Un procedimiento para el diagnóstico de celiaquía en un individuo,

comprendiendo dicho procedimiento detectar la presencia de (i) un oligopéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos

5 LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPQPF (SEQ ID NO: 12), o un equivalente desamidado del mismo o un equivalente del mismo unido covalentemente a una transglutaminasa tisular de mamífero en un tejido, fluido corporal o heces de dicho individuo, usando un anticuerpo que se une específicamente a dicho oligopéptido, equivalente desamidado del mismo o equivalente del mismo unido covalentemente a una transglutaminasa tisular de mamífero; o (ii) un anticuerpo que se une específicamente a dicho oligopéptido o equivalente desamidado del mismo, en un tejido, fluido corporal o heces de dicho individuo, usando dicho oligopéptido, equivalente desamidado del mismo o equivalente del mismo unido covalentemente a una transglutaminasa tisular de mamífero.

PROCEDIMIENTO DE DIAGNÓSTICO DE LA CELIAQUÍA

[0001] En 1953 se reconoció por primera vez que la ingestión de gluten, una proteína habitual de la dieta presente en el trigo, cebada y centeno produce una enfermedad en individuos sensibles. El gluten es una mezcla compleja de moléculas de prolamina y glutenina ricas en glutamina y prolina, que se cree que es responsable de inducir la enfermedad. La ingestión de dichas proteínas por individuos sensibles produce el aplanamiento del revestimiento epitelial de tipo alfombrado, normalmente frondoso, del intestino delgado que se sabe que es responsable de la digestión terminal eficaz y extensa de péptidos y otros nutrientes. Los síntomas clínicos de la celiaquía incluyen fatiga, diarrea crónica, absorción insuficiente de nutrientes, pérdida de peso, distensión abdominal, anemia, además de un riesgo sustancialmente potenciado de desarrollar osteoporosis y tumores malignos intestinales (linfoma y carcinoma) . La enfermedad tiene una incidencia de aproximadamente 1 de cada 200 en poblaciones europeas.

Una enfermedad relacionada es la dermatitis herpetiforme, que es una erupción crónica caracterizada por grupos de vesículas extremadamente pruriginosas, pápulas y lesiones de tipo urticaria. Los depósitos de IgA se producen en casi toda la piel de aspecto normal y perilesional. La enteropatía asintomática sensible al gluten se encuentra en 75 a 90 % de los pacientes y en algunos de sus parientes. La aparición normalmente es gradual. El picor y el escozor son intensos, y el rascarse con frecuencia oculta las lesiones primarias con eczematización de la piel cercana, conduciendo a un diagnóstico erróneo de eczema. El estricto cumplimiento de una dieta sin gluten durante periodos prolongados puede controlar la enfermedad en algunos pacientes, eliminando o reduciendo el requisito de terapia con fármacos. Algunas veces se recetan dapsona, sulfapiridina y colchicinas para aliviar el picor.

[0003] La celiaquía se considera en general que es una enfermedad autoinmunitaria y los anticuerpos encontrados en el suero de los pacientes apoyan la teoría de la naturaleza inmunológica de la enfermedad. Los anticuerpos para la transglutaminasa tisular (tTG) y la gliadina aparecen en casi 100 % de los pacientes con celiaquía activa, y la presencia de dichos anticuerpos, en particular de la clase IgA, se ha usado en el diagnóstico de la enfermedad.

La gran mayoría de los pacientes expresan las moléculas HLA-DQ2 [DQ (a1*0501, b1*02) ] y/o DQ8 [DQ (a1*0301, b1*0302) ]. Se cree que el daño intestinal se produce por interacciones entre oligopéptidos de gliadina específicos y el antígeno HLA-DQ2 o DQ8, que a su vez induce la proliferación de linfocitos T en las capas subepiteliales. Los linfocitos auxiliares T1 y las citoquinas parece que tienen una función importante en un proceso inflamatorio local que conduce a atrofia vellositaria del intestino delgado.

Actualmente no hay una buena terapia para la enfermedad, excepto el evitar completamente todos los alimentos que contengan gluten. Aunque la retirada del gluten ha transformado el pronóstico para niños y lo ha mejorado sustancialmente para adultos, todavía mueren algunas personas de la enfermedad, principalmente adultos que tenían una enfermedad grave desde el principio. Una causa importante de muerte es la enfermedad del sistema linforreticular (especialmente linfoma intestinal) . No se sabe si una dieta sin gluten disminuye este riesgo. La remisión clínica aparente está asociada con frecuencia a la recaída histológica que sólo se detecta por biopsias de evaluación o por un aumento de las valoraciones de EMA.

45 [0006] El gluten se usa tan ampliamente, por ejemplo, en sopas, salsas, helados, perritos calientes comerciales, etc., que los pacientes necesitan listas detalladas de productos alimenticios para evitarlos y el consejo experto de un nutricionista familiarizado con la enfermedad celíaca. La ingestión de incluso pequeñas cantidades de gluten puede evitar la remisión o inducir la recaída. También pueden requerirse vitaminas, minerales y hematínicos complementarios, dependiendo de la deficiencia. Algunos pacientes responden mal o no responden a la retirada del 50 gluten, o bien porque el diagnóstico es incorrecto o bien debido a que la enfermedad es resistente al tratamiento. En el último caso, los corticosteroides orales (por ejemplo, prednisona 10 a 20 mg dos veces al día) pueden inducir respuesta.

