El uso de un vector adenovírico para la preparación de una vacuna no invasiva para la administración mucosa,

en el que el vector contiene y expresa un ácido nucleico exógeno que codifica un antígeno de la hemaglutinina de lagripe o un epitopo de este y/o un antígeno de la proteína nuclear de la gripe o un epitopo de este, y el vector tienedelecionadas las regiones E1 y E3, y en el que la vacuna no invasiva para la administración mucosa se va aadministrar a la mucosa nasal.

Inmunización genética no invasiva, sus productos de expresión y sus usos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere, en general, a los campos de la inmunología y de la tecnología de vacunas. La presente invención también se refiere a técnicas de administración de genes no invasivas para provocar respuestas inmunológicas mediante la administración a la mucosa nasal, y sus usos.

Antecedentes de la invención

La activación del sistema inmunológico de vertebrados es un mecanismo importante para proteger a los animales frente a patógenos y tumores malignos. El sistema inmunológico consiste en muchos componentes que interaccionan entre sí, e incluye las secciones humoral y celular. La inmunidad humoral implica a anticuerpos que se unen directamente a antígenos. Las moléculas de anticuerpos como efectores de la inmunidad humoral son segregadas por linfocitos B. La inmunidad celular implica a los linfocitos C citotóxicos (CTL) especializados que reconocen y matan a otras células que producen antígenos extraños. Los CTL responden a fragmentos peptídicos degradados que aparecen sobre la superficie de la célula diana unida a moléculas del MHC (“major histocompatibility complex”, complejo de histocompatibilidad mayor) de clase I. Se sabe que las proteínas producidas dentro de la célula son continuamente degradadas para producir péptidos como parte del metabolismo celular. Estos fragmentos se unen a las moléculas del MHC y son transportados hacia la superficie celular. Por tanto, el sistema inmunológico está constantemente controlando la gama de proteínas producidas en todas las células del cuerpo y está listo para eliminar a cualquier célula que produzca antígenos extraños.

La vacunación es el proceso de cebar a un animal para responder a un antígeno. El antígeno puede administrarse como una proteína (la forma clásica) o como un gen que después expresa el antígeno (inmunización genética) . El proceso implica a los linfocitos T y B, a otros tipos de células linfoides, así como a células de presentación de antígenos especializadas (APC) que pueden procesar el antígeno y presentarlo en una forma que puede activar al sistema inmunológico. Los modos de administración actuales de las vacunas genéticas se han centrado en procedimientos invasivos, que incluyen inyecciones con aguja, escarificación, y penetración mediada por pistola de genes. La inoculación de vacunas en un modo invasivo requiere equipo y personal con formación médica especial, y habitualmente se asocia con molestias y peligros potenciales (sangrado, infección) .

La eficacia de una vacuna se mide por el grado de protección frente a una exposición posterior a un patógeno o tumor. Las vacunas eficaces son inmunógenos que pueden inducir una inmunidad protectora de larga duración y alta titulación para la intervención dirigida contra enfermedades después de un número mínimo de inoculaciones. Por ejemplo, la inmunización genética es una estrategia para provocar respuestas inmunológicas contra proteínas específicas mediante la expresión de genes que codifican las proteínas en las propias células de un animal. La sustancial amplificación del antígeno y estimulación inmunológica que resultan de una presentación de antígenos prolongada in vivo puede inducir una sólida inmunidad contra el antígeno. La inmunización genética simplifica el protocolo de vacunación para producir respuestas inmunológicas contra proteínas concretas porque se eliminan las etapas, a menudo difíciles, de la purificación de proteínas y la combinación con adyuvantes, siendo ambas necesarias habitualmente para el desarrollo de vacunas. Puesto que la inmunización genética no requiere el aislamiento de proteínas, es especialmente valiosa para proteínas que pueden perder los epitopos conformacionales cuando se purifican de modo bioquímico. Las vacunas genéticas también pueden administrarse en combinación sin provocar interferencias ni afectar a la eficacia (Tang et al., 1992; Barr y et al., 1995) , lo cual puede simplificar el programa de vacunación frente a múltiples antígenos.

