LÁMINA SEMEJANTE A LA ECTOCÓRNEA Y MÉTODO PARA CONSTRUIR LA MISMA.

Una lámina semejante al epitelio corneal, que comprende una capa de células en la que se forma una estructura en capas de células obtenidas de las células epiteliales mucosales orales.

Lámina semejante a la ectocórnea y método para construir la misma Campo Técnico La presente invención se refiere a una lámina semejante al epitelio corneal (ectocórnea), a una lámina de trasplante del epitelio corneal (ectocórnea) y a un método para construir la misma. La presente invención puede usarse para tratar enfermedades (enfermedades de la superficie ocular) que necesitan el trasplante del epitelio corneal. Particularmente, la presente invención proporciona un medio eficaz para tratar la enfermedad corneal que ocurre en ojos bilaterales. Técnica anterior En el tratamiento quirúrgico para la enfermedad de la superficie ocular en la que la córnea está cubierta con el epitelio conjuntival para causar opacidad, actualmente, se usa el trasplante del epitelio corneal. Sin embargo, en queratoconjuntivitis refractaria con inflamación grave (síndrome de Setevens-Johonson, penfigoide ocular cicatricial, corrosión corneal, y semejantes), el pronóstico parece extremadamente pobre. Por lo tanto, se piensa que la principal razón es porque el epitelio corneal de un sistema diferente (alo) que tiene una fuerte antigenicidad es reconocido y rechazado inmunológicamente por el sistema inmune de un huésped. Además, la complicación causada por la administración sistémica y local de una gran cantidad de fármaco inmunosupresor para evitar el rechazo después de la operación es uno de los factores principales para un mal pronóstico. Por otra parte, cuando se usa el epitelio corneal de alo, existe un problema que es la escasez de donantes. Por lo tanto, se piensa que el trasplante usando epitelio corneal autólogo es ideal. En el caso de enfermedad ocular unilateral (tal como corrosión corneal), existe una publicación de que el epitelio corneal del ojo normal podría trasplantarse con éxito en el ojo afectado. Sin embargo, la mayor parte de las enfermedades corneales intratables son enfermedades oculares bilaterales, de manera que la técnica mencionada anteriormente no puede usarse en la actualidad. Descripción de la invención Con lo anterior en mente, es un objeto de la presente invención proporcionar una lámina semejante al epitelio corneal, una lámina de trasplante de epitelio cornal, y un método para construir la misma. En particular, es un objeto proporcionar un material de trasplante capaz de ser usado para tratar pacientes que tienen dificultad para obtener células madre corneales autólogas. Los presentes inventores han investigado a la vista de WO/0180760 A1 que describe: una lámina semejante al epitelio corneal, que comprende una capa de células que comprende una estructura en capas de células epiteliales de origen limbal (corneal). Ueda M.; Nagoya. Med. Sci., 58, 13-28, 1995 describe: injertos de piel obtenidos a partir de células epiteliales de origen mucosal que comprenden una capa de células que comprende una estructura en capas. problemas mencionados anteriormente. En primer lugar, como en los pacientes con enfermedad ocular bilateral, no pueden obtenerse células madre corneales autólogas, los presentes inventores han pensado que sería ideal usar un tejido mucosal autólogo de otros sitios normales y seleccionar un epitelio mucosal oral como una fuente de células. Esto es porque se sugiere que el epitelio mucosal oral tiene células madre en el tejido mucosal local y tiene una baja diferenciación y alto potencial de división y es más fácilmente disponible comparado con la epidermis que es otro tejido epitelial. Por otra parte, los presentes inventores han empleado membrana amniótica como un sustrato para cultivar la célula epitelial mucosal oral. En primer lugar, se recogió un epitelio mucosal oral de un conejo y se quitó el tejido subcutáneo del epitelio por un procedimiento enzimático para preparar una suspensión celular que contiene células madre. Después, la suspensión celular se inoculó en la membrana amniótica de la que se raspó el epitelio y se cocultivó con células de apoyo (células alimentadoras), induciendo de esta manera la diferenciación. Como resultado, pudo obtenerse con éxito una capa de células semejante al epitelio corneal (lámina semejante al epitelio corneal) en la que se formó una estructura en capas de las células epiteliales mucosales orales. Cuando se observó la morfología de la capa de células obtenida, 5 a 6 capas de las células estaban en forma de lámina en la membrana amniótica y estaban presentes células con forma plana en la capa más superior. Además, la capa de células tenía una alta transparencia. La estructura de la capa de células obtenida fue extremadamente similar a la del epitelio corneal. Por otra parte, la capa de células semejante al epitelio corneal se trasplantó autólogamente en los ojos de un conejo junto con la membrana amniótica usada como un sustrato y se observó la supervivencia de ésta. Como resultado, se confirmó que el injerto había sobrevivido y se había extendido en la superficie ocular y se mantuvo la transparencia post-operatoria. Esto muestra que el uso del epitelio mucosal oral como una fuente de células y la membrana amniótica como un sustrato permite la construcción de la capa de células semejante al epitelio corneal (lámina semejante al epitelio corneal), en la que se forma una estructura en capas de las células epiteliales mucosales orales. Además, esta capa semejante al epitelio corneal puede sustituirse adecuadamente 2 E02780078 29-11-2011   por el epitelio corneal. La presente invención se completó basada en los descubrimientos e incluye las configuraciones siguientes. [1] Una lámina semejante al epitelio corneal, que incluye una capa de células en la que se forma una estructura en capas de células obtenidas de las células epiteliales mucosales orales. [2] La lámina semejante al epitelio corneal descrita en [1], en la que las células de la capa más exterior no están cornificadas. [3] La lámina semejante al epitelio corneal descrita en [1] o [2], en la que las células de la capa más exterior tienen forma plana. [4] La lámina semejante al epitelio corneal descrita en cualquiera de [1] a [3], en la que la lámina semejante al epitelio corneal tiene una función de barrera. [5] Una lámina de trasplante de epitelio corneal, que comprende una capa de células en la que se forma una estructura en capas de células obtenidas de las células epiteliales mucosales orales en una capa de colágeno. [6] La lámina de trasplante de epitelio corneal descrita en [5], en la que las células de la capa más exterior de la capa de células no están cornificadas. [7] La lámina de trasplante de epitelio corneal descrita en [5] o [6], en la que las células de la capa más exterior de la capa de células tienen forma plana. [8] La lámina de trasplante de epitelio corneal descrita en una cualquiera de [5] a [7], en la que la capa de colágeno se obtiene de membrana amniótica. [9] La lámina de trasplante de epitelio corneal descrita en una cualquiera de [5] a [7], en la que la capa de colágeno consiste en membrana amniótica a la que se ha quitado el epitelio. [10] La lámina de trasplante de epitelio corneal descrita en una cualquiera de [5] a [9], en la que lámina de trasplante de epitelio corneal tiene una función de barrera. [11] Un método para construir una lámina semejante al epitelio corneal, incluyendo el método: a) cultivar células epiteliales mucosales orales en una capa de colágeno; y b) cuando las células epiteliales mucosales orales han proliferado y se ha formado una estructura en capas de las células, poner en contacto la capa más exterior con el aire. [12] El método para construir una lámina semejante al epitelio corneal descrito en [11], en el que la etapa a) se lleva a cabo en coexistencia con células de apoyo. [13] El método para construir una lámina semejante al epitelio corneal descrito en [11], en el que la etapa a) se lleva a cabo en coexistencia con células de apoyo y en un estado en el que existe una membrana de aislamiento, con un tamaño de poro a través del cual las células de apoyo no pueden pasar, entre las células de apoyo y la capa de colágeno. [14] El método para construir una lámina semejante al epitelio corneal descrito en una cualquiera de [11] a [13], en el que la capa de colágeno se obtiene de membrana amniótica. [15] El método para construir una lámina semejante al epitelio corneal descrito en una cualquiera de [11] a [13], en el que la capa de colágeno consiste en membrana amniótica a la que se ha quitado el epitelio. [16] Un método para construir una lámina semejante al epitelio corneal, que incluye las etapas de: inocular células de apoyo en un primer contenedor para formar una capa de células de apoyo; disponer un segundo contenedor, que tiene una cara inferior hecha de una membrana de aislamiento con un tamaño de poro a través del cual las células de apoyo no pueden pasar, en el primer contenedor... [Seguir leyendo]

