Procedimiento para la fabricación de 7-dehidrocolesterol en organismos transgénicos.

Procedimiento para la fabricación de 7-dehidrocolesterol mediante el cultivo de organismos que,

frente al tiposilvestre, presentan una actividad aumentada de la Δ24-reductasa y de la actividad de la HMG-CoA-reductasa, así como que presentan una actividad aumentada de la Δ8-Δ7-isomerasa y de la Δ5-desaturasa, ouna actividad aumentada de la escualeno epoxidasa.

Procedimiento para la fabricación de 7-dehidrocolesterol en organismos transgénicos La presente invención se refiere a un procedimiento para la fabricación de 7-dehidrocolesterol mediante el cultivo de organismos, en particular, levaduras. Asimismo, la invención se refiere a los constructos de ácidos nucleicos que se necesitan para la fabricación de organismos genéticamente modificados, así como a los organismos genéticamente modificados, en particular, las levaduras mismas.

El 7-dehidrocolesterol, también denominado colesta-5, 7-dienol o provitamina D3, así como sus productos intermedios biosintéticos del metabolismo de los esteroles, como el zimosterol, el farnesol, el geraniol, el escualeno, el lanosterol, el colesta 5, 7, 24-trienol y el colesta 5, 7, 22, 24-tetraenol, y sus productos secuenciales biosintéticos del metabolismo de los esteroles, como la vitamina D3 y el colesterol, son compuestos con un alto valor económico.

La importancia económica del 7-dehidrocolesterol estriba sobre todo en la obtención de vitamina D3 a partir de 7dehidrocolesterol a través de radiación UV.

Así pues, disponer de un procedimiento rentable para la fabricación de 7-dehidrocolesterol tiene una enorme importancia.

Son procedimientos especialmente rentables los procedimientos biotecnológicos que aprovechan los organismos optimizados mediante una modificación genética que fabrican 7-dehidrocolesterol.

Mientras que el metabolismo de los esteroles en bacterias, hongos, levaduras y algunos insectos conduce esencialmente de zimosterol a ergosterol (provitamina D2) a través de fecosterol, episterol, ergosta-5, 7-dienol y ergosta-5, 7, 22, 24-tetraen-3β-ol, el metabolismo de los esteroles en mamíferos conduce esencialmente de zimosterol a 7-dehidrocolesterol (provitamina D3) a través de colesta-7, 24-dienol y latosterol.

El 7-dehidrocolesterol (provitamina D3) se transforma en colesterol a través de la 7-dehidrocolesterol reductasa y el colesterol, en hormonas esteroideas, corticoides y ácidos biliares como la progesterona, la testosterona, el estradiol, la aldosterona, la cortisona y el colato.

Algunos genes del metabolismo del 7-dehidrocolesterol en mamíferos son conocidos y están clonados, como por ejemplo ácidos nucleicos que codifican una Δ8-Δ7-isomerasa humana (también llamada proteína de fijación al emopamilo o EBP) , ACCESSION NM_006579 y una Δ8-Δ7-isomerasa murina (Braverman, N. et a1., (1999) : Mutations in the gene encoding 3beta-hydroxysteroid-delta8, delta7-isomerase cause X-linked dominant Conradi-Hunermann syndrome. Nat.Genet. 22 (3) , 291-294) ,

ácidos nucleicos que codifican una Δ5-desaturasa humana (también llamada esterol-C5-desaturasa) , ACCESSION AB016247 y una Δ5-desaturasa murina (Nishi, S. et al., (2000) : cDNA cloning of the mammalian sterol C5desaturase and the expression in yeast mutant. Bio-chim. Biophys. Acta 1490 (1-2) , 106-108) ,

ácidos nucleicos que codifican una Δ24-reductasa humana (también llamada 24-dehydrocolesterol reductasa o DHCR24) , ACCESSION NM_014762 y una Δ24-reductasa murina (Waterham, H.R. et al. (2001) : Mutations in the 3beta-hydroxysterol De1ta24-reductase gene cause desmosterolosis, an autosomal recessive disorder of cholesterol biosynthesis. Am.J.Hum.Genet.69 (4) , 685-694) y

ácidos nucleicos que codifican una esterol-aciltransferasa humana (Chang, C. C. et al., Molecular cloning and functional expression of human acyl-coenzyme A: cholesterol acyltransferase cDNA in mutant Chinese hamster ovar y cells, J. Biol. Chem. 1993, Oct 5;268 (28) : 20747-55) y una esterol-aciltransferasa murina (Uelman, P.J.: Tissue-specific expression and cholesterol regulation of acylcoenzyme A: cholesterol acyltransferase (ACAT) in mice. Molecular cloning of mouse ACAT cDNA, chromosomal localization, and regulation of ACAT in vivo and in vitro, J. Biol. Chem. 1995 Nov 3;270 (44) :26192-201) .

