Métodos para la inhibición de células NKT.

Una dosis eficaz de un β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d para bloquear o reducir la hiperreactividad de las vías respiratorias asociada al asma,

donde dicho β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d es administrado local o sistémicamente.

Métodos para la inhibición de células NKT

Esta invención se llevó a cabo con el respaldo del gobierno con la subvención NIH-AI-40093 adjudicada por los Institutos Nacionales de Salud. El Gobierno tiene ciertos derechos sobre esta invención.

Los linfocitos NKT constituyen una subpoblación única de linfocitos T, que están altamente conservados tanto en la especie humana como murina. Los linfocitos NKT expresan algunos marcadores de superficie específicos de los 10 linfocitos NK (citolíticos naturales) , como la lectina tipo C NKRP-1A, compartiendo de ese modo algunas propiedades con los linfocitos NK clásicos. Los linfocitos NKT también expresan un receptor de linfocitos T semiinvariante, que consta de un reordenamiento Vα24JαQ invariante apareado preferentemente con una cadena Vβ11 variable. En el ratón, los linfocitos NKT expresan un reordenamiento Vα14Jα281 invariante apareado con Vβ8, Vβ7 o Vβ2 variables. En términos de expresión del co-receptor, los linfocitos NKT invariantes pertenecen al subconjunto de

linfocitos CD4+ simple positivo o CD4-CD8-TCRα/β+ doble negativo.

Aunque los ligandos naturales de los linfocitos NKT aún no han sido identificados, esas células se activan cuando su TCR reconoce glucosilceramidas derivadas de esponjas marinas, presentadas por CD1d. Aunque esta clase de ceramidas α-glucosiladas no son detectables en mamíferos, pueden compartir características estructurales

fundamentales con los ligandos naturales de CD1d, lo que sugiere que los linfocitos NKT reconocen antígenos que contienen una porción hidrófoba (lípido) y una porción hidrófila.

El rol biológico de los linfocitos NKT no está bien definido. En respuesta a la activación a través de su receptor de los linfocitos T, los linfocitos NKT han demostrado segregar grandes cantidades tanto de interferón-γ (IFN-γ) como de

interleucina-4 (IL-4) (véase, por ejemplo, Hong et al. (1999) Immunol. Rev. L 169:131; y Singh et al. (1999) J Immunol 163:2373) . Después de la activación repetida, los linfocitos NKT se tornan células polarizadas que producen predominantemente IL-4.

También se ha sugerido que los linfocitos NKT tiene una función inmunoreguladora en el control de la propensión a

ciertas enfermedades autoinmunitarias. Por ejemplo, en algunos modelos de enfermedad, la transferencia de linfocitos NKT a receptores propensos a la enfermedad evita la aparición de una enfermedad autoinmunitaria, y se ha sugerido que la activación de los linfocitos NKT podría representar una intervención terapéutica para la inmunoregulación de la enfermedad autoinmunitaria (Sharif et al. (2002) J MoI. Med. 80:290-300) mediante la polarización de los linfocitos T convencionales hacia la producción de IL-4. También se ha informado que los

linfocitos NKT y la IL-13 (producida posiblemente por linfocitos NKT) pueden disminuir reguladamente la vigilancia inmunológica de un tumor mediada por los linfocitos T citotóxicos (Terabe et al. (2000) Nat Immunol. 1 (6) :515-20) .

Sin embargo, también se ha informado que la activación de los linfocitos NKT aumenta las respuestas inmunitarias tipo Th1 y la secreción de un autoanticuerpo que contribuye a la aparición de lupus en ratones NZB/W adultos (Zeng

et al. (2003) J Clin Invest 112:1211) .

El rol de los linfocitos NKT en las afecciones clínicas humanas es de gran interés. Existe un alto nivel de conservación entre especies para el sistema de linfocitos NKT. La α-galactosilceramida puede estimular tanto los linfocitos NKT humanos como murinos, y tanto las moléculas CD1d humanas como de ratón pueden presentar α

45 GalCer a los linfocitos NKT de cualquier especie, lo que indica la pertinencia de los estudios en animales para los ensayos clínicos humanos. La presente invención proporciona métodos de manipulación de las respuestas de los linfocitos NKT.

Resumen de la invención

50 Se proporcionan composiciones para inhibir ("anergizar") la función de los linfocitos NKT inhibiendo de ese modo la activación de los linfocitos NKT por los agonistas naturales o sintéticos. Las moléculas que interactúan con el receptor del antígeno de los linfocitos NKT y su molécula presentadora, p. ej. CD1, de modo de inhibir la función inmunitaria de los linfocitos NKT, se administran a un paciente y actúan inhibiendo la activación de los linfocitos

55 NKT. La afección de particular interés es asma. En algunas realizaciones de la invención, el agente inhibidor es un glucolípido anergizante que regula por disminución los receptores del antígeno de los linfocitos NKT. Dichos glucolípidos pueden comprender una unión β entre las porciones azúcar y lípido, por ejemplo β-galactosilceramida. Se proporcionan formulaciones farmacéuticas de dichos glucolípidos y encuentran uso en el tratamiento de enfermedades que implican la activación indeseable de linfocitos NKT.

