Derivados de ácidos aureólicos, su procedimiento de obtención y sus usos.

La presente invención proporciona una cepa bacteriana que produce compuestos pertenecientes a la familia del ácido aureólico, de aplicación en el tratamiento del cáncer o enfermedades neurológicas.

Derivados de ácidos aureólicos, su procedimiento de obtención y sus usos.

Campo de la invención La invención se adscribe al campo farmacéutico y en concreto se refiere a compuestos con aplicación en oncología, con estructura química derivada de ácidos aureólicos y que se obtienen por fermentación de microorganismos y/o acilación enzimática catalizada por lipasas.

Estado de la técnica La familia del ácido aureólico comprende a un grupo de metabolitos secundarios sintetizados por miembros del género bacteriano Streptomyces. Esta familia está integrada por la mitramicina (MTM) , las cromomicinas, las olivomicinas, la cromociclomicina, el UCH9 y la durhamicina (Appl. Microbiol. Biotechnol. 2006, 73, 1-14) .

Los miembros de la familia del ácido aureólico presentan interesantes actividades biológicas de aplicación farmacéutica, tales como propiedades antibacterianas, antivirales y neuroprotectoras, aunque su principal interés farmacológico reside en su actividad antitumoral. Así por ejemplo, la MTM tiene aplicación clínica en el tratamiento de determinados tipos de cáncer, tales como el carcinoma testicular, la leucemia mieloide crónica y la leucemia mieloide aguda. También se ha utilizado en el tratamiento de la enfermedad de Paget y de la hipercalcemia causada por lesiones óseas asociadas al cáncer (Oncology 1973, 28, 147-163; Biochem. Biophys. Res. Comun. 1993, 195, 1245-1253; Treat. Endocrinol. 2002, 1, 241-257; Treat. Endocrinol. 2003, 2, 273-292) . Además, la MTM y la cromomicina A3 (CRM) se han descrito como potentes inhibidores de la apoptosis neuronal aberrante característica de ciertos desórdenes neurológicos (Ann. Neurol. 2001, 49, 345-354) , lo que podría convertir a estas moléculas en agentes para el tratamiento de enfermedades neurológicas tales como accidente cerebrovascular, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple y encefalitis vírica (J. Neurosci. 2004, 24, 10335-10342;

J. Biol. Chem. 2006, 281, 16672-16680) . Más recientemente, se ha descrito que la MTM en combinación con otros fármacos podría constituir una nueva terapia antiangiogénica para el tratamiento del cáncer de páncreas y otros tipos de cáncer (Cancer Res. 2007, 67, 4878-4885) .

Las diferentes actividades biológicas de los ácidos aureólicos son consecuencia de su mecanismo de acción a nivel celular, que consiste en la unión no covalente de estas moléculas (en forma de dímeros en presencia de iones Mg2+ ) al surco menor del ADN en regiones con alto contenido GC. De este modo inhiben la transcripción génica, ya que desplazan a los activadores transcripcionales que se unen a las regiones ricas en GC presentes en determinadas secuencias promotoras (J. Clin. Invest. 1989, 83, 2003-2007; J. Clin. Invest. 1991, 88, 1613-1621) . Tal es el caso de los factores de transcripción Sp1, una familia de proteínas de unión al ADN muy importantes para la transcripción de muchos genes celulares y virales que contienen cajas GC en sus regiones promotoras. Los factores Sp1 regulan múltiples funciones biológicas, incluyendo supervivencia celular, crecimiento y diferenciación, así como desarrollo y progresión tumoral (J. Cell. Physiol. 2001, 188, 143-160) .