Los genes del metabolismo del ergosterol son ampliamente conocidos y están clonados, como por ejemplo 2

ácidos nucleicos que codifican una Δ8-Δ7-isomerasa (ERG2) (Ashman, W.H. et al. (1991) : Cloning and disruption of the yeast C-8 sterol isomerase gene. Lipids. Aug; 26 (8) : 628-32.) ,

ácidos nucleicos que codifican una Δ5-desaturasa (ERG3) (Arthington, B.A. et a1. (1991) : Cloning, disruption and sequence of the gene encoding yeast C-5 sterol desaturase. Gene. Jun 15; 102 (1) : 39-44.) ,

ácidos nucleicos que codifican una Δ24-reductasa (ERG 4) (Lai. M.H. et a1., (1994) ; The identification of a gene family in the Saccharomyces cerevisiae ergosterol biosynthesis pathway. Gene.Mar11;140 (1) :41-9.) ,

ácidos nucleicos que codifican una HMG-CoA-reductasa (HMG) (Bason M.E. et al, (1988) Structural and functional conservation between yeast and human 3-hydroxy-3-methylglutar y l coenzyme A reductases, the rate-limting enzyme of sterol biosynthesis. Mol Cell Biol 8: 3797-3808) ,

ácidos nucleicos que codifican una HMG-CoA-reductasa truncada (t-HMG) (Polakowski T, Stahl U, Lang C. (1998) Overexpression of a cytosolic hydroxymethylglutar y l-CoA reductase leads to squalene accumulation in yeast. Appl. Microbiol Biotechnol. Jan; 49 (1) : 66-71) ,

ácidos nucleicos que codifican una lanosterol-C14-demetilasa (ERG11) (Kalb VF, Loper JC, Dey CR, Woods CW, Sutter TR (1986) Isolation of a cytochrome P-450 structural gene from Saccharomyces cerevisiae. Gene 45 (3) :23745) ,

ácidos nucleicos que codifican una escualeno sintetasa (ERG9) (Jennings, S.M., (1991) : Molecular cloning and characterization of the yeast gene for squalene synthetase. Proc Natl Acad Sci USA. Jul15; 88 (14) : 6038-42) ,

ácidos nucleicos que codifican una esterol-aciltransferasa (SATl) y (SAT2) (Yang, H. :Sterol esterification. in yeast: a two-gene process. Science. 1996 May 31; 272 (5266) :1353-6) , así como otra esterol aciltransferasa (J. Biol. Chem. 1996, Sep 27;271 (39) :24157-63) ,

ácidos nucleicos que codifican una escualeno epoxidasa (ERG1) (Jandrositz, A., et al (1991) The gene encoding squalene epoxidase from Saccharomyces cerevisiae: cloning and characterization. Gene 107: 155-160) ,

ácidos nucleicos que codifican una C24-metiltransferasa (ERG6) (Hardwick, K.G. et al., : SED6 is identical to ERG6, and encodes a putative methyltransferase required for ergosterol synthesis. Yeast. Feb; 10 (2) : 265-9) y

ácidos nucleicos que codifican una Δ22-desaturasa (ERG5) (Skaggs, B.A. et al, : Cloning and characterization of the Saccharomyces cerevisiae C-22 sterol desaturase gene, encoding a second cytochrome P-450 involved in ergosterol biosynthesis, Gene.1996 Feb22;169 (1) :105-9.) .

Por otro lado, se conocen procedimientos que tienen por objeto un aumento del contenido en productos intermedios específicos y productos finales del metabolismo de los esteroles en levaduras y hongos.

