Anticuerpos anti-interferón alfa.

Anticuerpo anti-IFN-a que comprende

(A) por lo menos una cadena ligera o un fragmento de la misma que comprende las siguientes CDR:

(a) L1 de la fórmula RASQSVSTSSYSYMH (SEC ID NO:7);

(b) L2 de la fórmula YASNLES (SEC ID NO:8); y

(c) L3 de la fórmula QHSWGIPRTF (SEC ID NO:9); y

(B) por lo menos una cadena pesada o un fragmento de la misma que comprende las siguientes CDR:

(a) H1 de la fórmula GYTFTEYIIH (SEC ID NO:10);

(b) H2 de la fórmula SINPDYDITNYNQRFKG (SEC ID NO: 11); y

(c) H3 de la fórmula WISDFFDY (SEC ID NO:12);

cuyo anticuerpo se une y neutraliza una actividad biológica de por lo menos los subtipos IFN-a, IFN-a1, IFN-a2, IFN- a4, IFN-a5, IFN-a8, IFN-a10, e IFN-a21.

Anticuerpos anti-interferón alfa Antecedentes de la invención Campo de la invención La presente invención se refiere en general a la generación y caracterización de anticuerpos monoclonales anti-IFNa neutralizantes con una amplia reactividad contra varios subtipos de IFN-a. La presente invención se refiere además a la utilización de dichos anticuerpos anti-IFN-a en el diagnóstico y tratamiento de trastornos asociados con un aumento de la expresión de IFN-a, en particular, trastornos autoinmunes, tales como diabetes mellitus insulinodependiente (IDDM) y lupus eritematoso sistémico. (SLE) .

Descripción de la técnica anterior Interferón-a (IFN-a)

Aunque los interferones se descubrieron inicialmente por su actividad antiviral, posteriores investigaciones han desentrañado una plétora de actividades reguladoras asociadas con estas potentes citoquinas. Los interferones tipo I forman una antigua familia de citoquinas que incluye IFN-a, IFN-º, IFN-o, IFN-w e IFN-1 (Roberts et al., J. Interferon Cytokine Res. 18: 805-816 [1998]) . Son codificadas por genes sin intrones y están ampliamente distribuidas entre los vertebrados. Mientras que el IFN-º es codificado por un único gen en primates y roedores, se han encontrado más de 10 y 15 subtipos diferentes de IFN-a en ratones y hombres, respectivamente. Otros interferones de tipo I son más limitados, por ejemplo, IFN-o en el cerdo, IFN-1 en ganado vacuno y ovejas, e IFN-w en ganado vacuno y humanos. De este modo, los interferones tipo I humanos comprenden múltiples miembros de la familia de IFN-a, y miembros individuales de las familias de IFN-º e IFN-w. Todos los TFN de tipo I parecen unirse a un único receptor que está comprendido de por lo menos dos proteínas que abarcan la membrana. Los interferones de tipo II, por otro lado, están representados por un único miembro, IFN-y, y se unen a un receptor distinto.

Aunque todos los IFN de tipo I, incluyendo IFN-a, muestran actividades antivirales y antiproliferativas y ayudan así al control de infecciones virales y tumores (Lefevre et al., Biochimie 80: 779-788 [1998]; Horton et al., Cancer Res. 59: 4064-4068 [1999]; Alexenko et al., J. Interferon Cytokine Res. 17: 769-779 [1997]; Gresser, J. Leukoc. Biol. 61: 567574 [1997]) , existen varias enfermedades autoinmunes que están asociadas con una mayor expresión de IFNa, de manera destacada la diabetes melitus insulinodependiente y el lupus eritematoso sistémico (SLE) .

