Método para el diagnóstico de una infección bacteriana.

Método in vitro para el diagnóstico de la presencia de una infección bacteriana en un paciente,

comprendiendo dicho método: determinar el nivel de la procalcitonina o sus fragmentos de por lo menos 12 aminoácidos de longitud, en una muestra obtenida a partir de dicho paciente en el que dicha muestra es seleccionada de entre el grupo que comprende una muestra sanguínea, una muestra sérica, una muestra plasmática o un extracto de cualquiera de dichas muestras mencionadas anteriormente (i) por lo menos una vez antes del inicio de un tratamiento con antibiótico o en las seis horas tras el inicio del tratamiento, y (ii) por lo menos una vez después de 12 horas a 1 semana tras el inicio de un tratamiento con antibiótico del paciente;

y correlacionar dicho nivel de procalcitonina o de sus fragmentos con la presencia de una infección bacteriana, en el que una disminución de dicho nivel de por lo menos 20% por 24h resulta indicativo de la presencia de una infección bacteriana en el paciente y en el que el nivel umbral de la procalcitonina o de sus fragmentos de por lo menos 12 aminoácidos de longitud, en las muestras sanguínea, sérica y plasmática de dicho paciente es inferior a 0, 25 ng/ml.

Método para el diagnóstico de una infección bacteriana.

El objeto de la presente invención es el diagnóstico in vitro de la presencia de una infección bacteriana en un paciente.

Antecedentes de la invención La Procalcitonina (PCT) se ha convertido en un biomarcador bien establecido para el diagnóstico de la sepsis. La PCT refleja la gravedad de la infección bacteriana y se utiliza en particular para controlar la progresión de la infección a sepsis, sepsis severa, o choque séptico. Las concentraciones de la PCT en la sepsis, sepsis severa o choque séptico, son superiores, típicamente, a 1 ng/ml. Es posible utilizar la PCT para cuantificar la actividad de la infección asociada a la respuesta inflamatoria sistémica, para controlar el éxito terapéutico, y estimar el pronóstico (Assicot M. et al., : High serum procalcitonin concentrations in patients with sepsis and infection. Lancet, 1993, 341:515-8; Clec'h C et al., : Diagnostic and prognostic value of procalcitonin in patients with septic shock. Crit Care Med 2004; 32:1166-9; Lee Y J et al: Predictive comparisons of procalcitonin (PCT) level, arterial ketone body ratio, APACHE III score and multiple organ dysfunction score (MODS) in systemic inflammator y response syndrome (SIRS) , Yonsei Med J 2004, 45, 29-37; Meisner M: Biomarkers of sepsis: clinically useful? Curr Opin Crit Care, 2005, 11, 473-480; Wunder C et al: Are IL-6, IL-10 and PCT plasma concentrations reliable for outcome prediction in severe sepsis? A comparison with APACHE III and SAPS II. Inflamm Res 2004, 53, 158-163) . El aumento de los niveles de PCT en pacientes con sepsis se correlaciona con la mortalidad (Oberhoffer M et al.: Outcome prediction by traditional and new biomarkers of inflammation in patients with sepsis. Clin Chem Lab Med 1999; 37: 363-368) .

Un número creciente de estudios considera el papel potencial de PCT en enfermedades infecciosas no sépticas como la neumonía, la meningitis bacteriana y la malaria (Bugden SA et al: The potential role of procalcitonin in the emergency department management of febrile young adults during a sustained meningococcal epidemic. Emerg Med Australas 2004, 16, 114-119; Chiwakata CB et al: Procalcitonin as a parameter of disease severity and risk of mortality in patients with Plasmodium falciparum malaria. J. Infect. Dis. 2001, 183, 1161-1164; Schwarz S et al: Serum procalcitonin levels in bacterial and abacterial meningitis, Crit Care Med 2000, 28, 1828-1832) .

Los estudios in vitro han mostrado que la PCT desempeña una función importante durante la adhesión y migración de los monocitos y, además, posee un efecto sobre la expresión inducible del gen de la óxido nítrico sintasa (iNOS) (Linscheid P. et al: Expression and secretion of procalcitonin and calcitonin gene-related peptide by adherent monocytes and by macrophage-activated adipocytes, Crit Care Med 2004, 32, 1715-1721. Wiedermann F.J. et al: Migration of human monocytes in response to procalcitonin, Crit Care Med 2002, 30, 1112-1117; Hoffmann G.et al: Procalcitonin amplifies inducible nitric oxide synthase gene expression and nitric oxide production in vascular smooth muscle eclls, Crit Care Med 2002, 30, 2091-2095) .

La PCT se ha utilizado para guiar la terapia antibiótica (Christ-Crain M et al: Effect of procalcitonin-guided treatment on antibiotic use and outcome in lower respirator y tract infections: cluster-randomised, single-blinded intervention trial, Lancet, 21 de febrero de 2004; 363 (9409) : 600-7) . En pacientes con síntomas de infecciones del tracto respiratorio inferior, que se presentaron en el servicio de urgencias, se midió la PCT, y sólo los pacientes con concentraciones de PCT >0.25 ng/ml, o > 0, 5 ng/ml, se trataron con antibióticos. Aparentemente, este régimen condujo a un resultado clínico indistinguible del grupo de control, en el que también recibieron antibióticos muchos pacientes con concentraciones de PCT < 0, 25 ng/ml. Debe mencionarse que, en este estudio, los pacientes con comorbilidades importantes, como, por ejemplo, insuficiencia cardíaca, fueron excluidos. Así, no está claro si la presencia de una primera enfermedad añadida a una infección, influirá en la interpretación de las concentraciones de PCT inferiores a 0, 25 ng/ml. Una enfermedad primaria importante podría añadir una carga adicional al sistema inmunológico, y los biomarcadores de infección, tales como la PCT, podrían en dicha situación indicar una infección en un intervalo distinto de concentración, por ejemplo, más bajo, que en la ausencia de una enfermedad primaria importante.

