PÉPTIDO DERIVADO DE LA INTERLEUCINA-1-BETA Y SU APLICACIÓN TERAPÉUTICA.

Péptido derivado de la interleucina-1-beta y su aplicación terapéutica La presente invención se refiere a nuevos péptidos y a su aplicación terapéutica. La inmunización activa anti-citoquina es una estrategia de inmunoterapia activa desarrollada desde 1990 por Zagury y otros, que se basa, en particular, en la solicitud de patente WO 92/22577. Esta idea ha sido recogida por varios equipos de científicos que han publicado en revistas científicas internacionales inmunizaciones activas contra la proteína entera de IFN, multimerizada mediante tratamiento con glutaraldehído (Gringeri y otros, JAIDS 1999; 20:358-70), una proteína TNF quimérica que consiste en el acoplamiento de la proteína nativa del TNF con un epítopo T de la ovalbulmina (Dalum y otros, Nature Biotechnology, 1999; 17:666- 69), en contra de la IL9 entera acoplada con KLH (Richard y otros, PNAS, 2000; 97:767-72) o también, de la IL5 entera quimérica con un epítopo T de toxina tetánica (Hertz y otros, J. Immunol, 2001; 167:3792-99). Estos enfoques han confirmado la factibilidad de inmunizaciones autólogas anti-citoquinas, pero algunos de estos éxitos ocultan los ensayos infructuosos descritos por algunos autores: algunas citoquinas no permiten obtener anticuerpos suficientemente protectores y de efecto clínico, y la misma citoquina preparada de forma eficaz de una manera no lo será de otra (Richard y otros, PNAS, 2000; 97:767-72). Tratando de explicar este fenómeno, la solicitante ha observado que hasta ahora todos los autores han utilizado unas citoquinas enteras (eventualmente, ligeramente modificadas), lo que conlleva unas dificultades, en particular, a los siguientes niveles: - dilución del poder inmunogénico de los determinantes antigénicos de interés (para las respuestas B y T) - posible génesis facilitando anticuerpos in vivo (respuesta B). Por lo tanto, sería deseable disponer de antígenos que permitieran obtener anticuerpos suficientemente protectores frente a citoquinas, y que limitaran su actividad. El documento WO-A-98/51705 describe unos péptidos de h RANTES, MIP1 y MIP1ß, comprendidos entre la segunda y la tercera cisteína de estas quimioquinas que se enlazan al co-receptor CCR5. El documento WO-A-98/34631 describe unos péptidos procedentes de cadenas de receptores de citoquinas utilizados para bloquear la fijación de la citoquina o la activación del receptor. El documento WO-A-94/01457 describe unos péptidos de IFN utilizados como sustancias portadoras de compuestos farmacéuticos. El documento EP-A-0218531 describe unos péptidos de IL1 utilizados para la preparación de anticuerpos. El documento WO-A-00/53219 divulga el uso de péptidos derivados de VEGF para obtener vacunas para una inmunización activa o para obtener anticuerpos para inmunizar pasivamente al ser humano o animales. Uno de los péptidos, generado a partir del dominio de enlace de VEGF al receptor neuropilina, es capaz de inhibir metástasis B16BL6, inducidas experimentalmente en ratones. La invención se define mediante las reivindicaciones. Debido a su longitud, los péptidos de citoquina, según la invención, corresponden a un número limitado de epítopos de la citoquina, en general, a uno o dos epítopos de la citoquina, y están, por lo tanto, desprovistos de otros numerosos epítopos que ellas contienen. Por "citoquina" se entiende tanto las citoquinas naturales, como las citoquinas quimio-atractivas, también denominadas quimioquinas. Se prefieren las citoquinas humanas. La expresión "que interactúan" significa que estos anticuerpos, por ejemplo, bien porque reconocen la proteína nativa tal como se puede demostrar mediante un ensayo inmunológico (ELISA, transferencia western), bien porque bloquean el enlace de la citoquina con su receptor tal como se puede demostrar mediante un ensayo de actividad biológica o mediante un ensayo de competición bioquímica, tienen un efecto clínico beneficioso in vivo. Los péptidos de citoquina, según la invención, proceden o derivan de una citoquina. Por el término "provienen" se entiende que su secuencia de aminoácidos es idéntica a la de la citoquina. Por la expresión "derivan de" se entiende que su secuencia de aminoácidos es mayoritariamente idéntica a la de la citoquina, pero que presente algunas diferencias, tal como se explicará a continuación. 