Estructuralmente los compuestos del grupo del ácido aureólico poseen una parte cromófora (aglicón) de origen policetónico formada por tres anillos (cuatro en el caso de la cromociclomicina) y una cadena lateral altamente funcionalizada en el carbono 3. También presentan (con excepción de la olivomicina) un alquilo de cadena corta (metilo, isobutilo) en el carbono 7. Asimismo, estos compuestos poseen 2-6 desoxiazúcares unidos en forma de trisacárido o tetrasacárido (en el carbono 2) y monosacárido o disacárido (en el carbono 6) . Los compuestos del grupo del ácido aureólico difieren en la naturaleza y el modo de unión de sus cadenas glucídicas, que contienen diferentes 2, 6didesoxiazúcares. Estas variaciones estructurales son las responsables de las sutiles diferencias que existen entre los miembros del grupo en cuanto a su unión al ADN y su perfil de actividad biológica. Es bien conocido que el patrón de glicosilación de los fármacos antitumorales que actúan uniéndose al ADN, como es el caso de los ácidos aureólicos, tiene gran importancia en su actividad biológica. Por ello, la obtención de nuevos derivados de MTM con patrones glicosídicos alterados puede generar fármacos con actividad mejorada.

La MTM y la CRM (Figura 1) son los miembros más representativos de la familia del ácido aureólico. La MTM es un fármaco antitumoral producido por microorganismos del género Streptomyces, incluyendo Streptomyces argillaceus ATCC 12956. La CRM es producida, entre otros, por Streptomyces griseus ssp. griseus ATCC13276. La biosíntesis de MTM y CRM ha sido ampliamente estudiada en las cepas productoras previamente citadas (Appl. Microbiol. Biotechnol. 2006, 73, 1-14) . Los agrupamientos génicos responsables de la biosíntesis de ambas moléculas han sido secuenciados íntegramente. Adicionalmente, la inactivación específica de muchos de los genes biosintéticos ha permitido obtener información acerca del mecanismo de biosíntesis de los ácidos aureólicos. Así, se ha descrito que la biosíntesis de estas moléculas comienza con la condensación de 10 unidades de acil-coenzima A para generar un intermediario tetracíclico, denominado premitramicinona. A continuación, 5 unidades de desoxiazúcares son añadidas de forma sucesiva, generándose intermediarios tetracíclicos con diferente grado de glicosilación. La acción de una oxigenasa en uno de los pasos finales de la biosíntesis tiene como consecuencia la ruptura de uno de los anillos, generando una estructura tricíclica con una cadena lateral alifática unida a la posición 3 del aglicón. Finalmente, la reducción de un grupo ceto en la cadena lateral, genera la molécula final.

En el caso de la CRM cabe destacar la existencia de dos pasos biosintéticos adicionales que suponen la modificación de los azúcares después de haber sido transferidas al aglicón: una metilación en posición 4B (llevada a cabo por CmmMIII) y dos acetilaciones en posiciones 4A y 4E (catalizadas por CmmA) . La presencia de estos grupos metilo y acetilo en los azúcares de la CRM confiere características específicas a la unión con el ADN, ya que aportan enlaces de hidrógeno adicionales con los grupos amino de las bases de guanina, incrementando así la especificidad en la unión al ADN (Biochem. 1997, 36, 2291-2299) . La gran importancia de los grupos acetilo en la actividad biológica de la CRM quedó de manifiesto con la inactivación del gen cmmA en S. griseus, que permitió obtener un derivado desacetilado de la CRM que presenta una actividad antitumoral significativamente inferior a la molécula parental (Mol. Microbiol. 2004, 53, 903-915) . Por ello, la obtención de nuevos derivados de ácidos aureólicos con distintos patrones de acilación puede generar fármacos con propiedades farmacológicas más interesantes.

Actualmente existe una gran necesidad de nuevos agentes antitumorales, con actividad mejorada, con menos efectos secundarios indeseables y con mayor selectividad, en comparación con los fármacos actualmente en uso. En este sentido, el desarrollo de la tecnología del ADN recombinante ha abierto un interesante campo de investigación para la generación de nuevos compuestos bioactivos mediante la manipulación de genes implicados en la biosíntesis de agentes antitumorales, principalmente de bacterias del grupo de los actinomicetos. Estas técnicas también pueden ser usadas para mejorar la producción de compuestos naturales ya conocidos, pues las cepas naturales suelen producir bajas concentraciones del metabolito de interés.