De la patente EP 486 290 se conoce que el contenido en escualeno y otros esteroles específicos, como es el zimosterol, puede aumentarse en las levaduras aumentando la tasa de expresión de la HMG-CoA-reductasa y, al mismo tiempo, interrumpiendo la ruta metabólica de la zimosterol-C24-metiltransferasa (ERG6) y de la ergosta5, 7, 24 (28) -trienol-22-dehidrogenasa (ERG5) .

Por T. Polakowski, Molekularbiologische Beeinflussung des Ergosterolstoffwechsels der Hefe Saccharomyces cerevisiae, Shaker Verlag Aachen, 1999, página 59 a 66, se conoce que el aumento de la tasa de expresión de la HMG-CoA-reductasa sola, sin interrupción de la ruta metabólica ulterior como se indica en el documento EP 486 290, conduce solo a un aumento del contenido en esteroles tempranos, así como en escualeno, mientras que el contenido en esteroles posteriores, como el ergosterol, no se modifica de forma significativa, o incluso presenta tendencia a reducirse en el caso del ergosterol.

El documento WO 99/16886 describe un procedimiento para la fabricación de ergosterol en levaduras que sobreexpresan una combinación de los genes tHMG, ERG9, SAT1 y ERG1.

Tainaka et al., J, Ferment. Bioeng. 1995, 79, 64-66, describen también que la sobreexpresión de ERG11 (lanosterolC14-demetilasa) conduce a un enriquecimiento de 4, 4-dimetilzimosterol, pero no de ergosterol. El transformante mostró, frente al tipo silvestre, un contenido en zimosterol aumentado en el factor de 1, 1 a 1, 47 en función de las condiciones de fermentación.

Avruch et al., Can. J. Biochem 1976, 54 (7) , 657-665, así como Xu et al, Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988, 155 (1) , 509-517, describen que con una inhibición específica de la C24-metiltransferasa y también con una mutación en el locus erg6 en S. cerevisiae se detectan, además de zimosterol, también... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la fabricación de 7-dehidrocolesterol mediante el cultivo de organismos que, frente al tipo silvestre, presentan una actividad aumentada de la Δ24-reductasa y de la actividad de la HMG-CoAreductasa, así como que presentan una actividad aumentada de la Δ8-Δ7-isomerasa y de la Δ5-desaturasa, o una actividad aumentada de la escualeno epoxidasa.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque, para el aumento de la actividad de la Δ8-Δ7isomerasa, se aumenta respecto al tipo silvestre la expresión génica de un ácido nucleico que codifica una Δ8-Δ7-isomerasa.

3. Procedimiento según la reivindicación 2, caracterizado porque, para el aumento de la expresión génica, se incorporan en el organismo uno o varios ácidos nucleicos que codifican una Δ8-Δ7-isomerasa.

4. Procedimiento según la reivindicación 3, caracterizado porque se incorporan ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácidos SEQ. ID. nº 2 o una secuencia derivada de esta secuencia por sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presentan una identidad de al menos el 30% en el nivel de aminoácidos con la secuencia SEQ. ID. nº 2, y que presentan la propiedad enzimática de una Δ8-Δ7-isomerasa.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado porque se incorpora un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ. ID. nº 1.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque, para el aumento de la actividad de la Δ5-desaturasa, se aumenta respecto al tipo silvestre la expresión génica de un ácido nucleico que codifica una Δ5-desaturasa.

7. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque, para el aumento de la expresión génica, se incorporan en el organismo uno o varios ácidos nucleicos que codifican una Δ5-desaturasa.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, caracterizado porque se incorporan ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácidos SEQ. ID. nº 4 o una secuencia derivada de esta secuencia por sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presentan una identidad de al menos el 30% en el nivel de aminoácidos con la secuencia SEQ. ID. nº 4, y que presentan la propiedad enzimática de una Δ5-desaturasa.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, caracterizado porque se incorpora un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ. ID. nº 3.

10. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque, para el aumento de la actividad de la Δ24-reductasa, se aumenta respecto al tipo silvestre la expresión génica de un ácido nucleico que codifica una Δ24-reductasa.

11. Procedimiento según la reivindicación 10, caracterizado porque, para el aumento de la expresión génica, se incorporan en el organismo uno o varios ácidos nucleicos que codifican una Δ24-reductasa.

