Formulaciones para vacunas meningocócicas.

Un kit que comprende:

(i) un primer contenedor que contiene un adyuvante que comprende una emulsión deaceite en agua;

y

(ii) un segundo contenedor que contiene una composición antigénica liofilizada que comprende uninmunógeno para producir una respuesta inmunitaria contra Neisseria meningitidis, serogrupo B.

Formulaciones para vacunas meningocócicas Campo de la técnica La presente invención está en el campo de la formulación de vacunas meningocócicas.

Técnica anterior En la actualidad se están investigando varias vacunas contra el serogrupo B de Neisseria meningitidis ("Men-B") , pero comparten una característica común.

Los productos de vesícula de la membrana externa (VME) producidos por Novartis (MENZB™) , por el Finlay Institute (VAMENGOC-BC™) , por el Norwegian Institute of Public Health (MENBVACT™) y por el Netherlands Vaccine Institute (HEXAMEN™ y NONAMEN™) incluyen todos ellos un adyuvante de hidróxido de aluminio. La "vacuna universal para meningococo de serogrupo B" comunicada por Novartis en la referencia 1 también incluye un adyuvante de hidróxido de aluminio, como también lo incluye la vacuna bivalente de VME notificada recientemente en la referencia 2.

Divulgación de la invención Al desarrollar la vacuna Men-B de Novartis, los inventores han descubierto que la inmunogenicidad óptima requiere la presencia de un adyuvante. Además, han descubierto que la adsorción en hidróxido de aluminio proporciona buena estabilidad de almacenamiento para los antígenos de la vacuna. No obstante, para evitar la necesidad de usar sales de aluminio se han buscado alternativas.

El uso de adyuvantes que no sean de aluminio para vacunas Men-B ya se conoce. Por ejemplo, la referencia 3 notifica el uso de la emulsión de aceite en agua MF59 como adyuvante para vesículas Men-B y la referencia 4 describe el uso de oligonucleótidos inmunoestimulantes y/o MF59 como adyuvantes. Aunque los resultados de inmunogenicidad con MF59 fueron excelentes y la investigación continua ha mostrado que este adyuvante puede potenciar la cobertura de cepas de una vacuna Men-B en comparación con el hidróxido de aluminio, otros trabajos han mostrado inesperadamente que los inmunógenos de Men-B adyuvados con emulsiones de aceite en agua tienen una estabilidad mala a largo plazo. Por tanto, es un objeto de la invención proporcionar modos de mejorar la estabilidad durante el almacenamiento de las vacunas Men-B cuando se usan emulsiones de aceite en agua como adyuvantes.

La experiencia previa con emulsiones de aceite en agua procede del área de las vacunas contra la gripe. El producto FLUAD™ incluye la emulsión MF59 y se distribuye en un formato líquido premezclado en un único contenedor (el enfoque "un vial") . Esta formulación premezclada es la formulación que ahora se ha descubierto que ofrece una mala estabilidad para las vacunas Men-B.

Como alternativa a la formulación de "un vial" con vacunas de emulsiones de aceite en agua, se ha estado usando un enfoque de "dos viales" para la gripe (p. ej., véase la ref. 5) , para el VHS (p. ej., véase la ref. 6) y para el VIH (p. ej., véase la ref. 7) , en el que la vacuna y la emulsión están distribuidas juntas, en formato líquido ambas, para mezclar de forma extemporánea en el momento del uso.

E acuerdo con la presente invención, se sigue un enfoque diferente para las vacunas Men-B, usando una formulación doble de (i) un adyuvante de emulsión de aceite en agua y (ii) un componente inmunogénico Men-B en forma liofilizada. Los antígenos Men-B liofilizados se pueden reconstituir en forma de líquido adyuvado en el momento de usar listo para administrar a un paciente. Se ha descubierto que esta formulación proporciona excelentes resultados en términos de estabilidad y de inmunogenicidad.

Los inventores también han descubierto que el componente liofilizado puede retener su eficacia cuando se incluye uno o más sacáridos conjugados de N. meningitidis en los serogrupos A, C, W135 y/o Y (Men-A, -C, -W135 e -Y) . La combinación de antígenos para inmunizar contra múltiples serogrupos de meningococo, incluido el serogrupo B, usando un único componente liofilizado, es particularmente ventajosa.

Por tanto, la invención proporciona un kit que comprende: (i) un primer contenedor que contiene un adyuvante que comprende una emulsión de aceite en agua; y (ii) un segundo contenedor que contiene una composición antigénica liofilizada que comprende un inmunógeno para producir una respuesta inmunitaria contra el serogrupo B de N. meningitidis. La composición antigénica liofilizada puede además comprender un sacárido capsular conjugado de uno o más de los serogrupos A, C. W135 y/o Y de N. meningitidis.

La invención también proporciona un procedimiento para preparar una composición inmunogénica, que comprende una etapa de mezclar:

(i) un adyuvante que comprende una emulsión de aceite en agua; y (ii) una composición antigénica liofilizada que comprende un inmunógeno para producir una respuesta inmunitaria contra el serogrupo B de N. meningitidis. La composición antigénica liofilizada puede además comprender un sacárido capsular conjugado de uno o más de los serogrupos A, C. W135 y/o Y de N. meningitidis.

