimioterapia agresiva o prolongada para tumores malignos. Para algunos agentes quimioterapéuticos, tales como carboplatino, representa la toxicidad limitante de dosis predominante y actúa de forma acumulativa.

En la actualidad, la transfusión de plaquetas es el tratamiento convencional para la trombocitopenia. Sin embargo, las transfusiones de plaquetas son costosas y se asocian con un riesgo significativo de aloinmunización y transmisión de enfermedades de transmisión sanguínea. Aproximadamente del 5 al 30% de las transfusiones de plaquetas se asocian con reacciones habitualmente febriles, no hemolíticas. Además, las plaquetas son un recurso limitado con una vida útil de 5 días solamente. De esta manera, los agentes que promueven la producción de plaquetas son una alternativa atractiva a las transfusiones de plaquetas para la prevención o el tratamiento de la trombocitopenia. La IL-11 humana recombinante (Oprelvekin, Neumega®) se aprobó en 1997 en los Estados Unidos para la profilaxis secundaria de la trombocitopenia inducida por quimioterapia. Otras posibles indicaciones incluyen la enfermedad inflamatoria intestinal (EII) , enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, psoriasis y enfermedad de von Willebrand.

Ventajas esperadas de la fusión de la IL11 a la albúmina El tratamiento seguro y eficaz de la trombocitopenia sigue siendo una necesidad médica no satisfecha. La IL-11 humana recombinante (Oprelvekin, Neumega®) tiene una semivida muy corta de 6, 9 horas en seres humanos y al mismo tiempo una estrecha ventana terapéutica.

Se espera que la prolongación de la semivida plasmática y la biodisponibilidad aumentada a través de la fusión con la albúmina de cómo resultado un perfil de seguridad y de eficacia mejorados. Esto significa que los niveles plasmáticos terapéuticos pueden conseguirse y mantenerse con dosis más bajas y/o intervalos de dosis más largos, evitando niveles máximos por encima del umbral tóxico. En la actualidad, Neumega® es el único fármaco autorizado para el tratamiento de la trombocitopenia inducida por quimioterapia, lo que representa un campo con una alta necesidad médica no satisfecha. Neumega® muestra una alta frecuencia de efectos tóxicos, tales como edema e irregularidades cardiovasculares, junto con una baja eficacia especialmente en los casos graves de trombocitopenia.

Sumario de la invención La invención se refiere a proteínas que comprenden IL-11 fusionada a la albúmina o a fragmentos de la misma. En el presente documento, estas proteínas de fusión se denominan conjuntamente "proteínas de fusión a albúmina de la invención". Estas proteínas de fusión de la invención muestran una semivida in vivo prolongada y/o una actividad terapéutica prolongada en comparación con la IL11 no fusionada.

La invención incluye kits, formulaciones, composiciones farmacéuticas, composiciones y proteínas de fusión a albúmina terapéuticas. La invención también incluye moléculas de ácido nucleico que codifican las proteínas de fusión a albúmina de la invención, así como vectores que contienen estos ácidos nucleicos, células huésped transformadas con estos ácidos nucleicos y vectores, y procedimientos de fabricación de las proteínas de fusión a albúmina de la invención que utilizan estos ácidos nucleicos, vectores, y/o células huésped.

La invención también se refiere a composiciones y a procedimientos para la terapia y la prevención de la trombocitopenia. La invención se refiere adicionalmente a composiciones y a procedimientos para la terapia y la prevención antiinflamatoria. Además, la invención se refiere a composiciones y a procedimientos para la terapia y la prevención de la enfermedad de von Willebrand.

Breve descripción de los dibujos

Descripción detallada de la invención La presente invención se refiere a proteínas de fusión que comprenden albúmina acoplada a IL-11. Tales péptidos incluyen, pero sin limitación, péptidos de unión al complejo receptor de gp130. Estos péptidos incluyen IL-11, o fragmentos de la misma, que tienen propiedades trombocitopoyéticas o antiinflamatorias.

Los términos "proteína" y "péptido", como se utilizan en este documento, no son limitativos e incluyen proteínas y polipéptidos, así como péptidos.

Además, entidades químicas pueden unirse covalentemente a las proteínas de fusión de la invención o utilizarse en combinaciones para mejorar una actividad biológica o para modular una actividad biológica.

Se espera que las proteínas de fusión a albúmina de la presente invención prolonguen la semivida de la IL-11 in vivo. La... [Seguir leyendo]

1. Una proteína de fusión de albúmina que comprende i) IL-11 humana de longitud completa o fragmentos de IL-11 humana de longitud completa y ii) albúmina humana de longitud completa o fragmentos de albúmina humana de longitud completa, teniendo dichos fragmentos uno o más restos delecionados del extremo amino terminal y/o del extremo carboxilo terminal en la que dichos fragmentos son idénticos al menos un 90% a la IL-11 humana de longitud completa y/o la albúmina humana de longitud completa y en la que dichas deleciones no causan una pérdida sustancial de la función biológica, en la que la función biológica es la estimulación de la trombocitopoyesis.

2. La proteína de fusión de albúmina de la reivindicación 1 en la que la IL-11 humana se fusiona al extremo N-terminal de la albúmina humana.

3. La proteína de la reivindicación 2, por la que la semivida in vivo de dicha IL-11 fusionada con albúmina se prolonga al menos 10 veces cuando se administra por vía intravenosa a ratas en comparación con la semivida de dicha IL-11 que carece de la albúmina humana unida cuando también se administra por vía intravenosa a ratas.

4. La proteína de fusión de albúmina de la reivindicación 1 en la que la IL-11 humana se fusiona al extremo C-terminal de la albúmina humana.

5. La proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que la IL-11 humana se separa de la albúmina humana mediante un engarzador.

6. La proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que la actividad biológica in vivo de la IL-11 humana fusionada a la albúmina humana es igual o mayor que la actividad biológica in vivo de dicha IL-11 humana en un estado no fusionado.

7. La proteína de fusión de albúmina de la reivindicación 6 en la que la actividad biológica viene determinada por un aumento de los niveles medios de plaquetas en un modelo en ratas de la trombocitopenia inducida por quimioterapia.

8. La proteína de fusión de albúmina de la reivindicación 6 en la que la actividad biológica se determina por la reducción de la diarrea y del sangrado rectal en un modelo de ratón de la enfermedad inflamatoria intestinal, inducido por la sal disódica del sulfato de dextrano.

9. Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica la proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

10. Un procedimiento para fabricar una proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, comprendiendo el procedimiento (a) proporcionar un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión de albúmina que puede expresarse en una célula u organismo; (b) expresar el ácido nucleico en la célula u organismo para formar una proteína de fusión de albúmina; y (c) purificar la proteína de fusión de albúmina.

11. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de la proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

12. Una proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso en medicina.

13. Una proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso en el tratamiento de la trombocitopenia y/o de la trombocitopenia inducida por quimioterapia y/o de la enfermedad inflamatoria intestinal y/o de la enfermedad de von Willebrand.

14. Una proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso para minimizar un efecto secundario asociado con el tratamiento de un mamífero con la IL-11 humana que comprende administrar dicha proteína de fusión de albúmina a dicho mamífero.

15. Una proteína de fusión de albúmina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su uso para minimizar la pérdida de peso, el sangrado rectal o la diarrea asociados con el tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal en un mamífero con IL-11 humana que comprende administrar dicha proteína de fusión de albúmina a dicho mamífero.