Aunque se han estudiado vacunas basadas en proteínas de aplicación tópica, su utilidad puede ser limitada. Aunque la aplicación tópica de vacunas basadas en proteínas junto con la toxina del cólera también puede inmunizar a animlaes de un modo no invasivo (Glenn et al., 1998) , las vacunas genéticas no invasivas dirigidas a la piel, según se describen en la presente invención, activan el sistema inmunológico a través de un mecanismo diferente al de las vacunas basadas en proteínas. Además, la eficacia de las vacunas genéticas en general es mayor al de las vacunas de proteínas, debido a la síntesis de novo de antígenos similares a las infecciones naturales (McDonnell y Askari, 1996) . Aunque la patente de EEUU nº 3.837.340 se refiere a un método para vacunar animales poniendo en contacto la piel con virus secados, los virus que se emplean en esta no son vectores genéticos capaces de expresar transgenes o moléculas de ácidos nucleicos heterólogos o exógenos. Además, el inmunógeno puede ser una proteína de la envuelta vírica, en lugar de una proteína producida a partir de la expresión de genes víricos dentro de las propias células del animal, por ejemplo, cualquier respuesta inmunológica inducida por la patente de EEUU nº

3.837.340 puede ser parecida a la inducida por la aplicación tópica de vacunas basadas en proteínas que no sean análogas a las de la presente invención, y por tanto la patente de EEUU nº 3.837.340 no es análoga a la presente invención.

La técnica anterior de la vacunación normalmente requiere un equipo, por ejemplo, agujas para jeringas o una pistola de genes, y conocimientos especiales para la administración de las vacunas. Es muy necesario y deseable en la técnica contar con personal sin formación médica y no necesitar equipo para la inoculación de vacunas.

El documento WO 99/08713, publicado el 25 de febrero de 1995, describe un método para inducir una respuesta inmunológica de un modo no invasivo, que comprende la etapa de poner en contacto la piel de un individuo que necesita dicho tratamiento aplicando por vía tópica a dicha piel una concentración inmunológicamente eficaz de un vector genético que codifica un gen de interés.

Shi et al. (en el artículo titulado “DNA-based non-invasive vaccination onto the skin “, Vaccine, vol. 17, nº 17, 23 de marzo de 1999, pp. 2136-2141) indican que una vacunación no invasiva sobre la piel (NIVS) podría mejorar los programas de vacunación porque el procedimiento no requiere personal con formación especializada y puede eliminar muchos de los problemas asociados con las inyecciones con aguja. Además, Shi et al. indican que los resultados obtenidos pueden proporcionar un estudio preliminar de eficacia que indique que la NIVS puede ser un nuevo método para la administración de vacunas basadas en ADN.

Papp et al. (en el artículo titulado “Induction of immunity in the respirator y tract and protection from bovine herpesvirus type I infection by different routes of immunization with recombinant adenovirus”, Immunology, vol. 11, nº 2, 1998, pp. 79-91) describen una investigación de la capacidad de diferentes vías de inmunización con recombinantes adenovíricos competentes en la replicación para inducir respuestas de anticuerpos específicas de antígeno.

Objetos y resumen de la invención

Una vacunación no invasiva sobre la piel (NIVS) puede mejorar los programas de vacunación, porque la piel es un tejido inmunocompetente y este procedimiento no invasivo no requiere un personal con una formación especializada. La administración de genes no invasiva dirigida a la piel puede lograr la expresión de transgenes localizada en la piel y puede provocar respuestas inmunológicas (Tang et al., 1997) , y el mecanismo para estas respuestas es diferente del de la aplicación tópica de vacunas basadas en proteínas junto con la toxina del cólera (Glenn et al., 1998) . Estos resultados indican que la NIVS basada en vectores es un método nuevo y eficaz para la administración de vacunas. El protocolo de inmunización sencillo, eficaz, barato e indoloro descrito en la presente invención debería hacer que la vacunación dependa menos de los recursos médicos y, por tanto, aumentará la tasa de utilización anual de vacunaciones.

La presente invención proporciona el uso de un vector adenovírico según se define en la reivindicación independiente 1. La... [Seguir leyendo]

1. El uso de un vector adenovírico para la preparación de una vacuna no invasiva para la administración mucosa, en el que el vector contiene y expresa un ácido nucleico exógeno que codifica un antígeno de la hemaglutinina de la gripe o un epitopo de este y/o un antígeno de la proteína nuclear de la gripe o un epitopo de este, y el vector tiene delecionadas las regiones E1 y E3, y en el que la vacuna no invasiva para la administración mucosa se va a administrar a la mucosa nasal.

2. El uso según la reivindicación 1, en el que la expresión en un animal de un antígeno de la hemaglutinina de la gripe o un epitopo de este y/o un antígeno de la proteína nuclear de la gripe o un epitopo de este, estimula o modula una respuesta inmunológica contra la gripe.

3. El uso según la reivindicación 2, en el que la respuesta es inducida por el vector que expresa el ácido nucleico en las células de un animal.

4. El uso según la reivindicación 2 o 3, en el que el animal es un vertebrado.

5. El uso según la reivindicación 4, en el que el vertebrado es un ave o un mamífero.

6. El uso según la reivindicación 4, en el que el vertebrado es un ser humano, o un animal de compañía, domesticado, productor de alimento o de pienso, ganado, de caza, de carreras, o deportivo.