La manipulación genética de microorganismos ha sido ya utilizada para la obtención de nuevos derivados de tipo ácido aureólico (Appl. Microbiol. Biotechnol. 2006, 73, 1-14) . Algunos de estos derivados presentan características mejoradas con respecto a la molécula parental. Tal es el caso de los derivados obtenidos a partir de Streptomyces argillaceus M7W1, cepa generada a partir de Streptomyces argillaceus mediante inactivación del gen mtmW (US 7, 423, 008 B2; J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 5745-5753) . El gen mtmW codifica una cetorreductasa, y su inactivación da como resultado la acumulación de 3D-desmicarosil-MTM-SK, MTM-SK, MTM-SA y MTM-SDK, moléculas que difieren de la MTM a nivel de la cadena lateral de la posición 3.

La biocatálisis por su parte es una herramienta muy eficaz para modificar productos naturales complejos y generar diversidad... [Seguir leyendo]

1. Compuesto con fórmula general (I) :

donde, R1 es hidrógeno o un grupo protector, R2 es hidrógeno, o un grupo protector, o un monosacárido de fórmula (II) ,

o un monosacárido de fórmula (III) ,

o un monosacárido de fórmula (IV) ,

R3 es hidrógeno o un grupo acetilo, R4 es un monosacárido de fórmula (V) , o un monosacárido de fórmula (VI) R5 puede ser seleccionado entre los siguientes sustituyentes:

teniendo en consideración que si R2 es el monosacárido de fórmula (III) o el monosacárido de fórmula (IV) , al me

nos un R1 debe ser un grupo protector; y considerando igualmente que si R2 es hidrógeno y R5 es entonces, al menos un R1 debe ser un grupo protector;

teniendo además en cuenta que la estereoquímica de los carbonos a, byc, así como la de los centros quirales presentes en R5 puede ser R, S, o una mezcla de ambos, y que los sustituyentes de los carbonos d y e pueden estar tanto en posición axial como en ecuatorial.

2. Compuesto, según la reivindicación 1, donde el grupo protector se selecciona entre: un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquilo heterocíclico, un grupo hidroxialquilo, un grupo alquilo halogenado, un grupo alcoxialquilo, un grupo alquenilo, un grupo alquinilo, un grupo arilo, un grupo arilo heterocíclico, un grupo alquilarilo, un grupo éster, un grupo carbonato, un grupo ácido carboxílico, un grupo aldehido, un grupo cetona, un grupo uretano, un grupo sililo, un grupo sulfoxo o una combinación de cualquiera de ellos.

3. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula VII:

4. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula VIII:

5. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula IX:

6. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula X:

7. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XI:

8. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XII:

9. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XIV:

10. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXIII:

11. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXIV:

12. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXV:

13. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXIX:

14. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXX:

15. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXXI:

16. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXXII:

17. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXXIV:

18. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXXVI:

19. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XXXVIII:

20. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XLI:

21. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XLIV:

22. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XLV:

23. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XLVI:

24. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XLVII:

25. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XLVIII:

26. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XLIX:

27. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LI:

28. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LII:

29. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LIII:

30. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LIV:

31. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LV:

32. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LVI:

33. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LVII:

34. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LVIII:

35. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LXI:

36. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LXIX:

37. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula LXXX:

38. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XCII:

39. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XCIII:

40. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XCIV:

41. Compuesto, según la reivindicación 1, caracterizado por la fórmula XCV:

42. Uso de al menos uno los compuestos de las reivindicaciones 1 a 41 para la elaboración de una composición farmacéutica destinada al tratamiento del cáncer, de la enfermedad de Paget o de enfermedades neurológicas.

43. Composición farmacéutica caracterizada por comprender al menos uno de los compuestos de las reivindicaciones1a41y sales farmacéuticamente aceptables.

44. Cepa bacteriana Streptomyces argillaceus ΔAH-W- (pMP3*BII) , caracterizada por tener inactivados los genes mtmA, mtmH y mtmW, así como por poseer un ácido nucleico adicional que codifica enzimas activos para la biosíntesis de azúcares que no están presentes en Streptomyces argillaceus ATCC12956.

45. Cepa bacteriana, según la reivindicación 44, caracterizada por poseer un ácido nucleico adicional contenido en el plásmido pMP3*BII, el cual codifica enzimas activos para la biosíntesis del azúcar D-digitoxosa y sus intermediarios biosintéticos.