La composición antigénica liofilizada La invención usa una composición antigénica liofilizada que incluye un inmunógeno para producir una respuesta inmunitaria contra Men-B. Opcionalmente puede incluir un sacárido capsular conjugado de uno o más de Men-A, Men-C, Men-W135 y/o Men-Y.

El inmunógeno Men-B puede comprender vesículas de membrana de una bacteria Men-B y/o proteínas recombinantes de Men-B y/o lipooligosacárido (LOS) de Men-B.

La liofilización de las VME de Men-B se conoce en la técnica [8], pero estas VME se administraron después junto con un adyuvante de fosfato de aluminio. Por tanto, el problema de la estabilidad del antígeno cuando se combina con una emulsión de aceite en agua adyuvante no se comunicó. Se conoce una liofilización similar de los antígenos conjugados de meningococo, incluyendo la reconstitución posterior con MF59 [9], pero no en combinación con ningún antígeno Men-B-

Componentes de Men-B que comprenden las vesículas Las vesículas para usar como componentes de vacuna de Men-B incluyen cualquier vesícula proteoliposómica obtenida rompiendo una membrana externa bacteriana para formar vesículas de la misma que incluyen componentes proteicos de la membrana externa. Por tanto, el término incluye VME (en ocasiones denominadas "ampollas") , microvesículas (MV [10]) y VME nativas" ("NVME" [11]) .

Las VM y las NVME son vesículas de membrana que se producen de forma natural y se forman de forma espontánea durante el crecimiento bacteriano y se liberan al medio de cultivo. Las VM se pueden obtener cultivando Neisseria en medio de caldo cultivo, separando las células enteras de las VM más pequeñas en el medio de caldo cultivo (p. ej., mediante filtración o mediante centrifugación de baja velocidad, para sedimentar únicamente las células y no las vesículas, que son más pequeñas) , y, después, recoger las VM del medio sin células (p. ej., mediante filtración, mediante precipitación diferencial o agregación de VM, mediante centrifugación a velocidad alta para sedimentar las VM. Las cepas para usar en la producción de VM pueden seleccionarse, en general, en base a la cantidad de VM producidas en el cultivo, por ejemplo las ref. 12 y 13 describen Neisseria con producción de VM alta.

Las VME se preparan artificialmente a partir de bacterias y se pueden preparar usando tratamiento con detergente (p. ej., con desoxicolato) o por medios sin detergente (p. ej., véase la referencia 14) . Procedimientos para obtener preparaciones de VME adecuadas se divulgan en, por ejemplo, las referencias citadas en el presente documento. Técnicas para formar VME incluyen el tratamiento de las bacterias con un detergente de sal de ácido biliar (p. ej., sales de ácido litocólico, ácido quenodesoxicólico, ácido ursodesoxicólico, ácido desoxicólico, ácido cólico, ácido ursocólico etc., siendo preferido el desoxicolato sódico [15 & 16] para tratar Neisseria) a un pH suficientemente alto como para no precipitar el detergente [17]. Se pueden efectuar otras técnicas sustancialmente en ausencia de detergente [14] usando técnicas tales como sonicación, homogeneización, microfluidificación, cavitación, shock osmótico, molturación, prensa francesa, mezclado etc. Los procedimientos que no usan detergente, o usan muy poco, pueden retener antígenos útiles, tales como NspA [14]. Por tanto, un procedimiento puede usar un tampón de extracción de VME con desoxicolato al aproximadamente 0, 5 % o menor, por ejemplo aproximadamente 0, 2 %, aproximadamente 0, 1 %, < 0, 05 % o cero.

Un procedimiento útil para la preparación... [Seguir leyendo]

1. Un kit que comprende: (i) un primer contenedor que contiene un adyuvante que comprende una emulsión de aceite en agua; y (ii) un segundo contenedor que contiene una composición antigénica liofilizada que comprende un inmunógeno para producir una respuesta inmunitaria contra Neisseria meningitidis, serogrupo B.

2. El kit de la reivindicación 1, en el que la composición antigénica liofilizada en el segundo contenedor comprende además un sacárido capsular conjugado de uno o más de los serogrupos A, C, W135 y/o Y de N. meningitidis.

3. El kit de la reivindicación 2, en el que la composición antigénica liofilizada está sustancialmente libre de sales de aluminio.

4. El kit de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la composición antigénica liofilizada y/o la 10 emulsión adyuvante está/n sustancialmente libres de sales de aluminio.

5. El kit de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la composición antigénica liofilizada comprende vesículas de membrana de una cepa del serogrupo B de N. meningitidis.

6. El kit de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la composición antigénica liofilizada comprende proteínas recombinantes de una cepa del serogrupo B de N. meningitidis.

7. El kit de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la composición antigénica liofilizada comprende un lipooligosacárido de una cepa del serogrupo B de N. meningitidis.

Figura 1

Figura 2 Figura 3