Anticuerpo anti-beta7 humanizado que comprende:

una HVR-L1,

HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDDLLH (SEC ID NO:9), KYASQSIS (SEC ID NO:2), QQGNSLPNT (SEC ID NO:3), GFFITNNYWG (SEC ID NO: 4), GYISYSGSTSYNPSLKS (SEC ID NO:5), y ARTGSSGYFDF (SEC ID NO:64).

Antagonistas anti-beta7 humanizados y utilizaciones para los mismos CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere en general a los campos de la biología molecular y la regulación del factor de crecimiento. Más específicamente, la presente invención se refiere a moduladores de la actividad biológica de integrinas que contienen la subunidad beta7 y las utilizaciones de dichos moduladores.

ANTECEDENTES

Las integrinas son receptores a/º de la superficie celular heterodiméricos implicados en numerosos procesos celulares, desde la adhesión celular hasta la regulación génica. Hynes, R.O., Cell, 69:11-25 (1992) ; y Hemler, M.E., Annu. Rev. Immunol., 8:365-368 (1990) . Varias integrinas han sido implicadas en procesos patológicos, y han generado un amplio interés como dianas potenciales para el descubrimiento de fármacos. (Sharar, S.R. et al., Springer Semin. Immunopathol., 16:359-378 (1995) ) . En el sistema inmune, las integrinas están implicadas en el tráfico, adhesión e infiltración de los leucocitos durante los procesos inflamatorios (Nakajima, H. et al., J. Exp. Med., 179:1145-1154 (1994) ) . La expresión diferencial de las integrinas regula las propiedades adhesivas de las células, y diferentes integrinas están implicadas en diferentes respuestas inflamatorias. Butcher, E.C. et al., Science, 272:6066 (1996) . Las integrinas beta7 (es decir, alfa4beta7 (a4º7) y alfaEbeta7 (aEº7) ) se expresan principalmente en monocitos, linfocitos, eosinófilos, basófilos y macrófagos, pero no en neutrófilos. Elices, M.J. et al., Cell, 60:577-584 (1990) . Los ligandos principales para la integrina a4º7 son las proteínas de superficie endotelial: molécula de adhesión celular adresina de la mucosa (MAdCAM) y molécula de adhesión celular vascular (VCAM) (Makarem, R. et al., J. Biol. Chem., 269:4005-4011 (1994) . La unión de la a4º7 a la MAdCAM y/o VCAM expresada en vénulas de endotelio alto (HEV) en sitios con inflamación da lugar a una firme adhesión del leucocito al endotelio, seguida por la extravasación hacia el tejido inflamado (Chuluyan, H.E. et al., Springer Semin. Immunopathol., 16:391-404 (1995) ) . Un ligando principal para la integrina aEº7 es la proteína de la superficie de linfocitos intraepiteliales (IEL) , Ecadherina, que facilita la adherencia de la célula que transporta aEº7 a los linfocitos epiteliales. Se ha observado que los anticuerpos monoclonales dirigidos contra la a4º7, MAdCAM o VCAM son moduladores eficaces en modelos animales de enfermedades inflamatorias crónicas, tales como el asma (Laberge, S. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 151:822-829 (1995) ) , la artritis reumatoide (RA; Barbadillo, C. et al., Springer Semin. Immunopathol., 16:375379 (1995) ) , la colitis (Viney et al., J. Immunol., 157:2488-2497 (1996) ) y las enfermedades inflamatorias del intestino (IBD; Podalski, D.K., N. Eng. J. Med., 325:928-937 (1991) ; Powrie, F. et al., Ther. Immunol., 2:115-123 (1995) ) . Se ha observado que los anticuerpos monoclonales dirigidos contra la subunidad beta7 se unen a la subunidad de la integrina (Tidswell, M. et al. (1997) J. Immunol. 159:1497-1505) pero como anticuerpos no humanos o no humanizados, carecen de utilidad clínica. Los anticuerpos monoclonales humanizados o fragmentos de unión de antígeno que inhiben la adhesión de leucocitos que expresan una integrina que contiene la cadena º7 han sido propuestos por Wo96/24673.

