Fosfolipasas, ácidos nucleicos que las codifican, y métodos para obtenerlas y usarlas.

Ácido nucleico aislado, sintético o recombinante que comprende

(a) una secuencia de ácido nucleico como se expone en SEC ID NO:

1;

(b) una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%,95%, 96%, 97%, 5 98%, 99% o más de identidad de secuencia con SEC ID nº 1, en la que el ácido nucleicocodifica al menos un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa C,

(c) un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como se expone en SEC ID NO: 2, enla que el ácido nucleico codifica un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa C;

(d) la secuencia de ácido nucleico de (a), (b) o (c), pero que no comprende una secuencia de ácido nucleico quecodifica una secuencia señal;

(e) la secuencia de ácido nucleico de cualquiera de (a) a (d), que comprende además una secuencia de ácidonucleico que codifica un péptido o un polipéptido heterólogo; o

(f) una secuencia de ácido nucleico totalmente complementaria a cualquiera de (a) a (e).

Fosfolipasas, ácidos nucleicos que las codifican, y métodos para obtenerlas y usarlas

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta invención se refiere generalmente a enzimas fosfolipasas, a polinucleótidos que codifican las enzimas, a métodos para obtener y usar estos polinucleótidos y polipéptidos. En particular, la invención proporciona nuevos polipéptidos que tienen actividad de fosfolipasa, ácidos nucleicos que los codifican y anticuerpos que se unen a ellos. También se proporcionan métodos industriales y productos que comprenden el uso de estas fosfolipasas.

ANTECEDENTES

Las fosfolipasas son enzimas que hidrolizan los enlaces de éster de los fosfolípidos. Correspondiente a su importancia en el metabolismo de fosfolípidos, estas enzimas están ampliamente extendidas entre procariotas y eucariotas. Las fosfolipasas afectan al metabolismo, construcción y reorganización de las membranas biológicas, y están implicadas en las cascadas de señales. Se conocen varios tipos de fosfolipasas que difieren en su especificidad según la posición del enlace atacada en la molécula fosfolipídica. La fosfolipasa A1 (PLA1) elimina el ácido graso de la posición 1 para producir ácido graso libre y también 1-liso-2-acilfosfolípido. La fosfolipasa A2 (PLA2) elimina el ácido graso de la posición 2 para producir ácido graso libre y 1-acil-2-lisofosfolípido. Las enzimas PLA1 y PLA2 pueden ser intra- o extracelulares, unidas a la membrana o solubles. PLA2 intracelular se encuentra en casi cualquier célula de mamífero. La fosfolipasa C (PLC) elimina el resto de fosfato para producir 1, 2diacilglicerol y una fosfobase. La fosfolipasa D (PLD) produce 1, 2-diacilglicerofosfato y un grupo base. PLC y PLD son importantes en la función celular y en la señalización. PLD ha sido la fosfolipasa dominante en la biocatálisis (véase, por ejemplo, Godfrey, T. y West S. (1996) Industrial enzymology, 299-300, Stockton Press, Nueva York) . Las patatinas son otro tipo de fosfolipasa, que se piensa que trabajan como una PLA (véase, por ejemplo, Hirschberg HJ, et al., (2001) , Eur J Biochem 268 (19) :5037-44) .

Las oleaginosas habituales, tales como habas de soja, colza, semillas de girasol, sésamo y cacahuetes, se usan como fuentes de aceites y materias primas. En el proceso de extracción del aceite, las semillas se tratan mecánica y térmicamente. El aceite se separa y se divide de la harina mediante un disolvente. Usando destilación, el disolvente se separa entonces del aceite y se recupera. El aceite se “desgoma” y se refina. El contenido de disolvente en la harina se puede evaporar mediante tratamiento térmico en una “tostadora desolventizadora”, seguido del secado y enfriamiento de la harina. Después de que el disolvente se ha separado por destilación, el aceite bruto producido se procesa en aceite comestible, usando procedimientos de desgomado especiales y refinado físico. También se puede utilizar como materia prima para la producción de ácidos grasos y éster metílico. La harina se puede usar para raciones para animales.