La diabetes tipo I, también conocida como diabetes autoinmune o diabetes melitus insulino dependiente (IDDM) , es una enfermedad autoinmune caracterizada por la destrucción selectiva de células º prancreáticas por linfocitos T autorreactivos (Bach, Endocr. Rev. 15: 516-542 [1994]; Castano y Eisenbarth, Annu. Rev. Immunol. 8: 647-679 [1990]; Shehadeh y Lafferty, Diabetes Rev. 1: 141-151 [1993]) . La patología de la IDDM es muy compleja implicando una interacción entre un suceso epigenético (posiblemente una infección viral) , las células º pancreáticas y el sistema inmune en un huésped genéticamente susceptible. Se han implicado un conjunto de citoquinas, incluyendo TFN-a e IFN-y, en la patogénesis de la IDDM en humanos y en modelos animales de la enfermedad (Campbell et al., J. Clin. Invest. 87: 739-742 [1991]; Huang et al., Diabetes 44: 658-664 [1995]; Rhodes y Taylor, Diabetologia 27: 601-603 [1984]) . Por ejemplo, se han descrito la expresión de ARNm de IFN-a pancreático y la presencia de IFN-a inmunoreactivo en células º de pacientes con IDDM (Foulis et al., Lancet 2: 1423-1427 [1987]; Huang et al., [1995] supra; Somoza et al., J. Immunol. 153: 1360-1377 [1994]) . La expresión de IFN-a se ha asociado con la hiperexpresión de antígenos de clase IA del en islotes humanos (Foulis et al., [1987] supra; Somoza et al., [1994] supra) . En dos modelos de roedores de diabetes autoinmunes, la rata DP-BB propensa a la diabetes y los ratones tratados con estreptozotocina, la expresión de ARNm de IFN-a en islotes precede a la insulitis y la diabetes (Huang et al., Immunity 1: 469-478 [1994]) . Además, los ratones transgénicos que albergan una construcción de promotor de insulina humana-IFN-a desarrollan una diabetes hipoinsulinémica acompañada de insulitis (Stewart et al., Science 260: 1942-1946 [1993]) .

Parece que la expresión local de IFN-a por células de islotes pancreáticos en respuesta potenciales estímulos diabetogénicos, tales como virus, puede desencadenar el proceso insulítico. En concordancia con su papel como agente iniciador, se ha observado que el IFN-a indúcela molécula-1 de adhesión intercelular (ICAM-1) y HLA clase IA en células endoteliales de islotes humanos, que pueden contribuir a la infiltración de leucocitos durante la insulitis (Chakrabarti et al., J. Immunol. 157: 522-528 [1996]) . Además, el IFN-a facilita la estimulación de células T mediante la inducción de las moléculas coestimuladoras ICAM-1 y B7.2 en células presentadoras de antígenos en islotes (Chakrabarti et al., Diabetes 45: 1336-1343 [1996]) . Estos estudios indican colectivamente que la expresión temprana de IFN-a por células º puede ser un suceso crítico en el inicio de la diabetes autoinmune. Aunque existen artículos que implica el IFN-y en el desarrollo de IDDM en modelos de roedores, existe una escasa correlación entre la expresión de esta citoquina y la IDDM humana. De este modo, las células que expresan IFN-y se pueden hallar en los islotes de un subgrupo de pacientes humanos seleccionados por una infiltración linfocítica significativa en los islotes. En un grupo de pacientes que no se seleccionaron por este criterio, no hubo una asociación obvia entre la expresión de IFN-y y la IDDM humana.

En base a este nivel incrementado de expresión de IFN-a en pacientes con lupus eritematoso sistémico (SLE) , el IFN-a también se ha implicado en la patogénesis de SLE (Ytterberg y Schnitzer, Arthritis Rheum. 25: 401-406 [1982]; Shi et al., Br. J. Dermatol. 117: 155-159 [1987]) . Es interesante indicar que el IFN-a se utiliza actualmente para el tratamiento del cáncer, así como de infecciones virales, tales como la hepatitis crónica debido a la infección del virus de la hepatitis B o hepatitis C. En concordancia con las observaciones niveles incrementados de IFN-a que desencadena la autoinmunidad, se ha descrito un aumento significativo en la aparición de trastornos autoinmunes, tales como IDDM, SLE y tiroiditis autoinmunes en los pacientes que se someten a terapia con IFN-a. Por ejemplo, se ha observado que un uso prolongado de IFN-a como terapia antiviral induce la IDDM (Waguri et al., Diabetes Res. Clin. Pract. 23: 33-36 [1994]; Fabris et al., J. Hepatol. 28: 514-517 [1998]) o SLE (Garcia-Porrua et al., Clin. Exp. Rheumatol. 16: 107-108 [1998]) . El tratamiento de la infección por el virus de coxsackie B con terapia con IFN-a también está asociada con la inducción de IDDM (Chehadeh et al., J. Infect. Dis. 181: 1929-1939 [2000]) . De manera similar, existen múltiples artículos de casos que documentan la IDDM o SLE en pacientes de cáncer tratados con IFN-a (Ronnblom et al., J. Intern. Med. 227: 207-210 [1990]) .

