Método y composición útiles para determinar FK-506.

Método para determinar la presencia de una composición farmacéutica de unión a macrofilina en una muestra que comprende:

añadir un competidor de unión a la muestra teniendo el competidor de unión la fórmula:

o solvato del mismo, en el que

R es alquilo, arilo, alilo, teniendo cada uno menos de 25 carbonos y en el que

R' es alquilo, arilo, alilo, teniendo cada uno menos de 25 carbonos o H; añadir un receptor que une al producto farmacéutico pero no significativamente al competidor de unión; detectar el receptor-composición farmacéutica y determinar la cantidad del producto farmacéutico.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2004/038640.

Solicitante: SIEMENS HEALTHCARE DIAGNOSTICS INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1717 DEERFIELD ROAD DEERFIELD, IL 60015 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: WANG, CHENGRONG, WEI,Tie Q, TENG,Zhu.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07D267/00 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07D COMPUESTOS HETEROCICLICOS (Compuestos macromoleculares C08). › Compuestos heterocíclicos que contienen ciclos de más de seis miembros que tienen un átomo de nitrógeno y un átomo de oxígeno como únicos heteroátomos del ciclo.
  • C07D498/18 C07D […] › C07D 498/00 Compuestos heterocíclicos que contienen en el sistema condensado al menos un heterociclo que tienen átomos de nitrógeno y oxígeno como únicos heteroátomos del ciclo (4-oxa-1-azabiciclo [3.2.0] heptanos, p. ej. oxapenicilinas C07D 503/00; 5-oxa-1-azabiciclo [4.2.0] octanos, p. ej. oxacefalosporinas C07D 505/00; aquéllos de sus análogos que tienen el átomo de oxígeno del ciclo en otra posición C07D 507/00). › Sistemas puenteados.
  • G01N33/532 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Producción de compuestos inmunoquímicos marcados.
  • G01N33/533 G01N 33/00 […] › con un marcador fluorescente.
  • G01N33/534 G01N 33/00 […] › con un marcador radiactivo.
  • G01N33/535 G01N 33/00 […] › con un marcador enzimático.
  • G01N33/553 G01N 33/00 […] › Soporte metálico o recubierto de un metal.
  • G01N33/566 G01N 33/00 […] › utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando.
  • G01N33/94 G01N 33/00 […] › en los que intervienen narcóticos.

PDF original: ES-2379959_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Método y composición útiles para determinar FK-506

5 Antecedentes de la invención

Esta invención se refiere a un método para determinar los niveles de FK-506 u otras sustancias de unión a macrofilina en la sangre, particularmente sangre no extraída en presencia de proteínas de unión específica para FK

506. El método usa derivados de FK-506 para desplazar el FK-506 de las proteínas de unión específica para FK10 506.

FK-506 (o tacrolimús) es un undecapéptido poli-N-metilado cíclico, que tiene actividad inmunosupresora. FK-506 es un inmunosupresor macrólido que se produce por Streptomyces tsukubaensis nº 9993. La estructura de FK-506 se muestra en la figura 1.

Además, también se conocen un gran número de compuestos relacionados que conservan la estructura básica y las propiedades inmunológicas de FK-506. Estos compuestos se describen en varias publicaciones, por ejemplo los documentos EP 184162, EP 315973, EP 323042, EP 423714, EP 427680, EP 465426, EP 474126, WO 91/13889, WO 91/19495, EP 484936, EP 532088 y WO 93/5059.

Se usan compuestos de FK-506, por ejemplo, en la prevención del rechazo de trasplantes. Sin embargo, estos compuestos de FK-506 tienen efectos secundarios a dosis superiores y por tanto su concentración en la sangre debe mantenerse dentro de determinados intervalos terapéuticos. Además, las biodisponibilidades y las tasas de conversión metabólica tienden a ser específicas del paciente y por tanto la dosificación es específica del paciente. La potencia y el espectro de toxicidad de FK-506 requieren métodos sensibles, reproducibles y fiables para monitorizar la concentración en sangre de estos compuestos. Por tanto, es necesario monitorizar la concentración de estos fármacos inmunosupresores en la sangre a intervalos regulares. La rapamicina y ciclosporina son otros compuestos usados en la prevención del rechazo de trasplantes. Estos fármacos pueden usarse individualmente o en combinación.

