ESTA INVENCION SE REFIERE A UN METODO PARA CREAR UNA VARIACION LOCALIZADA DE LA DENSIDAD DEL COLOR EN LA SUPERFICIE DE UN TEJIDO CELULOSICO TEÑIDO Y A UNA COMPOSICION PARA UTILIZAR EN ESTE METODO.

Prevención de la coloración retroactiva en el lavado a la piedra.

Campo técnico

Esta invención se refiere a un método para provocar una variación localizada de la densidad del color en la superficie de un tejido celulósico teñido, y a una composición para dicho método.

Antecedentes de la invención

En la fabricación de prendas hechas de tejidos celulósicos teñidos, p. ej., vaqueros hechos a partir de denim teñido de azul índigo, es común el tratamiento del denim para proporcionar un estilo de lavado a la piedra (abrasión del color localizada en la superficie del denim). Esto se puede conseguir agitando el denim en un medio acuoso que contiene un agente de abrasión mecánica, como la piedra pómez, una celulasa abrasiva o una combinación de ambos. Es preferible realizar el proceso con un pH prácticamente neutro, de modo que se prefiere utilizar una celulasa con una alta actividad para esta gama de pH. En el pasado, las preparaciones de celulasa se producían generalmente mediante el cultivo de microorganismos de origen natural, y dichas preparaciones contenían de forma invariable una mezcla de muchos componentes de celulasa. En la patente US 4,832,864 (de Ecolab) se describe un proceso que utiliza una preparación de mezcla de celulasa de este tipo.

Los rápidos avances en las técnicas del ADN recombinante han hecho posible la producción de enzimas monocomponentes con un rendimiento elevado y, en consecuencia, los procesos que utilizan celulasas monocomponentes han adquirido un mayor interés. Así, las patentes WO 91/17243 y WO 95/09225 (Novo Nordisk) describen un proceso que utiliza una endoglucanasa monocomponente denominada EG V con un peso molecular de ∼43 kD, derivada de la cepa Humicola insolens DSM 1800, con una actividad óptima en un pH prácticamente neutro. La patente WO 94/21801 (Genencor) describe la utilización en el lavado a la piedra de una celulasa monocomponente denominada EG III derivada de la Trichoderma longibrachiatum, conocida por tener un pH óptimo entre 5.5 y 6.0, y por mantener una actividad significativa con un pH alcalino. La patente WO 95/16782 (Genencor International) sugiere la utilización de otras celulasas monocomponentes derivadas de la Trichoderma en el lavado a la piedra, pero estas celulasas son acídicas y no presentan prácticamente actividad alguna con un pH neutro.

Un problema general en los métodos conocidos como lavado a la piedra es la coloración retroactiva, es decir, un fenómeno mediante el cual el tinte ya eliminado por abrasión se deposita sobre algunas partes del tejido o la prenda de manera que iguala la variación deseada de densidad del color o decolora cualquier zona de la prenda teñida en un color claro.

Exposición de la invención

Hemos descubierto que, sorprendentemente, la adición de un tipo determinado de celulasa (a partir de ahora denominada primer componente) reduce la coloración retroactiva. La celulasa en cuestión no tiene un efecto abrasivo significativo en sí mismo.

En consecuencia, la invención proporciona un método para provocar una variación localizada de la densidad del color en la superficie de un tejido celulósico teñido, que comprende la agitación del tejido en un medio acuoso con un pH dentro de la gama entre 6.5 y 9 y conteniendo:

un primer componente que puede ser

(a) una celulasa de la Familia 5 capaz de hidrolizar celotriosa y/o p-nitrofenil-b-1,4-celobiosida, o bien

(b) una celulasa de la Familia 7,

y un segundo componente que puede ser

(a) un agente abrasivo mecánico, o bien

(b) una celulasa con actividad abrasiva,

donde cada celulasa exhibe al menos un 30% de su actividad máxima con un pH 7.

Otro aspecto de la invención proporciona una composición para usar en dicho método, incluyendo el primer y segundo componente mencionados.

Definiciones

En esta especificación junto con las reivindicaciones, son de aplicación las siguientes definiciones:

El término celulasa se refiere a un enzima que contribuye a la hidrólisis de la celulosa, como una celobiohidrolasa (según la nomeclatura de las enzimas: Enzyme Nomenclarure E.C. 3.2.1.91), una endoglucanasa (denominada con la abreviatura EG, E.C. 3.2.1.4), o una b-glucosidasa (E.C. 3.2.1.21).

Las celulasas están clasificadas por familias basándose en las similitudes de las secuencias de aminoácidos según el sistema de clasificación descrito en Henrissat, B. et al.: Biochem. J., (1991), 280, p. 309-16, y Henrissat, B. et al.: Biochem. J., (1993), 293, p.781-788.

Las celulasas empleadas en esta invención son preferiblemente monocomponentes, es decir, el medio acuoso empleado en la invención debería estar libre de otros componentes de celulasas distintos de los especificados. Las enzimas monocomponentes pueden ser preparadas de forma económica mediante tecnología de ADN recombinante, es decir, se pueden producir mediante la clonación de una secuencia de ADN codificadora del monocomponente, transformando posteriormente la célula huésped apropiada con la secuencia de ADN y expresando el componente en la célula huésped.

En consecuencia, la secuencia de ADN que codifica una celulasa útil puede ser aislada mediante un método general que implica:

- clonación de un banco de ADN en vectores adecuados, p. ej. a partir de uno de los microorganismos indicados más adelante en esta invención,

- transformación de las células huéspedes de levadura adecuadas mediante estos vectores,

- cultivo de las células huéspedes bajo condiciones adecuadas para expresar cualquier enzima de interés codificada por un clon en el banco de ADN,

- selección de los clones positivos determinando cualquier actividad celulasa de la enzima producida por estos clones, y

- aislamiento del ADN codificador de la enzima de estos clones.