Existe la necesidad de compuestos altamente específicos, tales como anticuerpos humanizados o fragmentos de unión de los mismos que inhiben la interacción entre la integrina alfa4beta7 y sus ligandos MAdCAM y/o VCAM, así como la interacción entre la integrina alfaEbeta7 y su ligando E-cadherina. Estos compuestos son útiles para el tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas, tales como asma, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, diabetes, complicaciones del transplante de órganos, y trastornos relacionados con aloinjertos.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La invención es tal como se define en las reivindicaciones y, en parte, se basa en la identificación de una variedad de antagonistas de mecanismos biológicos que implican integrinas que contienen beta7, que son procesos generalmente biológicos/celulares que se presenta como una diana terapéutica importante y ventajosa. Dichos mecanismos biológicos incluyen, sin limitación, la inflamación, particularmente los trastornos de inflamación crónica, tales como asma, alergia, IBD, diabetes, transplantes y trastornos de injertos frente a huésped. La invención proporciona composiciones y métodos basados en la interferencia con la adhesión y/o reclutamiento celular mediado por integrina, incluyendo, pero sin limitación, la interferencia con la unión de MAdCAM y VCAM-1 a la parte extracelular de la integrina alfa4beta7 y la interacción de E-cadherina con la interacción de la integrina alfaEbeta7. Los antagonistas de la invención, tal como se describe aquí, proporcionan agentes terapéuticos y de diagnóstico importantes para utilizar en el reconocimiento de condiciones patológicas asociadas con la señalización anormal o no deseada a través de una integrina beta7. Por consiguiente, la presente invención proporciona métodos, y composiciones, relacionadas con la modulación de mecanismos mediados por la integrina beta7, incluyendo la modulación de la unión MAdCAM-alfa4beta7 y el reclutamiento de leucocitos al epitelio gastrointestinal, la unión y la alergia, asma, IBD (tales como la enfermedad de Crohn y al colitis ulcerosa) , diabetes, inflamación asociada con el transplante, trastorno de injerto frente a huésped y/o trastornos de aloinjertos y otras actividades biológicas/fisiológicas mediadas por integrina beta7.

En un aspecto, la presente invención proporciona agentes terapéuticos anti-beta7 adecuados para el uso terapéutico y son capaces de realizar grados variantes de alteración de un mecanismo mediado por la integrina beta7. Por ejemplo, en una realización, la invención proporciona un anticuerpo anti-beta7 humanizado, donde el anticuerpo como fragmento Fab tiene sustancialmente la misma afinidad de unión a la beta7 humana que un fragmento Fab murino que comprende, consiste o consiste esencialmente en una secuencia de dominio variable de cadena ligera y cadena pesada tal como se describe en las figuras 1A y 1B o figuras 9A y 9B. También se describen aquí que no son parte de la invención reivindicada, un anticuerpo anti-beta7 humanizado en el que el anticuerpo como fragmento Fab tiene una afinidad de unión a beta7 humana inferior, por ejemplo, por lo menos 3, por lo menos 5, por lo menos 7 o por lo menos 10 veces inferior, que la de un fragmento Fab murino o de rata que comprende, consiste o consiste esencialmente en una secuencia de dominio variable de cadena ligera y cadena pesada tal como se describe en las figuras 1A y 1B o las secuencias de dominio variable en las figuras 9A y 9B. Una realización de la invención, un anticuerpo anti-beta7 humanizado, o fragmento de unión a beta7 del mismo, de la invención muestra una afinidad monovalente a beta7 humana, cuya afinidad es sustancialmente la misma o superior a la afinidad monovalente a beta7 humana de un anticuerpo que comprende secuencias variables de cadena ligera y cadena pesada representadas en las figuras 1A (SEC ID NO:10) y/o la Figura 1B (SEC ID NO:11) , o la figura 9A (SEC ID NO:12) y/o la figura 9B (SEC ID NO:13) . El anticuerpo o fragmento de unión del mismo que tiene una gran afinidad a beta7 humana muestra una afinidad que es por lo menos 2 veces, por lo menos 5 veces, por lo menso 10 veces, por lo menos 50 veces, por lo menos 100 veces, por lo menos 500 veces, por lo menos 1000 veces, por lo menos 5000 veces o por lo menos 10.000 veces mayor que un anticuerpo que comprende las secuencias de cadena ligera y cadena pesada representadas en la figura 1A (SEC ID NO:10) y/o figura 1B (SEC ID NO:11) , o la figura 9A (SEC ID NO:12) y/o la figura 9B (SEC ID NO:13) .