El desgomado es la primera etapa en el refinado del aceite vegetal, y se diseña para eliminar fosfátidos contaminantes que se extraen con el aceite pero que interfieren con el procesamiento subsiguiente del aceite. Estos fosfátidos son solubles en el aceite vegetal solamente en una forma anhidra, y se pueden precipitar y eliminar si se hidratan simplemente. La hidratación se logra habitualmente mezclando una pequeña proporción de agua continuamente con aceite sustancialmente seco. Típicamente, la cantidad de agua es 75% del contenido de fosfáticos, que es típicamente 1 a 1, 5%. La temperatura no es muy crítica, aunque la separación de las gomas hidratadas es mejor si la viscosidad del aceite se reduce a 50ºC hasta 80ºC.

Actualmente se usan muchos métodos para el desgomado del aceite. El procedimiento de desgomado del aceite se puede ayudar enzimáticamente usando enzimas fosfolipasas. Las fosfolipasas A1 y A2 se han usado para el desgomado de aceites en diversos procedimientos industriales, por ejemplo “desgomado ENZYMAX™ “ (Lurgi Life Science Technologies GmbH, Alemania) . La fosfolipasa C (PLC) también se ha considerado para el desgomado de aceites debido a que el resto de fosfato generado por su acción sobre los fosfolípidos es muy soluble en agua y fácil de eliminar, y el diglicérido permanecería con el aceite y reduce pérdidas; véanse, por ejemplo, Godfrey, T. y West

S. (1996) Industrial Enzymology, p. 299-300, Stockton Press, Nueva York; Dahlke (1998) “An enzymatic process for the physical refining of seed oils”, Chem. Eng. Technol. 21:278-281; Clausen (2001) “Enzymatic oil degumming by a novel microbial phospholipase”, Eur. J. Lipid Sci. Technol. 103:333-340.

Los aceites con contenido elevado de fosfátidos, tales como soja, cánola y girasol, se procesan de forma diferente a otros aceites tales como el de palma. A diferencia del procedimiento de vapor o “refinado físico” para aceites con bajo contenido de fosfátidos, estos aceites con un contenido elevado de fósforo requieren tratamientos químicos y mecánicos especiales para eliminar los fosfolípidos que contienen fósforo. Estos aceites se refinan típicamente de forma química en un procedimiento que supone neutralizar los ácidos grasos libres para formar jabón y una fracción de goma insoluble. El proceso de neutralización es muy eficaz a la hora de eliminar los ácidos grasos libres y los fosfolípidos, pero este proceso también da como resultado pérdidas significativas de rendimiento y sacrificios en la calidad. En algunos casos, el aceite bruto con contenido elevado de fosfátidos se desgoma en una etapa anterior a la neutralización cáustica. Este es el caso para aceite de soja utilizado para lecitina, en el que el aceite se desgoma en primer lugar con agua o ácido.

Los fitosteroles (esteroles vegetales) son miembros de la familia “triterpénica” de productos naturales, que incluyen más de 100 fitosteroles diferentes y más de 4000 otros tipos de triterpenos. En general, se piensa que los fitosteroles estabilizan membranas vegetales, conduciendo el incremento en la relación esterol/fosfolípido a una rigidización de la membrana. Químicamente, los fitosteroles se parecen mucho en estructura al colesterol. Los fitosteroles principales son !-sitosterol, campesterol y estigmasterol. Otros incluyen estigmastanol (!-sitostanol) , sitostanol, desmosterol, calinasterol, poriferasterol, clionasterol y brasicasterol.