12. Procedimiento según la reivindicación 11, caracterizado porque se incorporan ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácidos SEQ. ID. nº 6 o una secuencia derivada de esta secuencia por sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presentan una identidad de al menos el 30% en el nivel de aminoácidos con la secuencia SEQ. ID. nº 6, y que presentan la propiedad enzimática de una Δ24-reductasa.

13. Procedimiento según la reivindicación 12, caracterizado porque se incorpora un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ. ID. nº 5.

14. Procedimiento según una de las reividicaciones 1 a 13, caracterizado porque los organismos presentan frente al tipo silvestre también una actividad reducida de al menos una de las actividades seleccionada del grupo de la actividad de la C24-metiltransferasa y la actividad de la Δ22-desaturasa.

15. Procedimiento según la reivindicación 14, caracterizado porque los organismos presentan respecto al tipo silvestre una actividad reducida de la C24-metiltransferasa y una actividad reducida de la Δ22-desaturasa.

16. Procedimiento según una de las reivindicaciones 14 o 15, caracterizado porque, para la reducción de la actividad de la C24-metiltransferasa, se reduce respecto al tipo silvestre la expresión génica de un ácido nucleico que codifica una C24-metiltransferasa.

17. Procedimiento según la reivindicación 16, caracterizado porque se utiliza un organismo que no presenta ningún gen funcional de C24-metiltransferasa.

18. Procedimiento según una de las reivindicaciones 14 a 17, caracterizado porque, para la reducción de la actividad de la Δ22-desaturasa, se reduce respecto al tipo silvestre la expresión génica de un ácido nucleico que codifica una Δ22-desaturasa.

19. Procedimiento según la reivindicación 18, caracterizado porque se utiliza un organismo que no presenta ningún gen funcional de Δ22-desaturasa.

20. Procedimiento según una de las reividicaciones 1 a 19, caracterizado porque los organismos presentan frente al tipo silvestre también una actividad aumentada de al menos una de las actividades seleccionada del grupo de la actividad de la lanosterol-C14-demetilasa, la actividad de la escualeno sintetasa y la actividad de la esterol-aciltransferasa.

21. Procedimiento según la reivindicación 20, caracterizado porque los organismos presentan también respecto al tipo silvestre una actividad aumentada de la lanosterol-C14-demetilasa.

22. Procedimiento según una de las reivindicaciones 20 o 21, caracterizado porque, para el aumento de la actividad de la lanosterol-C14-demetilasa, se aumenta respecto al tipo silvestre la expresión génica de un ácido nucleico que codifica una lanosterol-C14-demetilasa.

23. Procedimiento según la reivindicación 22, caracterizado porque, para el aumento de la expresión génica, se incorporan en el organismo uno o varios ácidos nucleicos que codifican una lanosterol-C14-demetilasa.

24. Procedimiento según la reivindicación 23, caracterizado porque se incorporan ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácidos SEQ. ID. nº 8 o una secuencia derivada de esta secuencia por sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presentan una identidad de al menos el 30% en el nivel de aminoácidos con la secuencia SEQ. ID. nº 8, y que presentan la propiedad enzimática de una lanosterol-C14-demetilasa.

25. Procedimiento según la reivindicación 24, caracterizado porque se incorpora un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ. ID. nº 7.

26. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 25, caracterizado porque, para el aumento de la actividad de la HMG-CoA-reductasa, se aumenta respecto al tipo silvestre la expresión génica de un ácido nucleico que codifica una HMG-CoA-reductasa.

27. Procedimiento según la reivindicación 26, caracterizado porque, para el aumento de la expresión génica, se incorpora en el organismo un constructo de ácidos nucleicos que contiene un ácido nucleico que codifica una HMG-CoA-reductasa, cuya expresión en el organismo, comparada con el tipo silvestre, está sujeta a una regulación reducida.

28. Procedimiento según la reivindicación 26, caracterizado porque el constructo de ácidos nucleicos contiene un promotor que, en comparación con el promotor del tipo silvestre, está sujeto en el organismo a una regulación reducida.

29. Procedimiento según una de las reivindicaciones 27 o 28, caracterizado porque como ácido nucleico que codifica una HMG-CoA-reductasa se utiliza un ácido nucleico cuya expresión en el organismo, comparada con el ácido nucleico ortólogo propio del organismo, está sujeta a una regulación reducida.