En individuos sanos, la concentración de PCT es correcta por debajo de 0, 25 ng/ml. Se ha determinado que la concentración media es de 0, 014 ng/ml. (Morgenthaler NG et al: Sensitive immunoluminometric assay for the detection of procalcitonin. Clin. Chem, mayo de 2002, 48 (5) :788-90) .

En el documento WO 2008/040328 A2, se describe un método para el diagnóstico de enfermedades infecciosas o inflamatorias de las vías aéreas y pulmonares, asociadas con insuficiencia cardíaca, en el que el marcador procalcitonina se determina en un paciente.

La técnica anterior más próxima para el objeto reivindicado es N. Köksal et al. (2007) , The Turkish Journal of Pediatrics, vol. 49, p. 21-29. Köksal et al. dan a conocer la PCT como marcador para un tratamiento con antibióticos apropiado. Los niveles en plasma de la PCT se considera que deben ser inferiores a 0, 5 ng/ml.

Sumario de la invención La invención en su sentido más amplio es definida por la reivindicación independiente 1:

Método in vitro para el diagnóstico de la presencia de una infección bacteriana en un paciente, comprendiendo dicho método: determinar el nivel de la procalcitonina o sus fragmentos de por lo menos 12 aminoácidos de longitud, en una muestra obtenida a partir de dicho paciente en el que dicha muestra es seleccionada de entre el grupo que comprende una muestra sanguínea, una muestra sérica, una muestra plasmática o un extracto de cualquiera de dichas muestras mencionadas anteriormente

(i) por lo menos una vez antes del inicio de dicho tratamiento con antibiótico o dentro de las seis horas tras el inicio del tratamiento, y

(ii) por lo menos una vez después de 12 horas a 1 semana tras el inicio de un tratamiento con antibiótico del paciente;

y correlacionar dicho nivel de procalcitonina o de sus fragmentos con la presencia de una infección bacteriana, en el que una disminución de dicho nivel de por lo menos 20% por 24h resulta indicativo de la presencia de una infección bacteriana en el paciente y en el que el nivel umbral de la procalcitonina o de sus fragmentos de por lo menos 12 aminoácidos de longitud, en las muestras sanguínea, sérica y plasmática de dicho paciente es inferior a 0, 25 ng/ml.

En la reivindicación dependiente 2 es definida una forma de realización preferida.

La presente invención se basa en el sorprendente hallazgo de que en las muestras de los pacientes con una enfermedad primaria no infecciosa, se detectaron frecuentemente, niveles (concentraciones) ligeramente elevados de procalcitonina y que presentan significado diagnóstico. Sorprendentemente, se ha identificado un gran número de muestras con niveles séricos superiores a 0, 03 ng/ml, (26, 0 %) y 0, 05 ng/ml (14, 7 %, respectivamente) , de un total de 4997 muestras de pacientes con una enfermedad primaria no infecciosa. Los niveles de PCT ligeramente elevados se relacionan con los niveles de PCT en el intervalo de 0, 02 a 0, 25 ng/ml aproximadamente, preferentemente de entre 0, 02 y 0, 1 ng/ml. La presencia de niveles ligeramente elevados de PCT puede ser indicadora del riesgo de que un paciente aquejado de una enfermedad primaria no infecciosa adquiera una enfermedad o una afección que todavía no se hayan manifestado y/o no presente todavía síntomas. Dicha enfermedad o afección puede estar relacionada con una infección, o ésta puede facilitar, acelerar y/o potenciar el riesgo de contraer o adquirir dicha enfermedad o afección. Esto también permite adaptar un tratamiento para estos pacientes, por ejemplo, mediante una terapia adicional de antibióticos que el paciente no hubiera recibido necesariamente si el nivel elevado de PCT no se hubiera detectado. Debe mencionarse que, hasta ahora, los pacientes con enfermedades primarias no infecciosas no son controlados rutinariamente con respecto a sus niveles de PCT durante el diagnóstico Descripción breve de las figuras La Figura 1 representa un histograma piloto de la frecuencia de los intervalos de los niveles de procalcitonina en muestras de los pacientes.... [Seguir leyendo]

1. Método in vitro para el diagnóstico de la presencia de una infección bacteriana en un paciente, comprendiendo dicho método: determinar el nivel de la procalcitonina o sus fragmentos de por lo menos 12 aminoácidos de longitud, en una muestra obtenida a partir de dicho paciente en el que dicha muestra es seleccionada de entre el grupo que comprende una muestra sanguínea, una muestra sérica, una muestra plasmática o un extracto de cualquiera de dichas muestras mencionadas anteriormente (i) por lo menos una vez antes del inicio de un tratamiento con antibiótico o en las seis horas tras el inicio del 10 tratamiento, y (ii) por lo menos una vez después de 12 horas a 1 semana tras el inicio de un tratamiento con antibiótico del paciente;

y correlacionar dicho nivel de procalcitonina o de sus fragmentos con la presencia de una infección bacteriana, en el que una disminución de dicho nivel de por lo menos 20% por 24h resulta indicativo de la presencia de una infección 15 bacteriana en el paciente y en el que el nivel umbral de la procalcitonina o de sus fragmentos de por lo menos 12 aminoácidos de longitud, en las muestras sanguínea, sérica y plasmática de dicho paciente es inferior a 0, 25 ng/ml.

2. Método in vitro según la reivindicación 1, en el que el paciente presenta una enfermedad primaria que no es una infección. 20