Los esteroles vegetales son productos agrícolas importantes para las industrias de la salud y nutricional. Son emulsionantes útiles para fabricantes de cosméticos, y suministran la mayoría de intermedios esteroideos y precursores para la producción de fármacos hormonales. Los análogos saturados de fitosteroles y sus ésteres se han sugerido como agentes eficaces para reducir el colesterol, con beneficios de salud cardiológicos. Los esteroles vegetales reducen los niveles séricos de colesterol inhibiendo la absorción de colesterol en la luz intestinal, y tienen propiedades inmunomoduladoras a concentraciones extremadamente bajas, incluyendo una respuesta celular mejorada de linfocitos T y la capacidad citotóxica de las células asesinas naturales contra una estirpe celular cancerígena. Además, su efecto terapéutico se ha demostrado en estudios clínicos para el tratamiento de tuberculosis pulmonar, artritis reumatoide, manejo de pacientes infectados por VIH, e inhibición de estrés inmunitario en corredores de maratón.

Los ésteres de esteroles vegetales, también denominados como ésteres de fitosteroles, fueron aprobados como GRAS (Generalmente Reconocidos Como Seguros) por la Food and Drug Administration (FDA) de los Estados Unidos para uso en margarinas y pastas para untar en 1999. En septiembre de 2000, la FDA también emitió una norma provisional que permite el etiquetado beneficioso para la salud de alimentos que contienen éster de fitosterol. En consecuencia, el enriquecimiento de alimentos con ésteres de fitosterol es muy deseado para la aceptación de los consumidores.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona ácidos nucleicos aislados, sintéticos o recombinantes que comprenden una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o más, o una identidad de secuencia completa (100%) con un ácido nucleico ejemplar de la invención, por ejemplo SEC ID NO:1, y que codifica al menos un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa C. Las identidades de secuencias se pueden determinar mediante análisis con un algoritmo de comparación de secuencias o mediante inspección visual.... [Seguir leyendo]

1. Ácido nucleico aislado, sintético o recombinante que comprende

(a) una secuencia de ácido nucleico como se expone en SEC ID NO: 1;

(b) una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con SEC ID nº 1, en la que el ácido nucleico codifica al menos un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa C,

(c) un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como se expone en SEC ID NO: 2, en la que el ácido nucleico codifica un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa C;

(d) la secuencia de ácido nucleico de (a) , (b) o (c) , pero que no comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia señal;

(e) la secuencia de ácido nucleico de cualquiera de (a) a (d) , que comprende además una secuencia de ácido nucleico que codifica un péptido o un polipéptido heterólogo; o

(f) una secuencia de ácido nucleico totalmente complementaria a cualquiera de (a) a (e) .

2. Sonda que comprende

(a) el ácido nucleico aislado, sintético o recombinante según la reivindicación 1;

(b) la sonda de (a) , que comprende además un marcador detectable; o

(c) la sonda de (b) , en la que el marcado detectable comprende un isótopo radioactivo, un colorante fluorescente

o una enzima.

3. Par de cebadores de amplificación, comprendiendo dicho par de cebadores un primer miembro que tiene una secuencia como se expone aproximadamente mediante los 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 o más primeros restos (en 5’) de SEC ID NO: 1; y

un segundo miembro que tiene una secuencia como se expone aproximadamente mediante los 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ó 30 ó más primeros restos (en 5’) de la hebra complementaria del primer miembro.

4. Casete de expresión que comprende el ácido nucleico según la reivindicación 1.

5. Vector que comprende el ácido nucleico según la reivindicación 1.

6. Célula transformada que comprende (a) un ácido nucleico exógeno, en el que el ácido nucleico exógeno comprende el ácido nucleico según la reivindicación 1; o (b) un casete de expresión o un vector que comprende un ácido nucleico exógeno, comprendiendo dicho ácido nucleico exógeno el ácido nucleico según la reivindicación 1, siendo la célula una célula bacteriana, una célula de mamífero, una célula fúngica, una célula de levadura, una célula de insecto o una célula vegetal.

7. Procedimiento de producción de un polipéptido recombinante que comprende las etapas de: (a) producir un ácido nucleico según la reivindicación 1; y (b) expresar el ácido nucleico de la etapa (a) en condiciones que permiten la expresión del polipéptido, produciendo de ese modo un polipéptido recombinante.