46. Procedimiento para obtener la cepa bacteriana de las reivindicaciones 44 ó 45, que comprende la introducción del plásmido pMP3*BII en Streptomyces argillaceus ΔAH-W-, que codifica enzimas activos para la biosíntesis de azúcares que no están presentes en Streptomyces argillaceus ATCC12956.

47. Procedimiento para la obtención de derivados de ácidos aureólicos de acuerdo con la fórmula (I) que comprende:

a. Incubación de una cepa bacteriana de las reivindicaciones 44 ó 45 en un medio de cultivo apropiado; y

b. Aislamiento de derivados de ácidos aureólicos de fórmula (I) del caldo de cultivo.

48. Procedimiento para la obtención de derivados acilados de ácidos aureólicos, que comprende

a. Incubación de la cepa bacteriana Streptomyces griseus ssp. griseus C10GIV en presencia de un ácido aureólico de formula (I) ; y

b. Aislamiento de derivados de ácidos aureólicos de fórmula (I) del caldo de cultivo.

49. Procedimiento para la obtención de derivados acilados de ácidos aureólicos, que comprende reaccionar un ácido aureólico de fórmula (I) con un agente acilante en presencia de una hidrolasa.

50. Procedimiento, según la reivindicación 49, donde la enzima es una lipasa.

51. Procedimiento, según la reivindicación 50, donde la enzima es la fracción A o B de la lipasa Candida antarctica.

52. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 49 a 51, donde la enzima está inmovilizada sobre un soporte.

53. Procedimiento, según la reivindicación 52, donde el soporte sobre el que se inmoviliza la lipasa es una resina epoxiacrílica activada con grupos deca-octilo.

54. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 49 a 53, donde el agente acilante es un éster, anhídrido o carbonato.

55. Procedimiento, según la reivindicación 54, donde el agente acilante se selecciona del grupo que consiste en acetato de vinilo, acetato de trifluoroetilo, cloroacetato de vinilo, propanoato de vinilo, butanoato de vinilo, levulinato de acetonoxima, decanoato de vinilo, dodecanoato de vinilo, benzoato de vinilo, crotonato de vinilo, carbonato de dialilo, carbonato mixto de alilo y oxima, carbonato de vinileno, anhídrido succínico, adipato de vinilo y sorbato de vinilo.

56. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 49 a 55, donde la reacción se realiza empleando como disolvente el propio agente acilante.

57. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 49 a 56, donde la reacción se realiza empleando como disolvente tetrahidrofurano si el agente acilante es sólido o si la solubilidad del ácido aureólico en el agente acilante es baja.

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

Nº solicitud:200930497

ESPAÑA

Fecha de presentación de la solicitud: 23.07.2009

Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional DOCUMENTOS RELEVANTES

2. 28; página 13, líneas 6-19. 1-43, 49-57 X SAITO, T. et al. "Combination chemotherapy for solid tumors using 5-fluorouracil, chromomycin-A3, and prednisolone". Gann 1977, Volumen 68, Número 7, página.

37. 387. (resumen) CAPLUS [en línea] [recuperado el 05.11.2010]. Recuperado de: STN International. Columbus, Ohio (EE.UU.) . Nº de acceso: 1977:561784. 1-43, 49-57 X MENÉNDEZ, N. et al. "Tailoring modification of deoxysugars during biosynthesis of the antitumour drug chromomycin A3 by Streptomyces griseus ssp. griseus". Molecular Microbiology 2004, Volumen 53, Número 3, página.

90. 915. Ver página 904, figura 1A; página 907, figura 3; página 903, resumen. 1-43, 49-57 X KAWANO, T. et al. "Isolation and structures of mono-and di-deacetyl chromomycin antibiotics 02-3D and 02-3G from Streptomyces avellaneus". The Journal of Antibiotics 1990, Volumen XLIII, Número 1, página.