Los procedimientos de diagnóstico actuales para la celiaquía son caros y no muy precisos. Estos 55 procedimientos incluyen procedimientos basados en ELISA en los que se detectan anticuerpos dirigidos contra gliadina o dirigidos contra tTG en el suero del paciente, y en los que se observa la proliferación de linfocitos T después de estimulación con gliadina. Sin embargo, con frecuencia estos procedimientos no son suficientemente sensibles para detectar los anticuerpos de diagnóstico en la sangre, o como es el caso de los ensayos de proliferación de linfocitos T, se considera que son demasiado caros para el uso rutinario. Típicamente, aunque un individuo de positivo en el ensayo de diagnóstico, se debe volver a estimular al individuo con gliadina (típicamente después de mantener una dieta sin gluten durante un periodo de tiempo prolongado) y examinarlo por endoscopia, un procedimiento invasivo y a menudo doloroso.

[0008] La publicación PCT nº WO 01/25793, publicada el 12 de abril de 2001, describe péptidos derivados de la cartografía de epítopos de la alfa-gliadina y procedimientos para el diagnóstico de la celiaquía usando dichos péptidos. Sin embargo, estos procedimientos no parece que sean significativamente más sensibles que los procedimientos usados actualmente y por lo tanto no superan las limitaciones de los procedimientos de diagnóstico que se usan actualmente.

La publicación PCT nº WO 02/083722 describe receptores de linfocitos T restringidos por HLA-DQ capaces de reconocer péptidos derivados de prolamina, implicados en la enteropatía inmunitaria relacionada con alimentos. Shan y col., Science, vol. 207, 27 de septiembre de 2002 (2002-09-27) , páginas 2275 - 2279, se refiere a la investigación de una base estructural para la intolerancia al gluten en la celiaquía.

Siguen siendo necesarios mejores procedimientos de diagnóstico para la celiaquía, procedimientos que sean más sensibles que los procedimientos actuales, que no requieran la confirmación por endoscopia, y que no requieran estimular a un individuo con una dieta que contiene gluten para la precisión. La presente invención aborda esta necesidad.

20 RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un procedimiento para diagnosticar la celiaquía en un individuo, comprendiendo dicho procedimiento detectar la presencia de (i) un oligopéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPF (SEQ ID NO: 12) , o un equivalente desamidado del mismo o un equivalente del mismo unido covalentemente a una transaminasa tisular de mamífero, en un tejido, fluido corporal o heces de dicho individuo, usando un anticuerpo que se une específicamente a dicho oligopéptido, equivalente desamidado del mismo o equivalente del mismo unido a una transglutaminasa tisular; o (ii) un anticuerpo que se une específicamente a dicho oligopéptido, o equivalente del mismo desamidado en un tejido, fluido corporal o heces de dicho individuo, usando dicho oligopéptido, equivalente desamidado del mismo o equivalente del mismo covalentemente unido a una transglutaminasa tisular de mamífero.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0012] Figuras 1A-1B. La membrana de borde en cepillo catalizaba la digestión del péptido de gliadina inmunodominante. Fig. 1A: Trazas en LC-MS de la SEQ ID NO: 1 QLQPFPQPQLPY después de la digestión con 27 ng/ll de proteína de membrana de borde en cepillo (BBM) de rata durante el tiempo indicado. Los productos de reacción se separaron por HPLC de fase inversa y se detectaron por espectroscopía de masas (recuentos de iones m/z = 300 - 2000 g/mol) . Los fragmentos de péptidos indicados se confirmaron por patrones de fragmentación de MS en tándem característicos. El pico de la SEQ ID NO: 2 pyroQLQPFPQPQLPY corresponde a una especie piroglutaminada N-terminal, que se genera durante la purificación por HPLC del material de partida sintético. Fig. 1

B: Abundancia de productos de digestión individuales en función del tiempo. Los fragmentos de péptidos en la Fig. 1A se cuantificaron integrando el área del pico de MS correspondiente (m/z = 300 - 2000... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para el diagnóstico de celiaquía en un individuo, comprendiendo dicho procedimiento detectar la presencia de (i) un oligopéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos

5 LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPQPF (SEQ ID NO: 12) , o un equivalente desamidado del mismo o un equivalente del mismo unido covalentemente a una transglutaminasa tisular de mamífero en un tejido, fluido corporal

o heces de dicho individuo, usando un anticuerpo que se une específicamente a dicho oligopéptido, equivalente desamidado del mismo o equivalente del mismo unido covalentemente a una transglutaminasa tisular de mamífero;

o (ii) un anticuerpo que se une específicamente a dicho oligopéptido o equivalente desamidado del mismo, en un

tejido, fluido corporal o heces de dicho individuo, usando dicho oligopéptido, equivalente desamidado del mismo o equivalente del mismo unido covalentemente a una transglutaminasa tisular de mamífero.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho tejido es un tejido de mucosa seleccionado del grupo que consiste en tejido de la mucosa oral, nasal, pulmonar e intestinal. 15

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho fluido corporal se selecciona del grupo que consiste en sangre, esputo, orina, flema, linfa y lágrimas.

4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho individuo no ha consumido gluten durante un 20 periodo de tiempo prolongado.

5. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho individuo no se ha sometido a una endoscopia.