Terapia con anticuerpos La utilización de anticuerpos monoclonales como agentes terapéuticos ha ganado mayor aceptación con varios anticuerpos monoclonales (mAbs) aprobados para uso humano o en pruebas clínicas en las últimas fases. El primer mAb aprobado por la US Food and Drug Administration (FDA) para el tratamiento del rechazo de aloinjertos fue el anti-CD3 (OKT3) en 1986. Desde entonces, el ritmo del progreso en el campo de los mAbs se ha acelerado considerablemente, particularmente desde 1994 en adelante lo que condujo a la aprobación de siete mAbs adicionales para el tratamiento humano. Estos incluyen ReoPro® para el tratamiento de complicaciones de angioplastia coronaria en 1994, Zenapax® (anti-CD25) para la prevención del rechazo de aloinjertos en 1997, Rituxan® (anti-CD20) para el tratamiento de linfoma de de Hodgkin de células B en 1997, Infliximab® (anti-TNF-a) inicialmente para el tratamiento de la enfermedad de Crohn en 1998 y posteriormente para el tratamiento de la artritis reumatoide en 1999, Simulect® (anti-CD25) para la prevención del rechazo de aloinjertos en 1998, Synagis® (anti-proteína F del virus respiratorio sincitial) para el tratamiento de infecciones respiratorias en 1998, y Herceptin® (anti-HER2/neu) para el tratamiento de tumores de mama metastásicos que sobreexpresan HER2 en 1998 (Glennie y Johnson, Immunol. Today 21: 403-410 [2000]) .

Anticuerpos anti-IFN-a Los estados patológicos que son susceptibles de intervención con mAbs incluyen aquellos en los que existe un nivel patológico de un antígeno diana. Por... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo anti-IFN-a que comprende

(A) por lo menos una cadena ligera o un fragmento de la misma que comprende las siguientes CDR:

(a) L1 de la fórmula RASQSVSTSSYSYMH (SEC ID NO:7) ;

(b) L2 de la fórmula YASNLES (SEC ID NO:8) ; y

(c) L3 de la fórmula QHSWGIPRTF (SEC ID NO:9) ; y

(B) por lo menos una cadena pesada o un fragmento de la misma que comprende las siguientes CDR:

(a) H1 de la fórmula GYTFTEYIIH (SEC ID NO:10) ;

(b) H2 de la fórmula SINPDYDITNYNQRFKG (SEC ID NO: 11) ; y

(c) H3 de la fórmula WISDFFDY (SEC ID NO:12) ;

cuyo anticuerpo se une y neutraliza una actividad biológica de por lo menos los subtipos IFN-a, IFN-a1, IFN-a2, IFN- a4, IFN-a5, IFN-a8, IFN-a10, e IFN-a21.

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, que tiene una estructura homo-tetramérica compuesta de dos pares de cadena pesada y cadena ligera de anticuerpo unidos por puentes disulfuro.

3. Anticuerpo según la reivindicación 1, que es un anticuerpo lineal.

4. Anticuerpo según la reivindicación 1, que es un anticuerpo murino.

5. Anticuerpo según la reivindicación 1, que es un anticuerpo quimérico.

6. Anticuerpo según la reivindicación 1, que es un anticuerpo humanizado.

7. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que es de la clase IgG.

8. Anticuerpo según la reivindicación 7, que tiene un isotipo IgG1, IgG2, IgG3, o IgG4.

9. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que es un fragmento de anticuerpo.