11. 113. Ver página 110, columna 1, párrafo 1; página 112, figura 1. 1-43, 49-57 Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº : Fecha de realización del informe 07.12.2010 Examinador G. Esteban García Página 1/6

INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA

Nº de solicitud:200930497

CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD

C07H15/24 (01.01.2006) A61K31/704 (01.01.2006) C12N1/21 (01.01.2006) C12N15/76 (01.01.2006) C12N9/10 (01.01.2006) A61P35/00 (01.01.2006) A61P19/08 (01.01.2006) A61P19/00 (01.01.2006) A61P25/00 (01.01.2006) C12R1/465 (01.01.2006) C12R1/545 (01.01.2006)

Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)

C07H, A61K, C12N, A61P, C12R

Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)

EPODOC, INVENES, WPI, REGISTRY, CAPLUS, MEDLINE, BIOSIS, XPESP, NPL, EMBASE, PUBMED

Informe del Estado de la Técnica Página 2/6

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud:200930497

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 07.12.2010

Declaración

4. 48 1-43, 49-57 SI NO

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986) .

Base de la Opinión.

La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

Informe del Estado de la Técnica Página 3/6

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud:200930497

1. Documentos considerados.

A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

37. 387 1977 D05 MENÉNDEZ, N. et al. Molecular Microbiology 2004, Vol. 53, Nº 3, pp.

90. 915 2004 D06 KAWANO, T. et al. The Journal of Antibiotics 1990, Vol. XLIII, Nº 1, pp.

11. 113 1990

2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración El objeto de la invención es un compuesto de fórmula general (I) , el uso de dicho compuesto para la elaboración de una preparación farmacéutica destinada al tratamiento de diversas enfermedades, la composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) , una cepa bacteriana de Streptomyces argillaceus iAH-W modificada por el plásmido pMP3*BII, un procedimiento para obtener la cepa bacteriana reivindicada, un procedimiento para la obtención de derivados de fórmula (I) por medio de dicha cepa bacteriana, un procedimiento para la obtención de derivados acilados de ácidos aureólicos a partir de un compuesto de fórmula (I) por medio de una cepa bacteriana Streptomyces griseus ssp. griseus C10GIV y un procedimiento para la obtención de derivados acilados de ácidos aureólicos por reacción de un compuesto de fórmula (I) con un agente acilante en presencia de una hidrolasa.

Novedad (Artículo 6.1 de la Ley de Patentes) :

El documento D01 divulga compuestos derivados de mitramicina con perfiles de glicosilación modificados producidos por cepas recombinantes de Streptomyces argillaceus tipo salvaje y Streptomyces argillaceus M7U1, obtenidas por introducción de diversos plásmidos, algunos de los cuales inducen la formación de compuestos tipo mitramicina, como es el plásmido pMP3*BII (ver página 3, párrafo 3) . Entre estos compuestos, que presentan actividad antitumoral (ver página 1, resumen) , se encuentran los derivados demicarosil-mitramicina (4) , demicarosil-3D- 1-D-digitoxil-mitramicina (6) y deoliosil-demicarosil3C-1-D-olivosil-3C-1-D-digitoxosil-mitramicina (9) (página 11, esquema 1) , que se incluyen en la fórmula general I de la invención (R1 y R3 son H, R2 es H para·4 y un monosacárido de fórmula II para 6 y 9, R4 es un monosacárido de fórmula V y R5 es COCHOHCHOR1CH3; estando el OH del Ce en posición axial en 6 y ecuatorial en 9) .

Por tanto, se considera que el objeto de las reivindicaciones 1, 2, 42 y 43 no es nuevo con respecto a lo divulgado en el documento D01.

El documento D02 divulga compuestos derivados de mitramicina de fórmula general (II) , que cuando R12 y R6 son metilo, R4 y R5 son H, X es C=O, R10 es OH (ó X es CHOH y R10 es C=OCH3) solapa con la fórmula general (I) de la invención, siendo en ésta R4 un monosacárido de fórmula V y R2 H o un monosacárido de fórmula III (ver párrafos [0030]-[0041]) . Estos compuestos son producidos por una cepa mutante de S. argillaceus M7W1, en el que se ha introducido una mutación en el gen mtmW, de forma que el gen mutado no codifica cetorreductasas (ver párrafos [0008]-[0009]) . El documento divulga además composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula general (II) y su uso para el tratamiento de diversas enfermedades, como cáncer, enfermedad de Paget, hipercalcemia e hipercalciuria (ver párrafos [0078]-[0088]) .