En otra realización, la invención proporciona un anticuerpo humanizado anti-beta7, en el que el anticuerpo como fragmento Fab tiene una afinidad de unión a beta7 humana que es superior, por ejemplo, por lo menos 3, por lo menos 5, por lo menos 7, por lo menos 9, por lo menos 10, por lo menos 15, por lo menos 20, o por lo menos 100 veces mayor que la de un fragmento Fab de roedor (tal como rata o murino) que comprende, consiste o consiste esencialmente de una secuencia de dominio variable de cadena ligera y cadena pesada representada en la figura 1A y la figura 1B, respectivamente. En una realización, dicho fragmento Fab de roedor tiene la afinidad de unión de un fragmento de FAb que comprende secuencias de dominio variable de un tanciuerpo de... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo anti-beta7 humanizado que comprende:

una HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDDLLH (SEC ID NO:9) , KYASQSIS (SEC ID NO:2) , QQGNSLPNT (SEC ID NO:3) , GFFITNNYWG (SEC ID NO: 4) , GYISYSGSTSYNPSLKS (SEC ID NO:5) , y ARTGSSGYFDF (SEC ID NO:64) .

2. Anticuerpo anti-beta7 humanizado que comprende:

una HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDDLLH (SEC ID NO:9) , KYASQSIS (SEC ID NO:2) , QQGNSLPNT (SEC ID NO:3) , GFFITNNYWG (SEC ID NO: 4) , GYISYSGSTSYNPSLKS (SEC ID NO:5) , y MTGSSGYFDF (SEC ID NO:6) .

3. Anticuerpo anti-beta7 humanizado que comprende:

una HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDDLLH (SEC ID NO:9) , KYASQSIS (SEC ID NO:2) , QQGNSLPNT (SEC ID NO:3) , GFFITNNYWG (SEC ID NO: 4) , GYISYSGSTSYNPSLKS (SEC ID NO:5) , y AMTGSSGYFDF (SEC ID NO:63) .

4. Anticuerpo anti-beta7 humanizado que comprende:

una HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDDLLH (SEC ID NO:9) , KYASQSIS (SEC ID NO:2) , QQGNSLPNT (SEC ID NO:3) , GFFITNNYWG (SEC ID NO: 4) , GYISYSGSTSYNPSLKS (SEC ID NO:5) , y RTGSSGYFDF (SEC ID NO:66) .

5. Anticuerpo anti-beta7 hhumanizado que comprende:

una HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDSLLH (SEC ID NO:7) , SEC ID NO:2, SEC ID NO:3, SEC ID NO:4, SEC ID NO:5, y SEC ID NO:64.

6. Anticuerpo anti-beta7 humanizado que comprende:

una HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDSLLH (SEC ID NO:7) , SEC ID NO:2, SEC ID NO:3, SEC ID NO:4, SEC ID NO:5, y SEC ID NO:6.

7. Anticuerpo anti-beta7 humanizado que comprende:

una HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 and HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDTLLH (SEC ID NO:8) , SEC ID NO:2, SEC ID NO:3, SEC ID NO:4, SEC ID NO:5, y SEC ID NO:64.

8. Anticuerpo anti-beta7 humanizado que comprende:

una HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 and HVR-H3, en la que cada una, en orden, comprende RASESVDTLLH (SEC ID NO:8) , SEC ID NO:2, SEC ID NO:3, SEC ID NO:4, SEC ID NO:5, y SEC ID NO:6.

9. Anticuerpo anti-beta7 humanizado según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo anti-beta7 comprende una o más secuencias de armazón humanas y/o de consenso humana en su dominio variable de cadena pesada y/o ligera.

10. Anticuerpo anti-beta7 humanizado según la reivindicación 9, en el que el anticuerpo anti-beta7 comprende por lo menos una parte o toda la secuencia consenso del armazón del subgrupo I K humano.

11. Anticuerpo anti-beta7 humanizado según la reivindicación 9, en el que el dominio variable de cadena pesada del anticuerpo anti-beta7 comprende una secuencia consenso de armazón del subgrupo III humano.

