Un anticuerpo aislado, o uno de sus fragmentos de unión a antígeno,

que se une específicamente a IL-22, en el que el anticuerpo, o uno de sus fragmentos de unión a antígeno, comprende:

(a) un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 23 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 24;

(b) un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 59 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 60;

(c) un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 77 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 78; o

(d) un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 95 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 96; y en el que

(i) la constante de asociación del anticuerpo para IL-22 humana es de al menos 1010 M-1 medida mediante análisis de interacción bioespecífica en tiempo real usando tecnología de resonancia de plasmón superficial,

(ii) el anticuerpo bloquea la proliferación mediada por IL-22 de células BaF3 con una CI50 150 pM o menos y en el que las células BaF3 comprenden un receptor de IL-22;o

(iii) el anticuerpo bloquea la secreción mediada por IL-22 de GROa desde células HT29 con una CI50 de 150 pM o menos.

Anticuerpos frente a la IL-22 humana y sus usos Campo técnico La presente invención se refiere a anticuerpos, p. ej., anticuerpos humanos, y sus fragmentos de unión a antígeno que unen interleucina-22 (IL-22) , en particular, IL-22 humana. Los anticuerpos divulgados en el presente documento son útiles en el diagnóstico, prevención y/o tratamiento de trastornos asociados a IL-22, p. ej., trastornos autoinmunitarios, incluyendo artritis.

Antecedentes de la invención

Los antígenos inician respuestas inmunitarias y activan las dos poblaciones más grandes de linfocitos: linfocitos T y linfocitos B. Tras encontrar un antígeno, los linfocitos T proliferan y se diferencian en células efectoras, mientras que los linfocitos B proliferan y se diferencian en células plasmáticas secretoras de anticuerpos. Estas células efectoras segregan y/o responden a las citocinas, que son proteínas pequeña (< aproximadamente 30 kDa) segregadas por linfocitos y otros tipos de células.

La interleucina-22 (IL-22) es una citocina de clase II que muestra homología de secuencia con IL-10. Su expresión está regulada por incremento en linfocitos T por IL-9 o por ConA (Dumoutier L. y col. (2000) Proc Natl Acad Sci EE. UU. 97 (18) : 10144-9) . Estudios adicionales han demostrado que la expresión de ARNm de IL-22 se induce in vivo en respuesta a la administración de LPS y que IL-22 modula parámetros indicadores de una respuesta de fase aguda (Dumoutier L. y col. (2000) ; Pittman D. y col. (2001) Genes and Immunity 2:172) . Además, IL-22 potencia la expresión de péptidos antimicrobianos asociados con la defensa del huésped, incluyendo º-defensina, S100A7, S100A8 y S100A. Wolk y col., Immunity, 21:241-54 (2004) ; Boniface y col., J. Immunol. 174:3695-3702 (2005) ; Liang y col., J. Exp. Med., 203 (10) :2271-79 (2006) . Tomadas conjuntamente, estas observaciones indican que IL-22 juega un papel en la inflamación (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13 (3) : 223-40) .

Se cree que IL-22 se une a un complejo receptor que consiste en IL-22R e IL-10R2, dos miembros de la familia de receptores de citocinas de tipo II (CRF2) (Xie M.H. y col. (2000) J Biol Chem 275 (40) :31335-9; Kotenko S.V. y col. (2001) J Biol Chem 276 (4) : 2725-32) . Ambas cadenas del receptor de IL-22 se expresan constitutivamente en varios órganos. Las líneas celulares epiteliales derivadas de estos órganos responden frente a IL-22 in vitro (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13 (3) : 223-40) . IL-22 induce la activación de las rutas de JAK/STAT3 y de ERK, así como intermedios de otras rutas de MAPK ( (Dumoutier L. y col. (2000) supra; Xie M.H. y col. (2000) supra; Dumoutier L. y col. (2000) J Immunol 164 (4) :1814-9; Kotenko S.V. y col. (2001) J Biol Chem 276 (4) :2725-32; Lejeune, D. y col. (2002) J Biol Chem 277 (37) : 33676-82) . Un anticuerpo monoclonal anti-IL-22 de ratón mejora los síntomas de artritis en un modelo de ratón in vivo (WO 2005/000897) .