30. Procedimiento según la reivindicación 29, caracterizado porque como ácido nucleico que codifica una HMGCoA-reductasa se utiliza un ácido nucleico que codifica el área catalítica de la HMG-CoA-reductasa.

31. Procedimiento según la reivindicación 30, caracterizado porque se incorporan ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácidos SEQ. ID. nº 10 o una secuencia derivada de esta secuencia por sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presentan una identidad de al menos el 30% en el nivel de aminoácidos con la secuencia SEQ. ID. nº 10, y que presentan la propiedad enzimática de una HMG-CoA-reductasa.

32. Procedimiento según la reivindicación 31, caracterizado porque se incorpora un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ. ID. nº 9.

33. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 32, caracterizado porque se utiliza un organismo que presenta frente al tipo silvestre también una actividad aumentada de la escualeno epoxidasa.

34. Procedimiento según la reivindicación 33, caracterizado porque, para el aumento de la actividad de la escualeno epoxidasa, se aumenta respecto al tipo silvestre la expresión génica de un ácido nucleico que codifica una escualeno epoxidasa.

35. Procedimiento según la reivindicación 34, caracterizado porque, para el aumento de la expresión génica, se incorporan en el organismo uno o varios ácidos nucleicos que codifican una escualeno epoxidasa.

36. Procedimiento según la reivindicación 35, caracterizado porque se incorporan ácidos nucleicos que codifican proteínas que contienen la secuencia de aminoácidos SEQ. ID. nº 12 o una secuencia derivada de esta secuencia por sustitución, inserción o deleción de aminoácidos, que presentan una identidad de al menos el 30% en el nivel de aminoácidos con la secuencia SEQ. ID. nº 12, y que presentan la propiedad enzimática de una escualeno epoxidasa.

37. Procedimiento según la reivindicación 36, caracterizado porque se incorpora un ácido nucleico que contiene la secuencia SEQ. ID. nº 11.

38. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 38, caracterizado porque como organismo se utiliza levadura.

39. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 38, caracterizado porque después del cultivo se recolecta el organismo y, a continuación, se aísla 7-dehidrocolesterol del organismo.

40. Constructo de ácidos nucleicos, que contiene a) al menos un ácido nucleico que codifica una Δ24-reductasa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos, b) al menos un ácido nucleico que codifica una HMG-CoA-reductasa, y bien c1) al menos un ácido nucleico que codifica una Δ8-Δ7-isomerasa y un ácido nucleico que codifica una Δ5desaturasa, o c2) un ácido nucleico que codifica una escualeno epoxidasa, en donde los componentes b) , así como c1) o c2) están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos.

41. Constructo de ácidos nucleicos según la reivindicación 40, que contiene al menos un ácido nucleico seleccionado del grupo de ácidos nucleicos que codifican una lanosterol-C14-demetilasa, ácidos nucleicos que codifican una escualeno sintetasa y ácidos nucleicos que codifican una esterol-aciltransferasa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos.

42. Combinación de constructos de ácidos nucleicos, en donde la combinación abarca al menos un constructo de

ácidos nucleicos seleccionado del grupo A a C 117

A constructo de ácidos nucleicos que contiene ácidos nucleicos que codifican una Δ8-Δ7-isomeresa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos,

B constructo de ácidos nucleicos que contiene ácidos nucleicos que codifican una Δ5-desaturasa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos y

C constructo de ácidos nucleicos que contiene ácidos nucleicos que codifican una Δ24-reductasa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos, y al menos un constructo de ácidos nucleicos, seleccionado del grupo D a H

D constructo de ácidos nucleicos que contiene ácidos nucleicos que codifican una HMG-CoA-reductasa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos,

E constructo de ácidos nucleicos, que contiene ácidos nucleicos que contienen una lanosterol-C14demetilasa, que están vinculadas funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos,

F constructo de ácidos nucleicos que contiene ácidos nucleicos que codifican una escualeno epoxidasa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos,

G constructo de ácidos nucleicos que contiene ácidos nucleicos que codifican una escualeno sintetasa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos,

H constructo de ácidos nucleicos que contiene ácidos nucleicos que codifican una esterol-aciltransferasa, que están vinculados funcionalmente con una o varias señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en organismos, en donde los grupos C y D, así como A y B por un lado o F por otro lado están incluidos obligatoriamente.

