Emulsión inmuno-adyuvante termorreversible.

Composición inmunógena que comprende al menos un antígeno contra la gripe y una emulsión adyuvante aceiteen agua obtenida por un procedimiento de inversión de fase por variación de la temperatura de una mezcla quecomprende al menos :

- escualeno,

- un disolvente acuoso,

- un polioxietilen alquil éter, cuyo balance hidrófilo/lipófilo es superior o igual a 10,- un tensioactivo no iónico hidrófobo, cuyo balance hidrófilo/lipófilo es interior o igual a 9.

Emulsión inmuno-adyuvante termorreversible

La presente invención se refiere al campo de las vacunas gripales; pero más particularmente, la invención se refiere al campo de las vacunas gripales que comprenden una emulsión adyuvante. En la técnica anterior existen

numerosas vacunas que contienen uno o varios adyuvantes. La patente US6299884 describe principalmente una formulación adyuvante que comprende una emulsión de aceite en agua cuyo tamaño de gotas de aceite está comprendido entre 100 y 1000 nm. Esta emulsión se obtiene por medio de un homogenizador de alta presión (microfluidizador) , en el transcurso de un procedimiento de fabricación que usa elevadas energías mecánicas con el fin de obtener fuerzas de cizallamiento suficientemente grandes para reducir el tamaño de las gotas de aceite. Según esta enseñanza, si el valor mínimo del intervalo de las gotas obtenidas es de 100 nm, el valor medio es claramente mayor y se sitúa, en el mejor de los casos, en aproximadamente 170 nm, más generalmente aproximadamente 500 nm.

Se desea poder disponer de una formulación alternativa a la propuesta en esta patente, que se pueda obtener por un procedimiento más sencillo (que no necesite una tecnología de cizallamiento particular) y de baja energía y que

sea a la vez reproducible y perfectamente fiable; además, la formulación adyuvante debe permitir ayudar eficazmente a las vacunas permitiendo principalmente aumentar la respuesta inmunitaria obtenida con el fin de disminuir la dosis de antígeno presente, sin presentar ningún signo de toxicidad que perjudicaría su administración con total seguridad.

Para conseguir este objetivo, la presente invención tiene por objeto una composición inmunógena que comprende al menos un antígeno contra la gripe y una emulsión adyuvante aceite en agua obtenida por un procedimiento de inversión de fase por variación de la temperatura de una mezcla que comprende al menos :

• escualeno,

• un disolvente acuoso,

• un polioxietilen alquil éter, cuyo balance hidrófilo/lipófilo es superior o igual a 10,

• un tensioactivo no iónico hidrófobo, cuyo balance hidrófilo/lipófilo es interior o igual a 9.

Tal emulsión obtenida por un procedimiento de inversión de fase por variación de temperatura proporciona una ventaja muy grande desde un punto de vista industrial. Dicho procedimiento presenta todas las garantías de seguridad y de rentabilidad necesarias para la industria farmacéutica. Además, gracias a este procedimiento, es posible obtener una emulsión monodispersa cuyo tamaño de gotas de aceite sea muy pequeño, lo que hace que la emulsión así obtenida sea particularmente estable y fácilmente filtrable por medio de filtros esterilizantes cuyo umbral de corte es de 200 nm. Según una característica particular, el 90% de la población volúmica (o d90) de las gotas de aceite tienen un tamaño inferior a 160 nm e incluso a 150 nm.

Según un modo particular de realización de la invención, la emulsión según la invención comprende además un alditol; esto permite obtener una inversión de fase a una temperatura inferior a la que sería necesaria para la misma

composición sin alditol, lo que permite reducir los costes de producción así como los riesgos de desnaturalización térmica de los constituyentes de la emulsión.

Según un modo particularmente ventajoso, el tensioactivo no iónico hidrófobo de la invención es un éster de sorbitano o un éster de manida. Dichos tensioactivos presentan la ventaja de poder utilizarse con toda seguridad en disoluciones inyectables.

Según un modo particular de la invención, la emulsión comprende además un alquilpoliglicósido y un agente crioprotector tal como un azúcar, en particular dodecilmaltósido y/o sacarosa.

Por lo tanto, es posible obtener una emulsión liofilizable que, después de liofilización y reconstrucción, vuelva a tener sus propiedades, principalmente granulométricas, es decir que la emulsión liofilizada después de ser reconstituida siga siendo monodispersa y esté constituida por gotas de aceite de las que el 90% de la población volúmica tiene un

45 tamaño inferior a 200 nm.

Esto es particularmente importante para el campo de las vacunas que a veces, por razones de estabilidad (bien de algunos antígenos, bien de algunos adyuvantes) deben conservarse en forma liofilizada.