Los miembros de CRF2 son receptores para IFNa/º, IFNy, factor de coagulación VIla, IL-10 y las proteínas relacionadas con IL-10 IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, IL-26, así como las citocinas similares a IFN identificadas recientemente, IL-28 e IL-29 (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13 (3) : 223-40; Kotenko, S.V. y col. (2000) Oncogene 19 (21) :2557-65; Sheppard, P. y col. (2003) Nature Immunology 4 (1) :63-8; Kotenko, S.V. y col. (2003) Nature Immunology 4 (1) :69-77) . Además de estos receptores de membrana, la familia CRF2 incluye también una proteína soluble, proteína de unión a IL-22 (IL-22BP) , que es específica para IL-22 y bloquea su actividad (Dumoutier, L. y col. (2001) J Immunol 166 (12) :7090-5; Kotenko, S.V. y col. (2001) J Immunol 166 (12) :7096-103; Xu, W, y col. (2001) Proc Natl Acad Sci USA 98 (17) : 9511-6; Gruenberg, B.H. y col. (2001) Genes & Immunity 2 (6) :329-34; Wei C-C y col. (2003) Genes & Immunity 4: 204-211) . Aunque el complejo receptor de IL-22 es especial para IL-22, cada cadena (es decir, IL-22R e IL-10R2) se comparte por otros miembros de CRF2 para definir receptores funcionales para otras citocinas, incluyendo IL-20, IL-24 (IL-22R/IL-20R2) , IL28, IL29 (IFN-AR1/IL-10R2) e IL-10 (IL-10R1/IL10R2) (Dumoutier, L. y col. (2001) J. Immunol. 167 (7) : 3545-9; Wang, M. y col. (2002) J Biol Chem 277 (9) : 7341-7; Parrish-Novak, J. y col. (2002) J Biol Chem 277 (49) : 47517-23; Kotenko S.V. y col. (1997) EMBO J. 16 (19) : 5894-903; Spencer, S.D. y col. (1998) J Exp Med 187 (4) :571-8) .

Ambas cadenas del receptor CRF2 compuesto son necesarias para la transducción de señales. Una cadena del receptor compuesto se ha definido históricamente como una cadena de unión a ligando (p. ej., IFNyR1) basándose en su alta afinidad por la citocina. La otra cadena (p. ej., IFNyR2) se ha caracterizado como una cadena colaboradora o accesoria y muestra una afinidad mínima por la citocina sola (Kotenko, S.V. y col. (2000) Oncogene 19 (21) :2557-65) . Para IL-22, IL-22R es la subunidad del receptor de alta afinidad, uniéndose IL-10R2 posteriormente al complejo IL22/IL-22R (Li, J. y col. (2004) Int. Immunopharmacol. 4 (5) : 673-708; Logsdon, N. J. y col. (2002) J. Interferon Cytokine Res 22 (11) :1099-1112) .

Sumario de la invención

La presente solicitud proporciona, al menos en parte, agentes de unión a IL-22 tales como anticuerpos y sus fragmentos de unión a antígeno que se unen a interleucina-22 ("IL-22") , en particular, IL-22 humana, con alta afinidad y especificidad. Los anticuerpos y sus fragmentos de unión a antígeno de la presente invención se denominan también en el presente documento "anticuerpos anti-IL22" y "sus fragmentos", respectivamente. En una realización, el anticuerpo o su fragmento reduce, inhibe o antagoniza la actividad de IL-22. Tales anticuerpos pueden usarse para regular respuestas inmunitarias o trastornos asociados con IL-22 antagonizando la actividad de IL-22. En otras realizaciones, el anticuerpo anti-IL-22 puede usarse diagnósticamente o como un anticuerpo dirigido para suministrar un agente terapéutico o citotóxico a una célula que expresa IL-22. Por tanto, los anticuerpos anti-IL-22 de la invención son útiles para el diagnóstico, tratamiento y/o prevención de trastornos asociados con IL-22, p. ej., trastornos autoinmunitarios, p. ej., artritis (incluyendo artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis, artritis psoriásica, artritis asociada a lupus o espondilitis anquilosante) , esclerodermia, lupus eritematoso sistémico, VIH, síndrome de Sjogren, vasculitis, esclerosis múltiple, tiroiditis autoinmunitaria, dermatitis (incluyendo dermatitis atópica y dermatitis eccematosa) , miastenia gravis, enfermedad inflamatoria intestinal (EII) , enfermedad de Crohn, colitis, diabetes mellitus (tipo I) ; afecciones inflamatorias de, p. ej., la piel (p. ej., psoriasis) , el sistema cardiovascular (p. ej., ateroesclerosis) , el sistema nervioso (p. ej., enfermedad de Alzheimer) , el hígado (p. ej., hepatitis) , el riñón (p. ej., nefritis) y el páncreas (p. ej., pancreatitis) ; trastornos cardiovasculares, p. ej., trastornos metabólicos del colesterol, daño por radicales libres de oxígeno, isquemia; trastornos asociados con curación de heridas; trastornos respiratorios, p. ej, asma y EPOC (p. ej., fibrosis quística) ; afecciones inflamatorias agudas (p. ej., endotoxemia, sepsis y septicemia, síndrome de choque tóxico y enfermedad infecciosa) ; rechazo de trasplante y alergia En una realización, el trastorno asociado con IL-22 es un trastorno artrítico, p. ej., un trastorno elegido de uno o más de artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis, artritis psoriásica o espondilitis anquilosante; un trastorno respiratorio (p. ej., asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) ; o una afección inflamatoria de, p. ej., la piel (p. ej., psoriasis) , el sistema cardiovascular (p. ej., ateroesclerosis) , el sistema nervioso (p. ej., enfermedad de Alzheimer) , el hígado (p. ej., hepatitis) , el riñón (p. ej., nefritis) , el páncreas (p. ej., pancreatitis) y órganos gastrointestinales, p. ej., colitis, enfermedad de Crohn e EII.