43. Constructos de ácidos nucleicos o combinación de constructos de ácidos nucleicos según una de las reivindicaciones 40 a 42, caracterizados porque las señales de regulación contienen uno o varios promotores y uno o varios terminadores que garantizan la transcripción y la traducción en organismos.

44. Constructos de ácidos nucleicos o combinación de constructos de ácidos nucleicos según la reivindicación 43, caracterizados porque se utilizan las señales de regulación que garantizan la transcripción y la traducción en levaduras.

45. Organismo genéticamente modificado, en donde la modificación genética aumenta al menos la actividad de la Δ24-reductasa y la actividad de la HMG-CoA-reductasa frente a un tipo silvestre, en donde el aumento de la actividad de la Δ24-reductasa se produce frente al tipo silvestre mediante el aumento de la expresión génica de al menos un ácido nucleico que codifica una Δ24-reductasa, en donde la modificación genética aumenta también la actividad de la escualeno epoxidasa o en donde el organismo contiene dos o más ácidos nucleicos que codifican una Δ8-Δ7-isomerasa y/o dos o más ácidos nucleicos que codifican una Δ5-desaturasa.

46. Organismo genéticamente modificado según la reivindicación 45, caracterizado porque el organismo contiene dos o más ácidos nucleicos que codifican una Δ24-reductasa.

47. Organismo genéticamente modificado según una de las reivindicaciones 45 a 46, caracterizado porque la modificación genética reduce también respecto a un tipo silvestre al menos una de las actividades seleccionada del grupo de la actividad de la C24-metiltransferasa y la actividad de la Δ22-desaturasa.

48. Organismo genéticamente modificado según la reivindicación 47, caracterizado porque se produce respecto al tipo silvestre la reducción de al menos una de las actividades mediante la reducción de la expresión génica

de al menos un ácido nucleico, seleccionado del grupo de ácidos nucleicos que codifican una C24metiltransferesa y ácidos nucleicos que codifican una Δ22-desaturasa.

49. Organismo genéticamente modificado según la reivindicación 48, caracterizado porque el organismo no presenta ningún gen funcional de la C24-metiltransferasa y/o gen de la Δ22-desaturasa.

50. Organismo genéticamente modificado según una de las reivindicaciones 45 a 49, caracterizado porque la modificación genética aumenta también respecto a un tipo silvestre al menos una de las actividades seleccionada del grupo de la actividad de la lanosterol-C14-demetilasa, la actividad de la escualeno sintetasa y la actividad de la esterol-aciltransferasa.

51. Organismo genéticamente modificado según la reivindicación 50, caracterizado porque se produce respecto al tipo silvestre el aumento de al menos una de las actividades mediante el aumento de la expresión génica de al menos un ácido nucleico, seleccionado del grupo de ácidos nucleicos que codifican una lanoserol-C14demetilasa, ácidos nucleicos que codifican una escualeno sintetasa y ácidos nucleicos que codifican una esterol-aciltransferasa.

52. Organismo genéticamente modificado según la reivindicación 51, caracterizado porque el organismo contiene dos o más ácidos nucleicos que codifican una HMG-CoA-reductasa y/o dos o más ácidos nucleicos que codifican una lanosterol-C14-demetilasa y/o dos o más ácidos nucleicos que codifican una escualeno epoxidasa y/o dos o más ácidos nucleicos que codifican una escualeno sintetasa y/o dos o más ácidos nucleicos que codifican una esterol-aciltransferasa.

53. Organismo genéticamente modificado según una de las reivindicaciones 45 a 52, caracterizado porque el organismo genéticamente modificado presenta frente al tipo silvestre un contenido aumentado de 7dehidrocolesterol.

54. Organismo genéticamente modificado según una de las reivindicaciones 45 a 53, caracterizado porque como organismo se utiliza levadura.

55. Utilización de un organismo genéticamente modificado según una de las reivindicaciones 45 a 54 para la fabricación de 7-dehidrocolesterol.

Figura 1 Figura 2 Figura 3

Figura 4 Figura 5a Figura 5b Figura 5c Figura 5d Figura 6 Figura 7