12. Anticuerpo anti-beta7 humanizado según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en el que el aminoácido en la posición 71 del armazón de cadena pesada se selecciona del grupo de R, A, y T, y/o el aminoácido en la posición 73 del armazón de cadena pesada se selecciona del grupo que consiste en N y T, y/o el aminoácido en la posición 78 de la cadena pesada se selecciona del grupo que consiste en F, A, y L.

13. Anticuerpo anti-beta7 humanizado según la reivindicación 9, en el que el anticuerpo anti-beta7 comprende una variante de la secuencia consenso del armazón de cadena pasada del subgrupo III que comprende una sustitución en una o más de las posiciones 71, 73, 78 y/o 94.

14. Anticuerpo anti-beta7 humanizado según la reivindicación 13, en el que la sustitución es R71A, N73T, L78A y/o

R94M.

15. Anticuerpo anti-beta7 humanizado, o fragmento de unión a beta7 del mismo, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que la afinidad monovalente del anticuerpo o el fragmento de unión a beta7 humana es sustancialmente la misma o superior que la afinidad monovalente de un anticuerpo que comprende las secuencias variables de la cadena ligera y cadena pesada tal como se representan en la SEC ID NO:10 de la figura 1A y/o la SEC ID NO:11 de la figura 1B, o la SEC ID NO:12 de la figura 9A y/o la SEC ID NO:13 de la figura 9B.

16. Anticuerpo humanizado o fragmento de unión del mismo según la reivindicación 15, en el que la afinidad es por lo menos 2 veces, por lo menos 5 veces, por lo menos 10 veces, por lo menos 50 veces, por lo menos 100 veces, por lo menos 500 veces, por lo menos 1000 veces, por lo menos 5000 veces, o por lo menos 10.000 veces mayor que un anticuerpo que comprende las secuencias de cadena ligera y cadena pesada tal como se representan en la SEC ID NO:10 de la figura 1A y la SEC ID NO:11 de la figura 1B, o la SEC ID NO:12 de la figura 9A y la SEC ID NO:13 de la figura 9B.

17. Anticuerpo humanizado o fragmento de unión según la reivindicación 16, en el que la afinidad monovalente del anticuerpo a la beta7 humana es por lo menos 3 veces superior a la afinidad monovalente de un anticuerpo que comprende las secuencias de cadena ligera y cadena pesada representadas en la SEC ID NO:10 de la figura 1A y la SEC ID NO:11 de la figura 1B, o la SEC ID NO:12 de la figura 9A y la SEC ID NO:13 de la figura 9B.

18. Anticuerpo humanizado o fragmento de unión según la reivindicación 15 ó 16, en el que el anticuerpo que comprende las secuencias de cadena ligera y cadena pesada representadas en la SEC ID NO:10 de la figura 1A y la SEC ID NO:11 de la figura 1B, o la SEC ID NO:12 de la figura 9A y la SEC ID NO:13 de la figura 9B, es producido por la línea celular de hibridoma depositada bajo el Número de Acceso ATCC de la American Type Culture Collection con la designación HB-293.

19. Anticuerpo humanizado o fragmento de unión según la reivindicación 15, en el que la afinidad de unión se expresa como un valor Kd.

20. Anticuerpo humanizado o fragmento de unión según la reivindicación 15, en el que la afinidad de unión se mide mediante Biacore™ o un radioinmunoensayo.

21. Anticuerpo anti-beta7 humanizado según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, en el que la afinidad monovalente del anticuerpo a la beta7 humana es sustancialmente la misma o superior a la afinidad monovalente a beta7 humana de un anticuerpo que comprende las secuencias variables de la cadena ligera y cadena pesada tal como se representan en la SEC ID NO:10 de la figura 1A y/o la SEC ID NO:11 de la figura 1B, o la SEC ID NO:12 de la figura 9A y/o la SEC ID NO:13 de la figura 9B.

22. Método de inhibición de la interacción de una subunidad de integrina beta7 humana con una segunda subunidad de integrina y/o un ligando in vitro, mediante el contacto del anticuerpo anti-beta7 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 con la integrina beta7.

23. Método según la reivindicación 22, en el que la segunda subunidad de integrina es la subunidad de integrina alfa4, y en el que el ligando es MAdCAM, VCAM o fibronectina.