7. El uso según la reivindicación 5, en el que el animal es una vaca, un caballo, un perro, un gato, una cabra, una oveja, un cerdo, o un pollo, un pato o un pavo.

8. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el vector adenovírico comprende un adenovirus humano.

9. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el vector adenovírico comprende un adenovirus canino.

10. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el vector adenovírico comprende un vector vírico al que se le han delecionado todos los genes víricos.

11. Un vector adenovírico que contiene y expresa un ácido nucleico exógeno que codifica un antígeno de la hemaglutinina de la gripe o un epitopo de este y/o un antígeno de la proteína nuclear de la gripe o un epitopo de este, y que tiene delecionadas las regiones E1 y E3, para su uso como vacuna no invasiva para la administración mucosa, en el que que la vacuna no invasiva para la administración mucosa se va a administrar a la mucosa nasal.

12. Un vector adenovírico para su uso según la reivindicación 11, en el que el expresión en un animal de un antígeno de la hemaglutinina de la gripe o un epitopo de este y/o un antígeno de la proteína nuclear de la gripe o un epitopo de este, estimula o modula una respuesta inmunológica contra la gripe.

13. Un vector adenovírico para su uso según la reivindicación 12, en el que la respuesta es inducida por el vector que expresa el ácido nucleico en las células del animal.

14. Un vector adenovírico para su uso según la reivindicación 12 o 13, en el que el animal es un vertebrado.

15. Un vector adenovírico para su uso según la reivindicación 14, en el que el vertebrado es un ave o un mamífero.

16. Un vector adenovírico para su uso según la reivindicación 14, en el que el vertebrado es un ser humano, o un animal de compañía, domesticado, productor de alimento o de pienso, ganado, de caza, de carreras, o deportivo.

17. Un vector adenovírico para su uso según la reivindicación 15, en el que el animal es una vaca, un caballo, un perro, un gato, una cabra, una oveja, un cerdo, o un pollo, un pato o un pavo.

18. El vector adenovírico para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, en el que el vector adenovírico comprende un adenovirus humano.

19. El vector adenovírico para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, en el que el vector adenovírico comprende un adenovirus canino.

20. El vector adenovírico para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 19, en el que el vector adenovírico comprende un vector vírico al que se le han delecionado todos los genes víricos.

21. Una vacuna no invasiva para la administración mucosa que comprende un vector adenovírico, en la que el vector contiene y expresa un ácido nucleico exógeno que codifica un antígeno de la hemaglutinina de la gripe o un epitopo de este y/o un antígeno de la proteína nuclear de la gripe o un epitopo de este, y en la que el vector tiene delecionadas las regiones E1 y E3, para su uso para estimular una respuesta inmunológica contra la gripe en un animal, en la que la vacuna no invasiva para la administración mucosa se va a administrar a la mucosa nasal.

22. Una vacuna no invasiva para su uso según la reivindicación 21, en la que el animal es un vertebrado.

23. Una vacuna no invasiva para su uso según la reivindicación 22, en la que el vertebrado es un ave o un mamífero.

24. Una vacuna no invasiva para su uso según la reivindicación 22, en la que el vertebrado es un ser humano, o un 5 animal de compañía, domesticado, productor de alimento o de pienso, ganado, de caza, de carreras, o deportivo.

25. Una vacuna no invasiva para su uso según la reivindicación 23, en la que el animal es una vaca, un caballo, un perro, un gato, una cabra, una oveja, un cerdo, o un pollo, un pato o un pavo.

26. Una vacuna no invasiva para su uso según la reivindicación 21, en la que el vector adenovírico comprende un adenovirus humano.

27. Una vacuna no invasiva para su uso según la reivindicación 21, en la que el vector adenovírico comprende un adenovirus canino.

28. Una vacuna no invasiva para la administración mucosa para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 27, en la que el vector adenovírico comprende un vector vírico al que se le han delecionado todos los genes víricos.

29. Un kit que comprende una vacuna no invasiva para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 28 que comprende, en un primer recipiente, el vector y, en un segundo recipiente, un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable para administrar el vector por vía intranasal, en el que los recipientes están opcionalmente presentes en el mismo envase o están en envases separados; y el kit opcionalmente contiene instrucciones para mezclar el vector y el vehículo o diluyentes y/o la administración.

30. El kit según la reivindicación 29, que comprende además un dispositivo de administración en un tercer recipiente, en el que el tercer recipiente está opcionalmente presente en el mismo envase que uno o ambos del primer y segundo recipiente, o está en un envase separado del primer y segundo recipiente; y en el que el kit contiene opcionalmente instrucciones para instalar el vector o el vector y el vehículo o el diluyente dentro o sobre el dispositivo de administración y/o para la administración o la aplicación del dispositivo de administración.