MEDIO DE CULTIVO DE HONGOS OBTENIDO A PARTIR DE ALPEORUJO SECO Y EXTRACTADO.

Medio de cultivo de hongos obtenido a partir de alpeorujo seco y extractado.

La presente invención se refiere a un procedimiento de obtención de un extracto líquido de alpeorujo seco y extractado, al extracto obtenible mediante dicho procedimiento y al uso del mismo para el cultivo de microorganismos, preferiblemente hongos. El empleo del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado de la invención como medio de cultivo de hongos es económico y permite la obtención de una abundante masa fúngica, superior a la obtenible mediante otros medios convencionalmente empleados para el cultivo de estos microorganismos.

Medio de cultivo de hongos obtenido a partir de alpeorujo seco y extractado.

La presente invención se encuadra en el campo de la microbiología y específicamente se refiere a un procedimiento de obtención de un extracto líquido de alpeorujo seco y extractado, al extracto obtenible mediante dicho método y al uso del mismo para el cultivo de microorganismos, preferiblemente de hongos. El empleo del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado de la invención como medio de cultivo de hongos es económico y permite la obtención de una abundante masa fúngica.

Estado de la técnica anterior

El cultivo del olivar y la extracción del aceite de oliva tienen una extraordinaria importancia económica y social. Los sistemas de extracción del aceite de oliva se han ido modificando en las últimas décadas cambiando con ello la producción, la composición y el aprovechamiento de los subproductos generados. Así, a inicios de los 90 se introdujo un sistema de extracción continuo de dos fases de aceite de oliva que consiguió una reducción en el consumo de agua y de energía, principal inconveniente del sistema de tres fases, y la consecuente eliminación de la producción de alpechines, pero trajo consigo el problema de que tras la centrifugación de la pasta de aceituna se produce, además de aceite, un nuevo subproducto consistente en un residuo sólido, de elevada humedad y rico en grasas y azúcares, denominado alpeorujo.

Los alpeorujos húmedos, tras un procesado posterior, se destinan a la obtención del aceite de orujo por medio de extracción con n-hexano, generando un residuo final denominado “alpeorujo seco y extractado” que, en su mayor parte, se emplea como combustible o se incinera para obtener energía mediante la cogeneración de energía eléctrica y térmica en las propias almazaras, dado su elevado poder calorífico (Caputo A. C., et al., 2003, Applied Thermal Engineering, 23:197-214) . Sin embargo, debido a la gran cantidad de residuo que se genera en cada una de las campañas oleícolas, es necesaria la búsqueda de vías alternativas para el tratamiento de estos subproductos. Por ello, se están intentando utilizar también como pienso para rumiantes, producción de compost (ES2103206 B1) y para la obtención de productos de interés para la industria farmacéutica, cosmética y alimentaria.

El alpeorujo seco y extractado está compuesto por los restos de pulpa y piel de las aceitunas y es un residuo muy rico en compuestos fenólicos como son el hidroxitirosol, salidrósido, glucósido de luteolina, rutina, tirasol y oleuropeína, por lo que cuando es usado como fertilizante no puede aplicarse directamente al suelo debido a los efectos fitotóxicos de estos fenoles que además repercuten perjudicialmente en la población microbiana. Por ello, se ha propuesto la biotransformación este subproducto para que pueda ser empleado como fertilizante orgánico. En este sentido, el alpeorujo seco y extractado se ha sometido a procesos de fraccionamiento y se han obtenido así extractos del mismo en los que se han cultivado hongos saprobios capaces de llevar a cabo una detoxificación, de manera que así disminuye la fitotoxicidad de este residuo y puede ser finalmente empleado como fertilizante. En este caso los hongos crecen utilizando un extracto acuoso de alpeorujo seco y extractado como fuente de nutrientes, sin embargo, este extracto ha de encontrarse diluido un 50% para evitar que las condiciones de toxicidad del mismo sean limitantes para el crecimiento microbiano (Aranda Ballesteros, E., 2006) .

El hidroxitirosol, el tirasol y la oleuropeína son potentes antioxidantes que se pueden extraer del alpeorujo seco y extractado por medio de tratamiento térmico al vapor. Este residuo se puede utilizar también para la producción de pectina, compuesto de gran interés en la industria alimentaria ya que es usada como agente gelificante, estabilizante y emulsionante (Cardoso S. M., et al., 2003, Carbohydrate Polymers, 52:125-133) . Además también se ha estudiado la mezcla del alpeorujo seco y extractado con polímeros termoplásticos para la fabricación de contenedores (Siracusa G., et al., 2001, Journal of Polymers and the Environment, 9:157-161) .

Por otro lado, las almazaras están empezando a separar los huesos presentes en el alpeorujo seco y extractado debido al aumento de su valor en el mercado, no sólo como combustible sino también por su uso como abrasivo, como materia prima para la obtención de carbón activo e incluso como inductor del compostaje de otros materiales orgánicos.

Por otra parte, desde antiguo y en la actualidad se emplean microorganismos para producir industrialmente productos con fines comerciales, como antibióticos, antioxidantes, fitohormonas, vitaminas, grasas insaturadas, proteínas, aminoácidos, fertilizantes, productos fitosanitarios, etc. Sin embargo, es necesario disponer de nutrientes minerales y carbohidratos como materia prima carbonada en el caldo de cultivo de estos microorganismos. Pero los carbohidratos son relativamente caros y, en muchos casos, de más alto precio que los productos generados mediante el proceso de fermentación. En el caso de los hongos, existen para su crecimiento diversos medios de cultivo, siendo los comúnmente empleados, por ejemplo, el extracto de malta, caldo patata-dextrosa (PDB) o Czapeck.

