Cepas de Sphingomonas que producen un rendimiento muy aumentado por esfingano deficiente en PHB ( Diutano).
Una cepa mutante del género Sphingomonas, que contiene:
al menos una modificación genética que elimina sustancialmente o completamente la producciónde polihidroxibutirato (PHB);
al menos una modificación genética que da como resultado un aumento de la producción de unesfingano, que comprende una modificación genética que incrementa la expresión de al menos un gen implicado enla síntesis de esfingano, donde dicho al menos un gen implicado en la síntesis de esfingano se selecciona del grupoque consiste en los genes contenidos en el inserto en los plásmidos pS8 (SEQ ID NO: 1), pX6 (SEQ ID NO: 54), elplásmido contenido en la cepa ATCC PTA-10102, el plásmido contenido en la cepa ATCC PTA-10103, ySphingomonas homólogos del mismo;
por medio de las cuales la cepa mutante del género Sphingomonas puede producir un incrementoen la producción de un esfingano que está esencialmente libre de PHB con respecto a una cepa congénica quecontiene la al menos una modificación genética que elimina sustancialmente o completamente la producción de PHBy que carece de la al menos una modificación genética que da como resultado un incremento de la producción de unesfingano.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2010/053485.
Solicitante: CP Kelco US, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 3100 Cumberland Boulevard Suite 600 Atlanta, GA 30339 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: PATEL,YAMINI,N, HARDING,Nancy E, TALASHEK,Todd, TUTAK,Jeff.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N1/00 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo.
- C12P1/04 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 1/00 Preparación de compuestos o de composiciones, no prevista en los grupos C12P 3/00 - C12P 39/00, utilizando microorganismos o enzimas; Procedimientos generales de preparación de compuestos o composiciones que utilizan microorganismos o enzimas. › utilizando bacterias.
- C12P19/04 C12P […] › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polisacáridos, es decir, compuestos que contienen más de cinco radicales sacárido unidos entre ellos por enlaces glucosídicos.
PDF original: ES-2386946_T1.pdf
Reivindicaciones:
1. Una cepa mutante del género Sphingomonas, que contiene:
al menos una modificación genética que elimina sustancialmente o completamente la producción de polihidroxibutirato (PHB) ;
al menos una modificación genética que da como resultado un aumento de la producción de un esfingano, que comprende una modificación genética que incrementa la expresión de al menos un gen implicado en la síntesis de esfingano, donde dicho al menos un gen implicado en la síntesis de esfingano se selecciona del grupo que consiste en los genes contenidos en el inserto en los plásmidos pS8 (SEQ ID NO: 1) , pX6 (SEQ ID NO: 54) , el plásmido contenido en la cepa ATCC PTA-10102, el plásmido contenido en la cepa ATCC PTA-10103, y Sphingomonas homólogos del mismo;
por medio de las cuales la cepa mutante del género Sphingomonas puede producir un incremento en la producción de un esfingano que está esencialmente libre de PHB con respecto a una cepa congénica que contiene la al menos una modificación genética que elimina sustancialmente o completamente la producción de PHB y que carece de la al menos una modificación genética que da como resultado un incremento de la producción de un esfingano.
2. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 1, donde el esfingano se selecciona del grupo que consiste en diutano, S-7, gelano, S-88, welano, rhamsano, S-198, NW-11, y alcalano.
3. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 2, donde el esfingano es diutano.
4. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 1, donde dicho al menos un gen implicado en la síntesis de esfingano se selecciona del grupo que consiste en los genes dpsS, dpsG, dpsR, dpsQ, dpsI, dpsK, dpsL, dpsJ, dpsF, dpsD, dpsC, dpsE, dpsM, dpsN, atrD, atrB, dpsB, rmlA, rmlC, rmlB, rmlD, orf7, orf6, orf5 de Sphingomonas sp. ATCC 53159, y Sphingomonas homólogos del mismo.
5. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 1, donde dicho Sphingomonas homólogo de al menos un gen implicado en la síntesis de esfingano deriva de una especie de Sphingomonas seleccionada del grupo que consiste en Sphingomonas elodea ATCC 31461, Sphingomonas sp. ATCC 31555, Sphingomonas sp. ATCC 31961, Sphingomonas sp. ATCC 53159, Sphingomonas sp. ATCC 31554, Sphingomonas sp. ATCC 31853, Sphingomonas sp. ATCC 21423, Sphingomonas sp. ATCC 53272, y Sphingomonas sp. FERM-BP2015.
6. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 1, donde la al menos una modificación genética que da como resultado un incremento de la producción de un esfingano se selecciona del grupo que consiste en:
(i) una conexión operable de al menos un gen implicado en la síntesis de esfingano a un promotor ectópico;
(ii) un número incrementado de copias por cromosoma bacteriano de al menos un gen implicado en la síntesis de esfingano; y
(iii) cualquier combinación de los mismos,
donde cada uno de dichos al menos un gen implicados en la síntesis de esfingano están contenidos en un cromosoma bacteriano o un elemento extracromosómico.