8. Planta transgénica que comprende (a) un ácido nucleico exógeno, comprendiendo dicho ácido nucleico exógeno el ácido nucleico según la reivindicación 1; (b) un casete de expresión o un vector que comprende un ácido nucleico exógeno, comprendiendo dicho ácido nucleico el ácido nucleico según la reivindicación 1; (c) la célula transformada según la reivindicación 6; (d) la planta transgénica de (a) , (b) o (c) , siendo dicho planta una planta de maíz, una planta de sorgo, una planta de patata, una planta de tomate, una planta de trigo, una planta oleaginosa, una planta de colza, una planta de soja, una planta de arroz, una planta de cebada, una planta gramínea, una planta de algodón, de palmera, de sésamo, una planta de cacahuete, una planta de girasol o una planta de tabaco.

9. Semilla transgénica que comprende (a) un ácido nucleico exógeno, comprendiendo dicho ácido nucleico exógeno el ácido nucleico según la reivindicación 1; (b) un casete de expresión o un vector que comprende un ácido nucleico exógeno, comprendiendo dicho ácido nucleico el ácido nucleico según la reivindicación 1; (c) la célula transformada según la reivindicación 6; (d) la semilla transgénica de (a) , (b) o (c) , siendo dicha semilla una semilla de maíz, una semilla de trigo, una semilla de oleaginosas, una semilla de colza, una semilla de haba de soja, una pepita de palma, una semilla de girasol, una semilla de sésamo, una semilla de arroz, de cebada, de cacahuete, de algodón, de palma, de cacahuete, de sésamo, una semilla de girasol o una semilla de planta de tabaco.

10. Polipéptido aislado, sintético o recombinante, que comprende:

(a) una secuencia de aminoácidos como se expone en SEC ID NO: 2;

(b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con SEC ID NO: 2, teniendo dicho polipéptido una actividad de fosfolipasa C,

(c) un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa C codificado por el ácido nucleico según la reivindicación 1;

(d) una secuencia de aminoácidos de (a) , (b) o (c) , que tiene una actividad de fosfolipasa C, y que tiene al menos una sustitución conservativa de restos de aminoácidos;

(e) la secuencia de aminoácidos de (d) , comprendiendo dicha al menos una sustitución conservativa de restos de aminoácidos la sustitución de un aminoácido por otro de características similares;

(f) la secuencia de aminoácidos de cualquiera de (a) a (e) , pero que no comprende una secuencia señal;

(g) la secuencia de aminoácidos de cualquiera de (a) a (f) que comprende además un péptido o polipéptido heterólogo; o

(h) el polipéptido de (g) , comprendiendo dicho polipéptido al menos un sitio de glucosilación.

11. Polipéptido que comprende:

(a) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 98% de identidad de secuencia con SEC ID NO: 2;

(b) un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa C codificado por el ácido nucleico que tiene el menos 98% de identidad de secuencia con SEC ID NO: 1; o

(c) el polipéptido de (a) o (b) , pero que no comprende una secuencia señal.

12. Composición que comprende un polipéptido como se expone en la reivindicación 10 u 11.

13. Anticuerpo aislado (a) que se une específicamente a SEC ID NO: 2.

14. Método de generación de una variante de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, que comprende:

(i) (a) proporcionar un ácido nucleico molde que comprende la secuencia de ácido nucleico según la reivindicación 1 (a) , (b) o (c) ; y (b) modificar, suprimir o añadir uno o varios nucleótidos en la secuencia molde, o una combinación de estos, para generar una variante del ácido nucleico molde;

(ii) el método de (i) , que comprende además expresar el ácido nucleico variante para generar un polipéptido de fosfolipasa variante;