2 E03740584 04-01-2012   Al menos, un aminoácido de los péptidos de citoquina de la invención, y preferiblemente dos aminoácidos consecutivos, posee(n) uno de sus átomos separado por menos de 5 angstroms de un átomo del receptor correspondiente a dicha citoquina. Está ventajosamente separado por menos de 4,5 angstroms, en particular separado por menos de 4 ángstroms y particularmente separado por menos de 3,5 ángstroms de un átomo del receptor que corresponde a dicha citoquina. En general, el átomo afectado del aminoácido se encuentra en la cadena lateral de dicho aminoácido. En unas condiciones preferidas de aplicación de la invención 2, en particular 3, y preferiblemente 4 aminoácidos consecutivos del péptido de citoquina responden a este mismo criterio de separación. Esta separación se evalúa en datos estructurales, por ejemplo, de cristalografía, o también mediante RMN que da unos resultados similares a las medidas cristalográficas. Los péptidos de citoquina anteriores constan ventajosamente de más de 8, en particular más de 10, particularmente más de 12 y muy particularmente más de 15 aminoácidos. En otras condiciones preferidas de aplicación de la invención, los péptidos de citoquina anteriores constan de menos de 35, ventajosamente menos de 30, en particular menos de 25 y particularmente menos de 20 aminoácidos. Generalmente, las secuencias más cortas corresponden a unos péptidos que contienen un solo grupo de, al menos, dos aminoácidos consecutivos que constan de, al menos, uno de sus átomos separados por menos de 5 angstroms de un átomo del receptor correspondiente a dicha citoquina, mientras que las secuencias más largas corresponden en general a unos péptidos, según la invención, que contienen dos o incluso tres grupos o más de tales aminoácidos consecutivos. En efecto, estos grupos pueden estar separados por varios, por ejemplo, 10 aminoácidos tal como en el caso de IL1ß. Entre los péptidos de citoquina anteriores, se retiene el péptido siguiente: - 123-STSQAENMPV-132 de hlL1ß Tal como es conocido por el experto en la técnica de la inmunología, son posibles modificaciones de las cadenas peptídicas naturales sin por ello modificar la naturaleza de las propiedades inmunológicas de los péptidos inmunogénicos. Se pueden citar por lo tanto los derivados de péptidos de citoquina que son altamente homólogos a estas secuencias naturales, por ejemplo que tienen más de 80% de homología o incluso más de 90% de homología con el péptido nativo correspondiente, conservando al mismo tiempo las propiedades inmunológicas de este sitio epitópico del péptido nativo. Su zona de homología puede variar de 5 a 40 residuos, por ejemplo de 8 a 40 residuos, o también de 8 a 35 residuos, preferiblemente de 10 a 35 residuos, pero también de 12 a 35 residuos, en particular de 12 a 30 residuos, más particularmente de 15 a 30 residuos y muy particularmente de 15 a 25 residuos. Los derivados de péptidos de citoquina pueden contener unos residuos modificados, con la condición de que las modificaciones no disminuyan sensiblemente la inmunogenicidad, mediante adición de radicales químicos (metilo, acetilo, etc.) o mediante modificación estereoquímica (uso de aminoácidos de serie D). Los derivados peptídicos de citoquina deben inducir, como los péptidos de citoquina, anticuerpos que interactúan con la citoquina. Los derivados peptídicos de citoquina según la invención pueden constar de una o más modificaciones en los aminoácidos de los que están constituidos tales como deleciones, sustituciones, adiciones o funcionalizaciones (tales como acilación) de uno o más aminoácidos, en la medida en la que estas modificaciones siguen en el ámbito precisado antes (caracteres inmunológicos). En general, por ejemplo, la sustitución de un residuo de leucina por un residuo de isoleucina no modifica tales propiedades; las modificaciones deben afectar en general menos de 40% de aminoácidos, en particular menos de 30%, preferiblemente menos de 20% y muy particularmente menos de 10% de los aminoácidos del péptido natural. Es importante que los anticuerpos inducidos por los péptidos modificados sean activos frente a la citoquina nativa. Estas modificaciones están al alcance del experto en la técnica que puede verificar la incidencia de las modificaciones mediante unos ensayos simples. La inmunogenicidad de tales derivados modificados se puede evaluar mediante ELISA después de la inmunización de ratones, siendo el antígeno ensayado mediante ELISA la citoquina entera o el péptido de... [Seguir leyendo]

1. Vacuna que contiene un compuesto inmunogénico que comprende un péptido que tiene un tamaño comprendido entre 10 y 30 aminoácidos, y que tiene más de 80% de identidad con la secuencia peptídica de citoquina IL-1 beta siguiente: 123-STSQAENMPV-132 (ID SEQ Nº 3); en la que dicho compuesto inmunogénico no comprende otros epítopos de dicha citoquina y en la que dicho compuesto inmunogénico es capaz de generar en un sujeto anticuerpos que reconocen la citoquina nativa. 2. Vacuna, según la reivindicación 1, para un uso para el tratamiento de las enfermedades autoinmunes. 3. Vacuna, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicho péptido está acoplado a una proteína portadora. 4. Vacuna, según la reivindicación 3, en la que dicha proteína portadora se selecciona entre KLH, Tetanus Toxoid, la transferrina y la ferritina. 5. Vacuna, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además uncoadyuvante de inmunidad mineral, oleoso o de síntesis. 6. Vacuna, de ADN que codifica el péptido, tal como se ha definido en la reivindicación 1. 22 E03740584 04-01-2012   Figura 1 Figura 2 23 E03740584 04-01-2012