Se ha encontrado que una parte del compuesto de FK-506 presente en la sangre existe en forma de un complejo FK-506-inmunofilina. Las inmunofilinas son una familia de proteínas de unión intracelular que se unen a ciclosporinas, rapamicinas o compuestos de FK-506. Actualmente se conocen dos familias distintas de inmunofilinas; ciclofilinas que se unen a ciclosporinas y macrofilinas que se unen a rapamicinas (sirolimús) y sus derivados tales como everolimús y compuestos de FK-506. Las estructuras de determinadas inmunofilinas se describen en Walkinshaw et al; 1992; Transplantation Proceedings, 24, 4 (2) , 8-13. Las macrofilinas que se unen a FK-506 se denominan proteínas de unión a FK-506. Hasta la fecha, se han notificado cinco miembros: FKBP - 12, FKBP - 12.6, FKBP -13, FKBP-25 y FKBP - 52.

Dada la importancia de ciclosporinas, rapamicinas y compuestos de FK-506 como productos farmacéuticos, existe una necesidad de ensayos sensibles, sencillos para determinar sus concentraciones en sangre.

Para FK-506, se han desarrollado anticuerpos monoclonales específicos y procedimientos de ensayo basados en los anticuerpos proporcionados. Documentos WO 95/07468, US 5.532.137. Sin embargo, estos procedimientos de ensayo disponibles requieren que se extraiga en primer lugar la muestra de sangre o plasma con un disolvente (tal como metanol) que entonces se elimina mediante evaporación o dilución para liberar el FK-506 de su proteína de unión. Entonces se añade el anticuerpo a la muestra y se detecta el complejo FK-506-Ac. El procedimiento de ensayo basado en el anticuerpo monoclonal específico funciona bien pero la necesidad de la etapa de extracción y la eliminación posterior del disolvente puede dar como resultado que el ensayo sea menos sensible y menos preciso si no se tiene cuidado. Por tanto, el ensayo debe llevarse a cabo por técnicos expertos y es un procedimiento que lleva mucho tiempo.

Se conoce a partir de estudios realizados in vitro que concentraciones en exceso de rapamicina previenen los efectos de FK-506 desplazando FK-506 de FKBP. Fruman, David et al., Calcineurin fosfatase activity in T lymphocytes is inhibited by FK-506 and cyclosporin A, PNAS (1992) 89 (9) , 3683-90. Además, el documento EP 717850 da a conocer un método de ensayo para FK-506 que usa un competidor de unión, concretamente rapamicina, para desplazar FK-506 de su proteína de unión. Por tanto, no es necesaria una etapa de extracción. Sin embargo, puesto que rapamicina, FK-506 y ciclosporina pueden usarse individualmente o en combinación, se prefiere que el competidor de unión sea un compuesto diferente de uno de los fármacos inmunosupresores de manera que pueda controlarse la cantidad de competidor de unión en la muestra.

El documento US-B-6 187 547 da a conocer un método de medición de los niveles en sangre de productos farmacéuticos de unión a inmunofilina, incluyendo ciclosporinas, rapamicinas y compuestos de FK-506, que incluye la etapa de desplazar el producto farmacéutico de su inmunofilina usando un competidor de unión. Por ejemplo, puede usarse rapamicina como competidor de unión en ensayos para FK-506 o, viceversa, puede usarse FK-506 como competidor de unión en ensayos para rapamicina.

Sumario de la invención

La presente invención describe derivados de FK-506. Estos derivados pueden actuar como competidor de unión para desplazar FK-506 o rapamicina de sus complejos de inmunofilina. Los derivados también se denominan en el presente documento competidores de unión.

Además, esta invención proporciona un procedimiento de ensayo para determinar la concentración de FK-506 o rapamicina en una muestra de sangre u otro fluido; comprendiendo el procedimiento añadir un competidor de unión que desplaza FK-506 o rapamicina de los complejos inmunosupresor-inmunofilina en la muestra; añadir un receptor que se une al producto farmacéutico pero no significativamente al competidor de unión; separar el complejo receptor-producto farmacéutico de la muestra; y determinar la cantidad del producto farmacéutico.