(iii) el método de (i) , en el que las modificaciones, adiciones o supresiones se introducen mediante un método que comprende PCR propensa a errores, barajado de partículas, mutagénesis dirigida por oligonucleótidos, PCR por ensamblaje, mutagénesis por PCR sexual, mutagénesis in vivo, mutagénesis por casete, mutagénesis de conjunto recursivo, mutagénesis de conjunto exponencial, mutagénesis específica del sitio, reensamblaje génico, mutagénesis de saturación de sitio génico (GSSM) , reensamblaje por ligamiento sintético (SLR) , recombinación de secuencia recursiva, mutagénesis de ADN modificado por fosfotioato, mutagénesis de molde que contiene uracilo, mutagénesis de dúplex con saltos, mutagénesis por reparación de desemparejamiento de punto, mutagénesis de cepa hospedante deficiente en la reparación, mutagénesis química, mutagénesis radiogénica, mutagénesis por supresión, mutagénesis por restricción-selección, mutagénesis por restricción-purificación, síntesis de gen artificial, mutagénesis de conjunto, creación de multímero de ácido nucleico quimérico, o una combinación de estos; o

(iv) el método de (iii) , siendo dicho método repetido de manera iterativa hasta que se produzca una fosfolipasa que tiene una actividad alterada o diferente o una estabilidad alterada o diferente de la de un polipétido codificado por el ácido nucleico molde.

15. Método para hidrolizar, romper o interrumpir una composición que comprende un fosfolípidos, que comprende:

(i) (a) producir un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, comprendiendo dicho polipéptido el polipéptido según la reivindicación 10 u 11; (b) producir una composición que comprende un fosfolípido; y (c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) con la composición de la etapa (b) en condiciones en las que la fosfolipasa hidroliza, rompe o interrumpe la composición que comprende un fosfolípido;

(ii) el método de (i) , en el que la composición comprende una bicapa o una membrana lipídica que comprende un fosfolípido; o

(iii) el método de (i) , en el que la composición comprende una célula vegetal, una célula bacteriana, una célula de levadura, una célula de insecto, o una célula animal.

16. Método de desgomado de un aceite, que comprende:

(i) (a) producir una composición que comprende un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, comprendiendo dicho polipéptido el polipéptido según la reivindicación 10 u 11; (b) producir una composición que comprende una grasa o un aceite que contiene un fosfolípido; y (c) poner en contacto dicho polipéptido de la etapa (a) y dicha composición de la etapa (b) en condiciones en las que el polipéptido pueda catalizar la hidrólisis de un fosfolípido en dicha composición;

(ii) el método de (i) , en el que la composición que comprende un aceite comprende un aceite o grasa de planta, de animal, de alga o de pescado;

(iii) el método de (ii) , en el que el aceite vegetal comprende un aceite de haba de soja, una aceite de colza, un aceite de maíz, un aceite de palma, un aceite de cánola, un aceite de girasol, un aceite de sésamo o un aceite de cacahuete;

(iv) el método de (i) , en el que dicho polipéptido hidroliza un fosfátido a partir de un fosfolípido hidratable o no hidratable en la composición que comprende un aceite;

(v) el método de (i) , en el que el polipéptido hidroliza un fosfátido en un enlace de fosfoéster de glicerilo para generar un diglicérido y un compuesto de fosfato hidrosoluble;

(vi) el método de (i) , en el que la puesta en contacto comprende la hidrólisis de un fosfolípido hidratado en un aceite;

(vii) el método de (i) , en el que el polipéptido está unido a un filtro, y la grasa o el aceite que contiene un fosfolípido se hace pasar a través del filtro; o

(viii) el método de (vii) , en el que el polipéptido se añade a una disolución que comprende una grasa o un aceite que contiene un fosfolípido y después en el que la disolución se hace pasar a través de un filtro.

17. Método para convertir un fosfolípido no hidratable en una forma hidratable, que comprende:

(i) (a) producir una composición que comprende un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, comprendiendo dicho polipéptido el polipéptido según la reivindicación 10 u 11; (b) producir una composición que comprende un fosfolípido no hidratable; y (c) poner en contacto el polipéptido de la etapa (a) con la composición de la etapa (b) en condiciones en las que el polipéptido convierte el fosfolípido no hidratable en una forma hidratable.