En consecuencia, se considera que el objeto de las reivindicaciones 1, 2, 42 y 43 no es nuevo con respecto a lo divulgado en el documento D02.

Informe del Estado de la Técnica Página 4/6

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud:200930497

El documento D03 divulga también compuestos derivados de mitramicina de fórmula general (I) , que cuando R1 (equivalente a OR4 en la fórmula (I) de la invención) es un monosacárido de fórmula II y R2 es un disacárido de fórmula V, VII, XV ó XVI, solapa con la fórmula general (I) de la invención, siendo en ésta R5 COCHOHCHOR1CH3; R2 un monosacárido de fórmula II (en el caso de que R2 en la fórmula I de D01 sea un disacárido de fórmula V ó XV) ó un monosacárido de fórmula III (en el caso de que R2 en la fórmula I de D01 sea un disacárido de fórmula VII ó XVI) (ver página 5, línea 1-página 6, línea 20) . Estos compuestos, que se obtienen a partir de cepas bacterianas por introducción de diversos plásmidos en cepas existentes de Streptomyces argillaceus salvajes o modificadas mediante la inactivación de uno o varios genes responsables de la biosíntesis de mitramicina (ver página 3, líneas 8-14) , son útiles para la preparación de medicamentos para el tratamiento de diversas enfermedades, como cáncer, enfermedad de Paget, hipercalcemia, o hipercalciuria (ver página 11, líneas 16-18; página 12, línea.

2. 28; página 13, líneas 6-19) .

Por tanto, se considera que el objeto de las reivindicaciones 1, 2, 42 y 43 no es nuevo con respecto a lo divulgado en el documento D03.

El documento D04 divulga el hemisuccinato de cromomicina A3 (RN: 23276-33-7) , que responde a la fórmula general (I) de invención, siendo R2 un monosacárido de fórmula IV, R4 es un monosacárido de fórmula VI, R5 es COCHOHCHOR1CH3 y el grupo protector R1 es succinato (COCH2CH2COOH) . Este compuesto, junto a la cromomicina A3, se utiliza en la quimioterapia combinación frente a tumores sólidos.

En consecuencia, se considera que el objeto de las reivindicaciones 1, 2, 42 y 43 no es nuevo con respecto a lo divulgado en el documento D04.

Actividad inventiva (Artículo 8.1 de la Ley de Patentes) :

Las reivindicaciones 3-41 se refieren a una serie de compuestos concretos que se incluyen dentro de la fórmula general (I) . Aunque estos compuestos no se encuentran explícitamente divulgados en ninguno de los documentos citados, sí se recogen en ellos compuestos muy cercanos estructuralmente con la misma actividad farmacológica. La diferencia existente entre los compuestos divulgados en los documentos D01-D04 y los de la invención consiste en la mayoría de los casos en la presencia en estos últimos de diversos grupos acilo que protegen alguno de los grupos hidroxilo existentes en este tipo de compuestos glicosidados.

Teniendo en cuenta que el problema técnico que subyace en la solicitud es la provisión de compuestos alternativos a los ya existentes en el estado de la técnica con actividad para el tratamiento del cáncer, la enfermedad de Paget, enfermedades neurológicas, la hipercalcemia o la hipercalciuria, y a la vista de los compuestos divulgados en cada uno de los documentos D01-D04, se considera que el experto en la materia se plantearía los compuestos de la invención como alternativas evidentes a los compuestos conocidos, algunos de los cuales poseen también grupos hidroxilo protegidos.

En ausencia de resultados comparativos o de algún otro tipo de información respecto a propiedades farmacológicas inesperadas con respecto al estado de la técnica más cercano, las modificaciones estructurales llevadas a cabo por el solicitante, que no afectan al esqueleto central de la molécula en el que parece residir la actividad farmacológica, se consideran arbitrarias y no es posible determinar si el problema técnico mencionado se resuelve o no.

En consecuencia, se considera que el objeto de las reivindicaciones 3-41 carece de actividad inventiva con respecto a lo divulgado en cada uno de los documentos D01-D04 considerados por separado.