En consecuencia, en un aspecto, la invención da a conocer un anticuerpo aislado que se une a IL-22, en particular, IL22 humana. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-IL-22 puede tener al menos una de las características siguientes: (1) es un anticuerpo monoclonal o de especificidad única; (2) es un anticuerpo humano; (3) es un anticuerpo generado in vitro ; (4) , es un anticuerpo generado in vivo (p. ej., sistema de ratón transgénico) ; (5) se une a IL-22 con una constante de asociación de al menos 1012 M-1; (6) se une a... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado, o uno de sus fragmentos de unión a antígeno, que se une específicamente a IL-22, en el que el anticuerpo, o uno de sus fragmentos de unión a antígeno, comprende:

(a) un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 23 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 24;

(b) un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 59 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 60;

(c) un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 77 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 78; o

(d) un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 95 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 96;

y en el que (i) la constante de asociación del anticuerpo para IL-22 humana es de al menos 1010 M-1 medida mediante análisis de interacción bioespecífica en tiempo real usando tecnología de resonancia de plasmón superficial, (ii) el anticuerpo bloquea la proliferación mediada por IL-22 de células BaF3 con una CI50 150 pM o menos y en el que las células BaF3 comprenden un receptor de IL-22; o (iii) el anticuerpo bloquea la secreción mediada por IL-22 de GROa desde células HT29 con una CI50 de 150 pM o menos.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1 (a) , en el que:

a) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 131 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 132; o b) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 149 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 150.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1 (b) , en el que:

a) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 617 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 618;

b) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 491 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 492;

c) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 167 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 168;

d) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 185 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 186; o e) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 203 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 204.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1 (c) , en el que:

a) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 527 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 528;

b) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 221 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 222;

c) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 239 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 240;

d) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 257 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 258; o e) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 275 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 276.

5. El anticuerpo de la reivindicación 1 (d) , en el que: a) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 599 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 600;

b) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 581 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 582;

c) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 563 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 564; o d) el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 545 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 546.

6. El anticuerpos de la reivindicación 3, en el que el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 617 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 618.

7. El anticuerpos de la reivindicación 5, en el que el dominio VH comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 599 y el dominio VL comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 600.

8. Un anticuerpo aislado, o uno de sus fragmentos de unión a antígeno, que se une específicamente a IL-22, en el que el anticuerpo, o uno de sus fragmentos de unión a antígeno, comprende (i) un dominio VH que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 113 y un dominio VL que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 114; (ii) un dominio VH que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 509 y un dominio VL que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID Nº : 510; o (iii) un dominio Fv que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en las SEC ID Nº : 151, SEQ ID NO: 187, SEC. ID. Nº : 205, SEC. ID. Nº : 259, SEC. ID. Nº : 277, SEC. ID. Nº : 313, SEC. ID. Nº : 331 o SEQ ID NO: 349.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que:

(a) el anticuerpo se une específicamente a una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica a cualquier secuencia de al menos 100 aminoácidos contiguos de la secuencia descrita en la SEC ID Nº : 1;

(b) el anticuerpo inhibe la unión de IL-22 a IL-22R o un complejo receptor que comprende IL-22R e IL-10R2;

(c) el anticuerpo es humano; o

(d) el anticuerpo es IgG1 o IgG4.

10. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

11. Un ácido nucleico aislado que codifica el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

12. Un vector de expresión que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 11.

13. Una célula huésped transformada con el vector de la reivindicación 12.

14. La célula huésped de la reivindicación 13, en la que la célula huésped es una bacteria, célula de mamífero, célula de levadura, célula vegetal o célula de insecto.

15. Un procedimiento para producir un anticuerpo que se une a IL-22, que comprende cultivar la célula huésped de la reivindicación 14 bajo condiciones que permiten la expresión del anticuerpo y aislar el anticuerpo a partir del cultivo celular.

16. Un kit de diagnóstico que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.