Desarrollo y utilización de sondas fluorescentes de bilirubina no enlazada.
Una composición que comprende:
(a) una sonda que se une a la bilirrubina pero que no se une significativamente al ácido graso,
comprendiendo dicha sonda una muteína de la proteína de unión a los lípidos intracelulares (iLBP) marcada con un primer fluoróforo, en donde la sonda se selecciona del grupo que consiste en:
L24P19C7 que tiene mutaciones 14R, 18L, 38V, 60R, 73F, 106C, 115R, 117D, marcadas con Acrylodan;
L24P19C7 K27A que tiene mutaciones 14R, 18L, 27A, 38V, 60R, 73F, 106C, 115R, 117D, marcadas con Acrylodan;
L24P19C7 K27K 22C que tiene mutaciones 14R, 18L, 22C, 38V, 60R, 73F, 106C, 115R, 117D, marcadas con Acrilodan;
L24P19C7 K27K 24C con mutaciones 14R, 18L, 24C, 38V, 60R, 73F, 106C, 115R, 117D, marcadas con Acrilodan;
L24P19C7 K27K 25C con mutaciones 14R, 18L, 25C, 38V, 60R, 73F, 106C, 115R, 117D, marcadas con Acrilodan;
L24P19C7 K27K 26C que tiene mutaciones 14R, 18L, 26C, 38V, 60R, 73F, 106C, 115R, 117D, marcadas con Acrilodan;
L24P19C7 K27K 30C con mutaciones 14R, 18L, 30C, 38V, 60R, 73F, 106C, 115R, 117D, marcadas con Acrilodan;
BL22P1B11 con mutaciones MGI, 7R, 14R, 16R, 18L, 20R, 25C, 27A, 29R, 37R, 38V, 46R, 50R, 60R, 73F, 88R, 92R, 94R, 100R, 106L, 115R, 117D, 125R, 129R, 130R, marcados con Acrilodan; BL22P1B11-24C con mutaciones MGI, 7R, 14R, 16R, 18L, 20R, 24C, 27A, 29R, 37R, 38V, 46R, 50R, 60R, 73F, 88R, 92R, 94R, 100R, 106L, 115R, 117D, 125R, 129R, 130R, etiquetados con Alexa Fluor 680 C2-maleimida en una cisteína;
BL22P1B11-27C que tiene mutaciones MGI, 7R, 14R, 16R, 18L, 20R, 27C, 29R, 37R, 38V, 46R, 50R, 60R, 73F, 88R, 92R, 94R, 100R, 106L, 115R, 117D, 125R, 129R, 130R, etiquetados con Alexa Fluor 680 C2-maleimida en una cisteína;
BL22P1B11-25K con mutaciones MGI, 7R, 16R, 18L, 20R, 25K, 27A, 29R, 37R, 38V, 46R, 50R, 60R 73F, 88R, 92R, 94R, 100R, 106L, 115R, 117D, 125R, 129R, 130R, marcados con LiCor IRDye 700 DX en una amina o en lisina en la posición 25,
en donde MGI se refiere a la mutación de la secuencia del extremo NH2 de tipo salvaje de MAFD a MGIFD, y en donde las mutaciones se refieren a SEQ ID NO: 3;
(b) un segundo fluoróforo, en el que el segundo fluoróforo está libre en solución o unido a una proteína que no se unen a la bilirrubina, en donde el primer fluoróforo y el segundo fluoróforo son capaces de excitarse a la misma longitud de onda, en donde el segundo fluoróforo no está unido a la sonda, y en donde la longitud de onda de emisión del primer fluoróforo y el segundo fluoróforo son diferentes, y en el que el segundo fluoróforo no es cambiar su emisión en respuesta a la unión de la bilirrubina a la muteína iLBP.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2012/052395.
Solicitante: Kleinfeld, Alan M.
Inventor/es: ZHU,BAOLONG, KAMPF,JAMES PATRICK, HUBER,ANDREW HENRY, KWAN,THOMAS.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/47 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de mamíferos.
- G01N33/533 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › con un marcador fluorescente.
- G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
- G01N33/72 G01N 33/00 […] › en los que intervienen pigmentos de la sangre, p. ej. la hemoglobina, la bilirrubina.
- G06F17/10 G […] › G06 CALCULO; CONTEO. › G06F PROCESAMIENTO ELECTRICO DE DATOS DIGITALES (sistemas de computadores basados en modelos de cálculo específicos G06N). › G06F 17/00 Equipo o métodos de procesamiento de datos o de cálculo digital, especialmente adaptados para funciones específicas (recuperación de la información, estructuras de las bases de datos o estructuras de los sistemas de archivos G06F 16/00). › Operaciones matemáticas complejas.
PDF original: ES-2733974_T3.pdf
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