10. Anticuerpo según la reivindicación 9, que es un fragmento Fab.

11. Anticuerpo según la reivindicación 9, que es un fragmento F (ab') 2.

12. Anticuerpo según la reivindicación 9, que es un fragmento Fab'.

13. Anticuerpo según la reivindicación 1, que es un anticuerpo monoclonal anti-IFN-a humano 9F3 producido por un hibridoma que tiene el número de acceso ATCC PTA-2917 o una forma humanizada o quimérica del mismo.

14. Anticuerpo según la reivindicación 5, que comprende

(i) la secuencia de aminoácidos del dominio variable de la cadena ligera quimérica, o la secuencia de aminoácidos completa de la cadena ligera quimérica, codificada por el vector XAIFN-ChLpDR1 que tiene el número de acceso ATCC PTA-2880, y

(ii) la secuencia de aminoácidos del dominio variable de la cadena pesada quimérica, o la secuencia de aminoácidos completa de la cadena pesada quimérica, codificada por el vector XAIFN-ChLpDR2 que tiene el número de acceso ATCC PTA-2883.

15. Molécula de ácido nucleico aislada que codifica un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14.

16. Vector que comprende una molécula de ácido nucleico según la reivindicación 15.

17. Célula huésped transformada con una molécula de ácido nucleico según la reivindicación 15.

18. Método de producción del anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, que comprende cultivar una célula huésped según la reivindicación 17 bajo condiciones en las que la secuencia de ácido nucleico se expresa para producir el anticuerpo.

19. Línea celular de hibridoma que comprende una molécula de ácido nucleico según la reivindicación 15.

20. Línea celular de hibridoma que tiene el número de acceso ATCC PTA-2917.

21. Anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma de la reivindicación 20.

22. Composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva del anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 ó 21 en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.

23. Composición farmacéutica según la reivindicación 22, que comprende una cantidad efectiva del anticuerpo según la reivindicación 13 en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.

24. Método para el diagnóstico de una patología autoinmune o mediada por el sistema inmune asociada con la expresión de IFN-a que comprende poner en contacto una célula aislada con un anticuerpo anti-IFN-a según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 ó 21, y detectar la presencia de IFN-a.

25. Utilización de un anticuerpo anti-IFN-a según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 ó 21 para la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad o patología autoinmune o mediada por el sistema inmune asociada con la expresión de IFN-a en un paciente.

26. Utilización según la reivindicación 25, en la que dicho paciente es un paciente mamífero.

27. Utilización según la reivindicación 26, en la que dicho paciente es humano.

28. Utilización según la reivindicación 27, en la que dicha enfermedad es una enfermedad autoinmune.

29. Utilización según la reivindicación 28, en la que dicha enfermedad se selecciona del grupo que consiste en diabetes melitus insulinodependiente (IDDM) ; lupus eritematoso sistémico (SLE) ; y tiroiditis autoinmune.

30. Anticuerpo anti-IFN-a según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 ó 21 para utilizar en un método de tratamiento de una enfermedad o patología autoinmune o mediada por el sistema inmune asociada con la expresión de IFN-a en un paciente.

31. Anticuerpo anti-IFN-a para utilizar en un método según la reivindicación 30, en el que dicho paciente es un paciente humano.

32. Anticuerpo anti-IFN-a para utilizar en un método según la reivindicación 31, en el que dicho paciente es humano.

33. Anticuerpo anti-IFN-a para utilizar en un método según la reivindicación 30, en el que dicha enfermedad es una enfermedad autoinmune.

34. Anticuerpo anti-IFN-a para utilizar en un método según la reivindicación 33, en el que dicha enfermedad se selecciona del grupo que consiste en diabetes melitus insulinodependiente (IDDM) ; lupus eritematoso sistémico (SLE) ; y tiroiditis autoinmune.

35. Método de detección o determinación de IFN-a en una muestra biológica aislada que comprende mezclar la muestra con un anticuerpo anti-IFN-a según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 ó 21, permitir que el anticuerpo forme el complejo anticuerpo/IFN-a con cualquier subtipo de IFN-a presente en la mezcla, y detectar cualquier complejo anticuerpo/IFN-a presente en la mezcla.

Figura 1 Figura 2 Figura 3 Figura 4

Figura 5A Dominio ligero variable Figura 5B Figura 6 Figura 7