7. la cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 1, donde la al menos una modificación genética que elimina sustancialmente o completamente la producción de PHB es una mutación que inactiva o suprime constitutivamente o condicionalmente un gen seleccionado del grupo que consiste en el gen phaA, el gen phaB, y el gen phaC o una combinación de los mismos.
8. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 1, donde la al menos una modificación genética que elimina sustancialmente o completamente la producción de PHB es una inserción o deleción que inactiva el gen phaC.
9. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 3, donde la cepa mutante del género Sphingomonas es capaz de producir diutano a una velocidad de al menos alrededor de 0, 15 g/L/hora o un rendimiento de diutano de al menos alrededor de 12 g/L.
10. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 3, donde la cepa mutante del género Sphingomonas es capaz de producir diutano a una velocidad de al menos alrededor de 0, 2 g/L/hora o un rendimiento de diutano de al menos alrededor de 15 g/L.
11. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 3, donde la cepa mutante del género Sphingomonas aumenta la velocidad de producción o el rendimiento de diutano en al menos alrededor de 50% con
respecto a una cepa congénica que contiene la al menos una modificación genética que elimina sustancialmente o completamente la producción de PHB y que carece de la al menos una modificación genética que da como resultado un incremento de la producción de esfingano.
12. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 3, donde un diutano clarificado producido a partir de la cepa mutante del género Sphingomonas proporciona menos de 0, 5% de residuo en un ensayo de solubilidad y residuo en HCl al 15%, o menos de 0, 1% en peso de PHB cuando se mide utilizando cromatografía de gases.
13. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 3, donde el diutano clarificado producido a partir de la cepa mutante del género Sphingomonas y rehidratado como un litro de diutano al 0, 4% en agua de mar puede pasar a través de un filtro Nuclepore en menos de cinco minutos a una presión de flujo de aproximadamente 20 psi;
donde el filtro Nuclepore tiene un diámetro de aproximadamente 47 mm y tiene un tamaño de poro de aproximadamente 3 micras.
14. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 3, donde el diutano producido a partir de la cepa mutante del género Sphingomonas está esencialmente libre de PHB, y donde el diutano muestra una viscosidad en agua de mar a 3 rpm de al menos alrededor de 40 de lectura del indicador, una viscosidad en agua de mar a 0, 3 rpm de al menos alrededor de 37.000 cp, o una viscosidad a una velocidad de ciazalladura baja en presencia de dispersante de polietilenglicol de al menos alrededor de 3.500 cp.
15. La cepa mutante del género Sphingomonas de la reivindicación 3 que es una cepa de Sphingomonas sp. ATCC 53159 seleccionada del grupo que consiste en las cepas PDD3 / pS8, PDD3 / pX6, PDD6 / pS8, y PDD6 / pX6.
16. Una composición que comprende diutano, donde la composición está esencialmente libre de polihidroxibutirato (PHB) , y donde el diutano muestra una viscosidad en agua de mar a 3 rpm de al menos alrededor de 32 de lectura del indicador, una viscosidad en agua de mar a 0, 3 rpm de al menos alrededor de 24.000 cp, o una viscosidad a una velocidad de ciazalladura baja en presencia de dispersante de polietilengicol de al menos alrededor de 3.000 cp.
17. La composición de la reivindicación 16, donde el diutano muestra una viscosidad en agua de mar a 3 rpm de al menos alrededor de 40 de lectura del indicador, una viscosidad en agua de mar a 0, 3 rpm de al menos alrededor de 37.000 cp, o una viscosidad a una velocidad de ciazalladura baja en presencia de dispersante de polietilengicol de al menos alrededor de 3.500 cp.
18. La composición de la reivindicación 16, donde el diutano muestra una viscosidad en agua de mar a 3 rpm de al menos alrededor de 45 de lectura del indicador, una viscosidad en agua de mar a 0, 3 rpm de al menos alrededor de 40.000 cp, o una viscosidad a una velocidad de ciazalladura baja en presencia de dispersante de polietilengicol de al menos alrededor de 5.500 cp.
19. Un método de elaboración de esfingano que está esencialmente libre de polihidroxibutirato (PHB) , que comprende:
hacer crecer una cepa mutante del género Sphingomonas en condiciones que facilitan la producción de esfingano; y
opcionalmente, aislar el esfingano del cultivo resultante,
donde dicha cepa mutante del género Sphingomonas contiene:
al menos una modificación genética que da como resultando un incremento de la producción de un esfingano; y
al menos una modificación genética que elimina sustancialmente o completamente la producción de PHB.
20. El método de la reivindicación 19, donde el esfingano es diutano.
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