Descripción detallada de la invención Los derivados de FK-506 se preparan mediante derivatización de tacrolimús. Los derivados se forman en los grupos o carbamato -OH de tacrolimús, en C-32 y/o C-24 para formar enlaces éter, (FK-OR) , éster proporcionando derivados de FK-506 en cualquiera o ambas de estas posiciones. En un aspecto, tanto el C-32 como C-24 se derivatizan y en otro aspecto los derivados son derivados de di-carbamato. Por tanto, las sustancias pueden ser por ejemplo los derivados ejemplificados en la figura 2. R (en C-32) y R' (en C-24) pueden seleccionarse independientemente de grupos alquilo o alilo desde C1 hasta C25, o bien lineales o bien ramificados o grupos aromáticos con o sin sustituciones. Además, el grupo alquilo, alilo o aromático puede contener otros grupos funcionales tales como éster, éteres, amidas, acilo, aminas, hidroxilo, sulfonatos, fosfatos, sulfatos, grupos fosfonato y similares. R puede no ser H. R' puede ser H. Muchos de estos derivados se conocen en la técnica. Véase, por ejemplo, el documento U.S. 5.665.727.

Figura 2

Figura 3

Otros aspectos de la invención se muestran en la figura 3 anteriormente. Estos derivados de carbamato se derivatizan tanto en C-24 como C-32. R y R' pueden seleccionarse independientemente de alquilo, alilo, acilo, arilo, además el grupo alquilo, alilo o aromático puede contener otros grupos funcionales tales como éster, éteres, amidas, acilo, sulfonatos, fosfatos, sulfatos, grupos fosfonato y similares. R puede ser H. R' puede ser H.

Figura 4

Se muestra anteriormente un derivado de carbamato particular en la figura 4. Este derivado de carbamato se derivatiza tanto en C-24 como C-32. En este ejemplo, R y R' son idénticos.

Los derivados de FK-506 usados en la presente invención pueden prepararse mediante métodos conocidos en la técnica y son útiles en inmunoensayos como competidores de unión de FK-506 o rapamicina.

En el método de la presente invención, se añade un competidor de unión de FK-506 o rapamicina a la muestra para liberar cualquier FK-506 o rapamicina de su complejo. El competidor de unión es un derivado o análogo de FK-506 tal como se muestra en las figuras 2, 3 y 4. El método de esta invención usa receptores que se unen al producto farmacéutico pero no significativamente al competidor de unión. El receptor, que reconoce y se une a FK-506 (o rapamicina si el producto farmacéutico que va a medirse es rapamicina) , puede ser cualquier compuesto de unión... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Método para determinar la presencia de una composición farmacéutica de unión a macrofilina en una muestra que comprende: añadir un competidor de unión a la muestra teniendo el competidor de unión la fórmula:

o solvato del mismo, en el que R es alquilo, arilo, alilo, teniendo cada uno menos de 25 carbonos y en el que R' es alquilo, arilo, alilo, teniendo cada uno menos de 25 carbonos o H; añadir un receptor que une al producto farmacéutico pero no significativamente al competidor de unión; detectar el receptor-composición farmacéutica y determinar la cantidad del producto farmacéutico.

2. Método según la reivindicación 1, en el que el producto farmacéutico es rapamicina (sirolimús) , everolimús o tacrolimús (FK-506) .

3. Método para determinar la presencia de una composición farmacéutica de unión a macrofilina en una muestra que comprende: añadir un competidor de unión a la muestra teniendo el competidor de unión la 20 fórmula:

o solvato del mismo, en el que R es alquilo, arilo, alilo, teniendo cada uno menos de 25 carbonos y R' es alquilo, arilo, alilo, teniendo cada uno menos de 25 carbonos o H; añadir un receptor que se une al producto farmacéutico pero no significativamente al competidor de unión; detectar el receptor-composición farmacéutica y determinar la cantidad del producto farmacéutico.

5 4. Método según la reivindicación 3, en el que el producto farmacéutico es rapamicina (sirolimús) , everolimús

o tacrolimús (FK-506) .

5. Método según la reivindicación 4, en el que R o R' es etilo.

10 6. Método según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que R o R' comprenden además al menos un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste en ésteres, éteres, amidas, fosfatos, sulfonatos, sulfato, amidinas, fosfonatos o grupos funcionales carboxilato.

 

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