En resumen, existe por una lado la necesidad de encontrar nuevas aplicaciones industriales para la gran cantidad de alpeorujo seco y extractado que se obtiene como residuo en la industria oleícola, y por otro, la necesidad disponer de medios de cultivo mejorados que aporten nutrientes minerales y carbohidratos como materia prima carbonada para el crecimiento in vitro de microorganismos, que sean más económicos y que permitan obtener una mayor masa fúngica que los existentes actualmente.

Descripción de la invención

La presente invención proporciona un procedimiento de obtención de un extracto líquido de alpeorujo seco y extractado así como el extracto obtenible mediante dicho método, y propone el uso del mismo para el cultivo de microorganismos, preferiblemente de hongos. El empleo del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado de la invención como medio de cultivo de hongos es económico y permite la obtención de una abundante masa fúngica.

Mediante extracciones acuosas del alpeorujo seco y extractado y posterior concentración del producto obtenido, en la presente invención se obtiene un extracto líquido óptimo para el cultivo de microorganismos de interés industrial, preferiblemente de hongos, más preferiblemente de hongos saprobios productores de metabolitos primarios y/o secundarios susceptibles de aplicación comercial. Así, se propone el extracto líquido de alpeorujo seco y extractado de la invención como una fuente de nutrientes barata para el cultivo de microorganismos, ya que permite obtener una masa microbiana abundante aplicable tanto a nivel agrícola como industrial.

El procedimiento de la invención conduce a la obtención de un extracto líquido de alpeorujo seco y extracto cuyas características físico-químicas difieren de las de otros extractos líquidos de alpeorujo seco y extractados obtenibles mediante otros métodos conocidos en el estado de la técnica, por ejemplo, en el grado de concentración de sus componentes. Por tanto, como muestran los ejemplos de la presente invención, cuando se utiliza como medio de cultivo el extracto líquido de alpeorujo seco y extractado de la invención la masa microbiana obtenible es superior (más del triple) a la que se obtiene cuando se emplea como medio de cultivo cualquier otro extracto líquido de alpeorujo sin concentrar obtenible mediante otros procedimientos, lo que demuestra que, al contrario de lo que se suponía hasta la fecha en relación a los efectos tóxicos de los fenoles presentes en este residuo sobre el crecimiento microbiano, los microorganismos son capaces de proliferar óptimamente en un extracto líquido de alpeorujo seco y extractado cuyos elementos constitutivos se encuentran doblemente concentrados.

Además, en la presente invención se muestran, a modo de ejemplo, pruebas comparativas de crecimiento de diversos hongos cultivados en el extracto líquido de alpeorujo seco y extractado de la invención y en medios convencionalmente empleados para el cultivo de hongos, como el extracto de malta, caldo patata-dextrosa (PDB) y Czapeck. Los resultados permiten apreciar un incremento del 200-300% en la masa fúngica cuando el cultivo se realiza en el extracto líquido de alpeorujo seco y extractado de la invención respecto... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de obtención de un extracto líquido de alpeorujo seco y extractado que comprende:

4. 60% el filtrado obtenido en el paso (d) .

2. Procedimiento según la reivindicación 1 donde la extracción sólido-líquido del paso (a) se realiza mediante un extractor rotativo orbital.

3. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones1ó2 donde en la extracción sólido-líquido del paso (a) la proporción de alpeorujo seco y extractado y de disolución acuosa es 1:2 peso:volumen.

4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones1a3 donde la disolución acuosa del paso (a) es agua.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones1a4 donde la extracción sólido-líquido del paso (a) se realiza durante entre6y10horas.

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde la filtración del paso (b) se realiza a través de una gasa.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde la centrifugación del paso (c) se realiza a entre 8.000 y 12.000 xg.

8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones1a7 donde la centrifugación del paso (c) se realiza durante entre8y12 minutos.

9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 donde la filtración del paso (d) se realiza a través de un papel de filtro.

10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones1a9 donde la concentración del paso (e) se realiza mediante un rotavapor.

11. Extracto líquido de alpeorujo seco y extractado obtenible mediante el procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones1a10.

12. Uso del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado según la reivindicación 11 para el cultivo de microorganismos.

13. Uso del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado según la reivindicación 12 donde el microorganismo es un hongo.

14. Uso del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado según la reivindicación 13 donde el hongo pertenece a un género seleccionado de la lista que comprende: Fusarium, Penicillium, Aspergillus, Talaromyces, Chaetomium, Wardomyces, Gliocladium, Paecilomyces, Trichoderma, Pleurotus, Cladosporium, Mucor, Phanerochaete, Coriolopsis, Trametes, Pycnoporus, Phlebia, Fomes, Panus o Mortierella.

15. Uso del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado según la reivindicación 14 donde el hongo pertenece al género Trichoderma.

16. Uso del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado según la reivindicación 15 donde el hongo pertenece a la especie Trichoderma harzianum.

17. Uso del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado según la reivindicación 15 donde el hongo pertenece a la especie Trichoderma koningii.

18. Uso del extracto líquido de alpeorujo seco y extractado según la reivindicación 15 donde el hongo pertenece a la especie Trichoderma viride.