24. Método según la reivindicación 23, en el que la subunidad de integrina alfa4 es de humano.

25. Método según la reivindicación 24, en la que el ligando es de humano.

26. Método según la reivindicación 25, en el que la segunda subunidad de integrina es la subunidad de integrina alfaE y en el que el ligando es E-cadherina.

27. Método según la reivindicación 26, en el que la subunidad de integrina alfaE es de humano.

28. Método según la reivindicación 27, en el que el ligando es de humano.

29. Anticuerpo anti-beta7 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, para utilizar en el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de una enfermedad.

30. Anticuerpo anti-beta7 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, para utilizar en el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del hígado, inflamación del SNC, pancreatitis crónica, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjorgen, psoriasis e inflamación de la piel, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, alergia, enfermedad autoinmune, rechazo de transplante, rechazo de injerto renal, enfermedad de injerto frente a huésped, diabetes o cáncer.

31. Utilización de un anticuerpo anti-beta7 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 para la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del hígado, inflamación del SNC, pancreatitis crónica, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjorgen, psoriasis e inflamación de la piel, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, alergia, enfermedad autoinmune, rechazo de transplante, rechazo de injerto renal, enfermedad de injerto frente a huésped, diabetes o cáncer.

32. Anticuerpo anti-beta7 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 para utilizar en un método de inhibición de la interacción de una subunidad de integrina beta7 humana con una segunda subunidad de integrina y/o un ligando mediante el contacto con la integrina beta7, en el que la inhibición reduce o alivia los síntomas de un trastorno seleccionado del grupo que consiste en inflamación, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, diabetes, inflamación resultante del transplante de órganos, trastorno de injerto frente a huésped, e inflamación asociada con trastornos de aloinjertos.

33. Utilización de un anticuerpo anti-beta7 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 para la preparación de un medicamento para utilizar en un método de inhibición de la interacción de una subunidad de integrina beta7 humana con una segunda subunidad de integrina y/o un ligando mediante el contacto con la integrina beta7, en el que la inhibición reduce o alivia los síntomas de un trastorno seleccionado del grupo consiste en inflamación, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, diabetes, inflamación resultante del transplante de órganos, trastorno de injerto frente a huésped, e inflamación asociada con trastornos de aloinjertos.

34. Utilización de una composición que comprende un anticuerpo anti-beta7 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 y un portador farmacéutico para la preparación de un medicamento para utilizar en un método de modulación de la adhesión y/o reclutamiento celular mediada por la integrina beta7 en un mamífero que padece un trastorno; en el que el trastorno se selecciona del grupo que consiste en inflamación, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, diabetes, inflamación resultante del transplante de órganos, trastorno de injerto frente a huésped, e inflamación asociada con trastornos de aloinjertos.

35. Utilización según la reivindicación 34, en la que el mamífero es un ser humano.

36. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 34 ó 35, en la que la composición comprende además un segundo agente biofarmacéutico o agente quimioterapéutico.

37. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 34 a 36, en la que la modulación inhibe la interacción de la integrina beta7 con la integrina alfa4, integrina alfaE, MAdCam, VCAM, E-cadherina, y/o fibronectina.

38. Composición que comprende un anticuerpo anti-beta7 humanizado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 y un portador farmacéuticamente aceptable.

39. Composición que comprende un anticuerpo anti-beta7 según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 y un portador farmacéutico para utilizar en un método de modulación de de la adhesión y/o reclutamiento celular mediada por la integrina beta7 en un mamífero que padece un trastorno; en el que el trastorno se selecciona del grupo que consiste en inflamación, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, diabetes, inflamación resultante del transplante de órganos, trastorno de injerto frente a huésped, e inflamación asociada con trastornos de aloinjertos.

40. Composición según la reivindicación 39, en la que el mamífero es un ser humano.

41. Composición según la reivindicación 39, en la que la composición comprende además un segundo agente biofarmacéutico o agente quimioterapéutico.

42. Composición según cualquiera de las reivindicacione.

3. 41, en la que la modulación inhibe la interacción de la integrina beta7 con la integrina alfa4, integrina alfaE, MAdCam, VCAM, E-cadherina, y/o fibronectina.

Cadena pesada