1. Una lámina semejante al epitelio corneal, que comprende una capa de células en la que se forma una estructura en capas de células obtenidas de las células epiteliales mucosales orales. 2. La lámina semejante al epitelio corneal según la reivindicación 1, en la que las células de la capa más exterior no están cornificadas y/o tienen forma plana. 3. La lámina semejante al epitelio corneal según la reivindicación 1 ó 2, en la que la lámina semejante al epitelio corneal tiene una función de barrera. 4. Una lámina de trasplante de epitelio corneal que comprende una capa de células como se ha definido en la reivindicación 1 ó 2, en la que se forma una estructura en capas de células en una capa de colágeno. 5. La lámina de trasplante de epitelio corneal según la reivindicación 4, en la que dicha lámina tiene una función de barrera. 6. Un método para construir una lámina semejante al epitelio corneal, comprendiendo el método: a) cultivar células epiteliales mucosales orales en una capa de colágeno; y b) cuando las células epiteliales mucosales orales han proliferado y se ha formado forma una estructura en capas de células, poner en contacto la capa más exterior con el aire. 7. El método según la reivindicación 6, en el que la etapa a) se lleva a cabo en coexistencia con células de apoyo. 8. El método según la reivindicación 6 ó 7, en el que la etapa a) se lleva a cabo en coexistencia con células de apoyo y en un estado en el que una membrana de aislamiento con un tamaño de poro a través del cual las células de apoyo no pueden pasar existe entre las células de apoyo y la capa de colágeno. 9. El método de la reivindicación 6, que comprende la etapas de: (i) inocular células de apoyo en un primer contenedor para formar una capa de células de apoyo; (ii) disponer un segundo contenedor, que tiene una cara inferior hecha de una membrana de aislamiento con un tamaño de poro a través del cual las células de apoyo no pueden pasar, en el primer contenedor de manera que la cara inferior está localizada en un medio de cultivo; (iii) formar una capa de colágeno en la cara inferior del segundo contenedor; (iv) inocular células epiteliales mucosales orales en la capa de colágeno; (v) cultivar las células epiteliales mucosales orales para formar una estructura en capas de las células; y (vi) poner en contacto la capa más exterior de la estructura en capas de las células epiteliales mucosales orales con el aire. 10. La lámina de trasplante de epitelio corneal de la reivindicación 4 ó 5 o el método según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en el que la capa de colágeno se obtiene de membrana amniótica, y/o consiste en membrana amniótica a la que se ha quitado el epitelio. E02780078 29-11-2011   16 E02780078 29-11-2011   17 E02780078 29-11-2011   18 E02780078 29-11-2011   19 E02780078 29-11-2011   E02780078 29-11-2011   21 E02780078 29-11-2011   22 E02780078 29-11-2011   23 E02780078 29-11-2011   24 E02780078 29-11-2011   E02780078 29-11-2011   26 E02780078 29-11-2011   27 E02780078 29-11-2011   28 E02780078 29-11-2011   29 E02780078 29-11-2011   E02780078 29-11-2011