Se describe igualmente un procedimiento de preparación de una composición inmunógena según el cual se mezcla al menos un antígeno vacunal con una emulsión aceite en agua, caracterizado por que se obtiene la emulsión aceite en agua por un procedimiento de inversión de fase por variación de la temperatura.

Según un modo de realización, el procedimiento según la invención comprende al menos una etapa de preparación de la emulsión de aceite en agua por enfriamiento de una emulsión inversa de agua-en-aceite que comprende al menos:

• escualeno,

• un disolvente acuoso,

• un tensioactivo no iónico hidrófilo que es un polioxietileno alquil éter,

• un tensioactivo no iónico hidrófobo.

Mediante dicho procedimiento, muy ventajoso desde el punto de vista industrial, se obtiene una composición inmunógena estable, muy eficaz incluso con una dosis muy baja de antígenos. Además, gracias al procedimiento de preparación utilizado, las gotas de aceite de las emulsiones están todas calibradas con el mismo tamaño muy pequeño; en efecto, cuando se realiza la medida de las propiedades granulométricas (tamaño y distribución de tamaños) , se señala que se tiene una emulsión monodispersa, con una curva de distribución de tipo gausiano muy cerrada, centrada alrededor de un valor pequeño, generalmente alrededor de 80-90 nm.

Según un modo de realización particular del procedimiento, se obtiene la emulsión inversa de agua en aceite mezclando escualeno, un disolvente acuoso, un tensioactivo no iónico hidrófilo que es un polioxietileno alquil éter y un tensioactivo no iónico hidrófobo con el fin de obtener en primer lugar una emulsión bruta de aceite en agua y a continuación se calienta esta emulsión hasta al menos la temperatura de inversión de fase con el fin de obtener la emulsión inversa. Dicha manera de proceder tiene como ventaja limitar la duración durante la que los diferentes componentes de la emulsión se someterán a una temperatura elevada.

Según otro modo de realización, el procedimiento comprende las etapas siguientes :

• se calientan por separado, a una temperatura al menos igual a la temperatura de inversión de fase, por una parte la fase acuosa que comprende el disolvente acuoso y el polioxietileno alquil éter y por otra parte la fase oleosa que comprende el escualeno y el tensioactivo hidrófobo y después

• se mezclan las 2 fases con el fin de obtener una emulsión inversa de agua en aceite.

Según un modo de realización particular, cada una de las fases acuosa y oleosa se calientan por separado, con mezclamiento, a una temperatura inferior a la temperatura de inversión de fase. A continuación, se mezclan las 2 fases con el fin de obtener una emulsión de aceite en agua; el conjunto se calienta a continuación a una temperatura igual al menos a la temperatura de inversión de fase con el fin de obtener la emulsión inversa de agua en aceite.

Según un modo de realización particular, el procedimiento de preparación según la invención comprende además una etapa de liofilización. Por lo tanto, el procedimiento se puede utilizar para la preparación de composiciones inmunógenas que comprenden antígenos que se deben conservar en forma liofilizada por razones de estabilidad.

En el curso de la descripción siguiente aparecerán otras numerosas ventajas de la presente invención.

Para los fines de la descripción de la invención, los parámetros d50 y d90 mencionados en la presente solicitud de patente son valores volúmicos; el valor de d50 significa el valor de 50% de la población volúmica de las gotas.

Por emulsión de aceite en agua en el sentido de la invención se entiende una dispersión de una fase oleosa en una fase acuosa que... [Seguir leyendo]

1. Composición inmunógena que comprende al menos un antígeno contra la gripe y una emulsión adyuvante aceite en agua obtenida por un procedimiento de inversión de fase por variación de la temperatura de una mezcla que comprende al menos :

- escualeno,

- un disolvente acuoso,

- un polioxietilen alquil éter, cuyo balance hidrófilo/lipófilo es superior o igual a 10,

- un tensioactivo no iónico hidrófobo, cuyo balance hidrófilo/lipófilo es interior o igual a 9.

2. Composición inmunógena según la reivindicación 1, caracterizada por que la emulsión adyuvante comprende una

población monodispersa de gotas de escualeno de las que el 90 % del volumen está constituido por gotas que tienen un tamaño inferior a 200 nm.

3. Composición según la reivindicación anterior, caracterizada por que el 90 % del volumen de las gotas de escualeno está constituido por gotas que tienen un tamaño inferior a 150 nm.

4. Composición según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque comprende además al menos un 15 alditol.

5. Composición según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque la cantidad de antígeno vacunal está reducida hasta 63 veces.

6. Composición según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque comprende de 0, 4 a 2, 5 % de escualeno en peso en la composición vacunal.