18. Método para el refinado cáustico de una composición que contiene un fosfolípidos, que comprende:

(i) (a) producir una composición que comprende un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, comprendiendo dicho polipéptido el polipéptido según la reivindicación 10 u 11; (b) proporcionar una composición que comprende un fosfolípido; y (c) poner en contacto dicho polipéptido de la etapa (a) con dicha composición de la etapa (b) antes, durante o después del refinado cáustico;

(ii) el método de (i) , en el que dicho polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa se añade antes del refinado cáustico, y comprendiendo dicha composición que comprende dicho fosfolípido una planta, y dicho polipéptido es expresado de manera transgénica en la planta, añadiéndose dicho polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa durante la trituración de una semilla u otra parte de la planta, o siendo dicho polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa añadido después del triturado o antes del refinado;

(iii) el método de (i) , en el que dicho polipéptido que tiene una actividad fosfolipasa se añade durante el refinado cáustico, y se añaden diferentes porcentajes de ácido y de agente cáustico según los niveles de fósforo y los niveles de ácidos grasos libres; o

(iv) el método de (i) , en el que dicho polipéptido que tiene una actividad fosfolipasa se añade después del refinado cáustico: en una mezcladora intensa o una mezcladora de retención antes de la separación; después de una etapa de calentamiento; en una centrifugadora; en una grasa para jabón; en un detergente; o durante etapas de blanqueo o desodorización.

19. Método de refinado de un aceite, que comprende:

(i) (a) proporcionar una composición que comprende un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, en el que dicho polipéptido comprende el polipéptido según la reivindicación 10 u 11; (b) proporcionar una composición que comprende un aceite; y (c) poner en contacto dicho polipéptido de la etapa (a) con la composición de la etapa

(b) en condiciones en las que dicho polipéptido puede catalizar la hidrólisis de un fosfolípido en dicha

composición;

(ii) el método de (i) , en el que dicho polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa está en una disolución acuosa que se añade a la composición;

(iii) el método de (i) , en el que dichas condiciones de hidrólisis comprenden el uso de agentes cáusticos; o

(iv) el método de (i) , en el que dichas condiciones de hidrólisis comprenden la adición de emulsionantes o el mezclamiento después de la puesta en contacto de la etapa (c) ;

(v) el método de (i) , que comprende añadir un emulsionante o calentar para inducir la separación de una fase acuosa;

(vi) el método de (i) , que comprende el desgomado antes de la etapa de puesta en contacto para recoger la lecitina por centrifugación y después añadir una PLC o una PLA para eliminar los fosfolípidos no hidratables;

(vii) el método de (i) , que comprende el desgomado acuoso de aceite bruto a menos de 10 ppm para aceites comestibles, y después el refinado físico hasta menos de aproximadamente 50 ppm para aceites biodiesel; o (viii) el método de (i) , que comprende la adición de ácido para inducir la hidratación de los fosfolípidos no hidratables.

20. Método para fabricar un biodiesel que comprende el uso de un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, en el que dicho polipéptido comprende el polipéptido según la reivindicación 10 u 11, o está codificado por el ácido nucleico según la reivindicación 1.

21. Método para el tratamiento de desechos que comprende el uso de un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, en el que dicho polipéptido comprende el polipéptido según la reivindicación 10 u 11, o está codificado por el ácido nucleico según la reivindicación 1.

22. Método para el refinado físico que comprende el uso de un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, en el que dicho polipéptido comprende el polipéptido según la reivindicación 10 u 11, o está codificado por el ácido nucleico según la reivindicación 1.

23. Método para tratar un aceite que comprende el uso de un polipéptido que tiene una actividad de fosfolipasa, en el que dicho polipéptido comprende el polipéptido según la reivindicación 10 u 11, o está codificado por el ácido nucleico según la reivindicación 1.