Este método general se describe mejor en la patente WO 94/14953 (Novo Nordisk).

Una secuencia de ADN que codifica una celulasa útil puede ser aislada, por ejemplo, seleccionando un banco de ADNc del microorganismo en cuestión y seleccionando los clones que expresan la actividad enzimática apropiada (es decir, la actividad celulasa).

Se puede obtener una secuencia de ADN codificadora de un enzima homóloga, es decir, una secuencia de ADN análoga, a partir de otros microorganismos. Por ejemplo, la secuencia de ADN puede obtenerse mediante una selección similar de un banco de ADNc de otro hongo, como una cepa de Aspergillus sp., en particular una cepa de A. aculeatus o de A. niger, una cepa de Trichoderma sp., en particular una cepa de T. reesei, T. viride, T. longibrachiatum, T. harzianum o T. Koningii, o bien una cepa de Neocallimastix sp., de Piromyces sp., de Penicillium sp., de Agaricus sp., o de Phanerochaete sp..

De forma alternativa y según unos procedimientos bien conocidos, el ADN que codifica una celulasa útil puede ser aislado convenientemente del ADN de una fuente adecuada, como puede ser cualquiera de los organismos anteriormente mencionados, usando sondas sintéticas de oligonucleótidos preparadas en base a una secuencia de ADN conocida.

Posteriormente, la secuencia de ADN puede ser introducida en un vector de expresión recombinante. Este podrá ser cualquier vector que pueda ser convenientemente sometido a procedimientos de ADN recombinante, y la elección del vector dependerá a menudo de la célula huésped en la que vaya a ser introducido. De esta manera, el vector podrá ser un vector de replicación autónoma, es decir, un vector que existe como una entidad extracromosomal, cuya replicación es independiente de la replicación cromosómica, p. ej. un plásmido. De forma alternativa, el vector podrá ser uno que, al ser introducido en una célula huésped, se integre en el genoma huésped celular y se replique con los cromosomas en los que haya sido integrado.

En el vector, la secuencia de ADN codificadora de la celulasa debería estar conectada de forma operativa a un promotor y a una secuencia de terminación adecuados. El promotor puede ser cualquier secuencia de ADN que muestre una actividad transcripcional en la célula huésped seleccionada y podrá proceder de genes codificadores... [Seguir leyendo]

1. Método para provocar una variación localizada de la densidad del color en la superficie de un tejido celulósico teñido, que comprende la agitación del tejido en un medio acuoso con un pH en una gama entre 6.5 y 9, y que contiene:

un primer componente que puede ser

(a) una celulasa de la Familia 5 capaz de hidrolizar p-nitrofenil-b-1,4-celobiosida, o bien

(b) una celulasa de la Familia 7,

y un segundo componente que puede ser

(a) un agente abrasivo mecánico, o bien

(b) una celulasa con actividad abrasiva.

donde cada celulasa exhibe al menos un 30% de su actividad máxima con un pH 7.

2. Método según la reivindicación 1 según el cual el tejido es denim teñido de azul índigo.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, según el cual el primer componente es una celulasa de la Familia 5 sin un dominio de enlace de la celulosa, derivada de una cepa bacteriana, preferiblemente de una cepa de Bacillus.

4. Método según la reivindicación 3 según el cual la celulasa de la Familia 5 deriva de una cepa de Bacillus seleccionada del grupo compuesto por Bacillus sp. KSM-64, 1139, KSM-635, NCIMB 40482 y Bacillus lautus NCIMB 40250, o es una celulasa con al menos un 60% de homología con esta celulasa.

5. Método según la reivindicación 1 ó 2 según el cual el primer componente es una celulasa de la Familia 7 derivada de una cepa micótica, preferiblemente de una cepa de Humicola, más preferiblemente de H. insolens.

6. Método según la reivindicación 5, según el cual la celulasa de la Familia 7 es una endoglucanasa EG I derivada de una cepa de H. insolens DSM 1800, o es una celulasa con al menos un 60% de homología con dicha EG I.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el primer componente está presente en una cantidad de 0.1-0.5 mg/l o en una concentración de 100-1000 ECU/l.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el que el segundo componente consta de un agente abrasivo mecánico, así como de una celulasa abrasiva.

9. Método de cualquiera de las reivindicaciones 1-8 en el que el segundo componente es una celulasa de la Familia 45 con un dominio de enlace de la celulosa, derivada de una cepa micótica, preferiblemente una cepa de Humicola, más preferiblemente de H. insolens.

10. Método según la reivindicación 9 en el que la celulasa de la Familia 45 es una endoglucanasa EG V derivada de una cepa de H. insolens DSM 1800, o es una celulasa con al menos un 60% de homología con dicha EG V.

11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-13 en el que no se encuentra presente esencialmente ninguna celulasa diferente del primer y segundo componente especifico.

12. Composición de celulasa que comprende:

un primer componente que puede ser

(a) una celulasa de la Familia 5 capaz de hidrolizar p-nitrofenil-b-1,4-celobiosida, o bien

(b) una celulasa de la Familia 7,

y un segundo componente que puede ser

(a) un agente abrasivo mecánico o bien

(b) una celulasa con actividad abrasiva.

donde cada celulasa exhibe al menos un 30% de su actividad máxima con un pH 7.

13. Composición de celulasa según la reivindicación 12, caracterizada de la misma manera que en cualquiera de las reivindicaciones 2-11.