60 Breve descripción de las figuras

Figuras 1A -1 D. El tratamiento con β-Galcer reduce los efectos de activación de los linfocitos NKT in vivo, que incluyen la expresión de IFN-γ, IL-4 y la síntesis de IgE. La síntesis de lgG2c no es afectada.

Figura 3A-C. El tratamiento con C12-β-GalCer reduce la AHR inducida por OVA/alum.

Figura 4A-B. El tratamiento con el anticuerpo anti-CD1d (HB323) bloquea la hiperreactividad de las vías respiratorias (AHR) inducida por OVA/alum.

Figura 5. Administración oral de β-galactosilceramida.

Descripción detallada de la invención

Se proporcionan composiciones para inhibir la función inmunitaria de los linfocitos NKT. Las moléculas que interactúan específicamente con el receptor del antígeno de los linfocitos NKT y su molécula presentadora, p. ej.

CD1, y que inhiben la función inmunitaria de los linfocitos NKT se administran a un paciente y actúan inhibiendo la respuesta de activación de los linfocitos NKT a los agonistas. En algunas realizaciones de la invención, el agente bloqueante es un glucolípido anergizante que regula por disminución los receptores del antígeno de los linfocitos NKT. Dichos glucolípidos pueden comprender una unión β entre las porciones azúcar y lípido, por ejemplo βgalactosilceramida.

El término "tratamiento" o "tratar" significa cualquier tratamiento de una enfermedad en un mamífero, incluida el asma, en modelos humanos y animales. El tratamiento incluye prevenir la enfermedad, es decir, evitar que los síntomas clínicos de la enfermedad se presenten mediante la administración de una composición protectora antes de la inducción de la enfermedad; suprimir la enfermedad, es decir, evitar que los síntomas clínicos de la

enfermedad se presenten mediante administración de una composición protectora después de un suceso inductor pero antes de la aparición o reaparición clínica de la enfermedad; inhibir la enfermedad, es decir, detener la evolución de los síntomas clínicos mediante administración de una composición protectora después de su aparición inicial; y/o aliviar la enfermedad, es decir, lograr la regresión de los síntomas clínicos mediante administración de una composición protectora después de su aparición inicial.

Se comprenderá que en medicina humana, no siempre es posible distinguir entre "prevenir" y "suprimir" puesto que el último o los últimos sucesos inductores pueden ser desconocidos, estar latentes, o el paciente no ser verificado hasta bastante después de la aparición del suceso o los sucesos. Por consiguiente, es común utilizar el término "profilaxis" a diferencia de "tratamiento" para abarcar tanto "prevenir" como "suprimir" según se definieron en este

documento. El término "tratamiento", según se usa en este documento, pretende incluir "profilaxis".

La expresión "cantidad eficaz" significa una dosis suficiente para proporcionar tratamiento para la enfermedad que se está tratando. Ésta variará dependiendo del paciente, la enfermedad y el tratamiento que se está efectuando. Los agentes inhibidores de los linfocitos NKT se usan para el tratamiento de una enfermedad; y se pueden usar en co

formulaciones, p. ej., con un agente que permita disminuir la dosis de corticoesteroides... [Seguir leyendo]

1. Una dosis eficaz de un β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d para bloquear o reducir la hiperreactividad de las vías

respiratorias asociada al asma, donde dicho β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d es administrado local o sistémicamente.

2. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 1, donde la administración local comprende inhalación

o inflación. 10

3. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 2, donde la administración local es inhalación.

4. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 1, donde la administración sistémica comprende la

inyección intramuscular, intravenosa, subcutánea, peritoneal o local; o la administración oral, transmucosa, 15 transdérmica o intranasal.

5. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d se administra profilácticamente.

20 6. El β-glucolípido de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido comprende un azúcar pentosa, un azúcar hexosa, un oligosacárido o un polisacárido.

7. El β-glucolípido de la reivindicación 6, donde dicha azúcar hexosa comprende glucosa, galactosa o manosa.

25 8. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido consiste en un lípido que comprende un ácido graso C8 a C30, un alcohol secundario de cadena larga, un amino alcohol de cadena larga, o una amida de ácido graso con una di- o trihidroxi base de cadena larga, cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente fosforilado o sulfatado.

30 9. El β-glucolípido de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido consiste en un lípido que comprende una ceramida, esfingomielina, cerebrósidos, esfingosina, dihidroesfingosina, C20-dihidroesfingosina, fitoesfingosina, C20-fitoesfingosina, dehidrofitoesfingosina o esfingadienina.

10. El β-glucolípido de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido es β-galactosilceramida. 35

11. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d consiste en 0.5 a 95% en peso basado en el peso total de la composición.

12. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d 40 se administra en una dosis entre aproximadamente 0.1 y 100 mg/kg de peso corporal en una base diaria.

13. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d consiste en 0.1 mg a 500 mg de una forma farmacéutica para administración interna.

45 14. El β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d de la reivindicación 1, donde dicho β-glucolípido o anticuerpo anti-CD1d consiste en una solución acuosa, una suspensión acuosa, una preparación liposómica o una formulación en polvo.