El documento D05 divulga compuestos antitumorales derivados de ácidos aureólicos, entre los que se encuentran las cromomicinas A2 y A3 (ver página 904, figura 1A) , que poseen una estructura similar a los compuestos de la invención, en los que R2 es un monosacárido de fórmula IV, R4 es un monosacárido de fórmula VI y R5 es COCHOHCHOHCH3, presentando dos grupos protectores en los anillos A y E (dos acetilos en la cromomicina A3 y un grupo acetilo y un isobutilo en la cromomicina A2) . El documento divulga también los compuestos 1-5 (ver página 907, figura 3) , que se diferencian de los anteriores en su diferente patrón de acilación, y que son producidos por un mutante de Streptomyces griseus en el que se ha inactivado el gen cmmMIII. Cuando estos compuestos demetilados y/ó deacetilados se añaden como sustratos a un cultivo de una cepa bacteriana Streptomyces albus que expresa los genes cmmMIII y/ó cmmA se obtienen las cromomicinas A2 y A3 (ver página 903, resumen) .

Aunque estos compuestos no se incluyen en la fórmula general (I) de la invención, se trata de compuestos estructuralmente relacionados con éstos y con la misma actividad farmacológica, por lo que siguiendo el razonamiento explicado para los documentos D01-D04, se considera igualmente que las reivindicaciones 1-43 carecen de actividad inventiva con respecto a lo divulgado en el documento D05.

Por tanto, se considera que el objeto de las reivindicaciones 1-43 no presenta actividad inventiva a la luz de lo divulgado en el documento D05.

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OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud:200930497

El documento D06 divulga antibióticos antitumorales derivados de ácidos aureólicos, y producidos por Streptomyces avellaneus (página 110, columna 1, párrafo 1) , entre los que se encuentran la cromomicina A3 y sus derivados 02-3D, 02-3G y K-2, que poseen una estructura similar a los compuestos de la invención, en los que R2 es un monosacárido de fórmula IV y R4 es un monosacárido de fórmula VI (ver página 112, figura 1) .

Como en el caso anterior, aunque estos compuestos no se incluyen en la fórmula general (I) de la invención, se trata de compuestos estructuralmente relacionados con éstos y con la misma actividad farmacológica, por lo que siguiendo el razonamiento explicado para los documentos D01-D04, se considera igualmente que las reivindicaciones 1-43 carecen de actividad inventiva con respecto a lo divulgado en el documento D06.

Por tanto, se considera que el objeto de las reivindicaciones 1-43 no tiene actividad inventiva según lo divulgado en el documento D06.

Por otro lado, por lo que respecta a las reivindicacione.

4. 57, que se refieren a un procedimiento para la obtención de derivados acilados de ácidos aureólicos por reacción de un compuesto de fórmula (I) con un agente acilante en presencia de una hidrolasa, se considera que no presentan actividad inventiva según lo divulgado en cualquiera de los documentos D01-D06 considerados por separado, ya que los procedimientos de acilación bioenzimática catalizados por diversas hidrolasas, y en concreto por lipasa de Candida antarctica, son de sobra conocidos en el estado de la técnica, y constituyen una práctica habitual del experto en la materia en este campo de la técnica.

Sin embargo, ninguno de los documentos D01-D06, tomado solo o en combinación, revela ni contiene sugerencia alguna que dirija al experto en la materia hacia la invención recogida en las reivindicaciones independientes 44, que se refiere a una cepa bacteriana de Streptomyces argillaceus iAH-W modificada por el plásmido pMP3*BII; 46, relativa a un procedimiento para obtener dicha cepa; 47, que se refiere a un procedimiento para la obtención de derivados de fórmula (I) por medio de dicha cepa bacteriana la reivindicación; y 48, relativa a un procedimiento para la obtención de derivados acilados de ácidos aureólicos a partir de un compuesto de fórmula (I) por medio de una cepa bacteriana Streptomyces griseus ssp. griseus C10GIV.

En consecuencia, se considera que la invención definida en las reivindicacione.

4. 48 cumple los requisitos de novedad y actividad inventiva, según lo establecido en los Artículos 6.1 y 8.1 de la Ley de Patentes.

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