16836, UN MIEMBRO DE LA FAMILIA DE LA FOSFOLIPASA C HUMANA Y SUS USOS.
Una molécula de ácido nucleico aislada seleccionada entre el grupo consistente en:
a) una molécula de ácido nucleico que consiste en una secuencia de nucleótidos que tienen una identidad de al menos 80% con la longitud entera de la secuencia de nucleótidos de la SEC ID Nº: 1 o la SEC ID Nº: 3;
b) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 2; y
c) una molécula de ácido nucleico que codifica un fragmento de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 2, donde el fragmento comprende al menos 1200 aminoácidos contiguos de la SEC ID Nº:
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2001/010273.
Solicitante: MILLENNIUM PHARMACEUTICALS, INC..
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 75 SIDNEY STREET,CAMBRIDGE, MASSACHUSETTS 02.
Inventor/es: MEYERS,RACHEL,A, HUNTER,JOHN,J.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K16/40 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra enzimas.
- C12N15/55 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Hidrolasas (3).
- C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
- C12N9/16 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › actúan sobre los enlaces éster (3.1).
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N33/50 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).
- G01N33/577 G01N 33/00 […] › en los que interviene anticuerpos monoclonados.
- G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
PDF original: ES-2328448_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
16836, Un miembro de la familia de la fosfolipasa C humana y sus usos.
Solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de Patente Provisional de Estados Unidos con el número 60/193.921 presentada el 31 de marzo de 2000.
Antecedentes de la invención
La fosfolipasa específica de fosfoinosítidos (PI-PLC) media las acciones celulares de una diversidad de hormonas, neurotransmisores y factores de crecimiento. La activación de PI-PLC es una de las primeras respuestas a diversas señales extracelulares. La activación dependiente de agonista de PI-PLC ocasiona la hidrólisis de fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PIP2) de la membrana, generando los segundos mensajeros inositol 1,4,5-trisfosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG). El IP3 se une a receptores intracelulares específicos para inducir la movilización de Ca2+, mientras que el DAG media la activación de una familia de isozimas de la proteína quinasa C. Este proceso catalítico se regula fuertemente por fosforilación reversible y unión de proteínas reguladoras (Rhee et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:15045- 15048).
En mamíferos hay al menos seis isoformas diferentes de PI-PLC, que difieren en su estructura de dominios, regulación y distribución tisular. Basándose en el tamaño molecular, la inmuno-reactividad y la secuencia de aminoácidos, se han clasificado varios subtipos. En general, la identidad de secuencia entre los subtipos es baja, aunque todas las isoformas comparten dos dominios conservados que constituyen el dominio catalítico de PLC, denominado X e Y: la región X abarca aproximadamente 170 restos y la región Y aproximadamente 260. El orden de estas dos regiones es siempre igual (NH2-X-Y-COOH), pero la separación es variable. En los subtipos de PLC-beta, los dominios X e Y están separados por un tramo de 70-120 aminoácidos ricos en Ser, Thr y restos ácidos, mientras que sus 450 restos C-terminales son ricos en restos básicos. En los subtipos de PLC-gamma, hay un inserto de más de 400 restos que contienen un dominio SH3 y dos dominios SH2. Las PLC muestran poca similitud en la región N-terminal de 300 restos que precede al dominio X. Las PI-PLC tienen un dominio C2 C-terminal del dominio catalítico. Se cree que el dominio C2 está implicado en la unión de fosfolípidos dependiente de calcio (Rhee et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:15045-15048).
Compendio de la invención
La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de un nuevo miembro de la familia de fosfolipasa C, denominado en la presente memoria "16836". La secuencia de nucleótidos del ADNc que codifica 16836 se muestra en la SEC ID Nº: 1, y la secuencia de aminoácidos de un polipéptido 16836 se muestra en la SEC ID Nº: 2. Además, las secuencias de nucleótidos de la región codificante se representan en la SEC ID Nº: 3.
Por consiguiente, en un aspecto, la invención se refiere a una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína o polipéptido 16836, por ejemplo, una parte biológicamente activa de la proteína 16836. En una realización preferida, la molécula de ácido nucleico aislada codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 2. En otras realizaciones, la invención proporciona moléculas de ácido nucleico de 16836 aisladas que tienen la secuencia de nucleótidos mostrada en la SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 3, o la secuencia del inserto de ADN del plásmido depositado con el Número de Acceso de la ATCC 1774. En otras realizaciones, la invención proporciona moléculas de ácido nucleico que son sustancialmente idénticas a la secuencia de nucleótidos mostrada en la SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 3, o la secuencia del inserto de ADN del plásmido depositado con el Número de Acceso de la ATCC 1774. En otras realizaciones, la invención proporciona una molécula de ácido nucleico que hibrida en las condiciones rigurosas descritas en la presente memoria con una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 3, o la secuencia del inserto de ADN del plásmido depositado con el Número de Acceso de la ATCC 1774, donde el ácido nucleico codifica una proteína 16836 de longitud completa o un fragmento activo de la misma.
En un aspecto relacionado, la invención proporciona además construcciones de ácido nucleico que incluyen una molécula de ácido nucleico 16836 descrita en la presente memoria. En ciertas realizaciones, las moléculas de ácido nucleico de la invención se unen operativamente a secuencias reguladoras nativas o heterólogas. También se incluyen vectores y células hospedadoras que contienen las moléculas de ácido nucleico 16836 de la invención, por ejemplo, vectores y células hospedadoras adecuadas para producir moléculas de ácido nucleico y polipéptidos 16836.
En otro aspecto relacionado, la invención, proporciona fragmentos de ácido nucleico adecuados como cebadores o sondas de hibridación para la detección de ácidos nucleicos que codifican 16836.
En otro aspecto relacionado, se proporcionan moléculas de ácido nucleico aisladas que son antisentido con respecto a una molécula de ácido nucleico que codifica 16836.
En otro aspecto, la invención se refiere a polipéptidos 16836, y fragmentos biológicamente activos o antigénicos de los mismos que son útiles, por ejemplo, como reactivos o dianas en ensayos aplicables al tratamiento y diagnóstico de trastornos relacionados o mediados por 16836. En otra realización, la invención proporciona polipéptidos 16836 que tienen una actividad 16836. Son polipéptidos preferidos proteínas 16836 que incluyen al menos uno de: un dominio de factor intercambiador de nucleótidos de guanina de Ras (RasGEF), un dominio "X" de fosfolipasa C específico de fosfatidilinositol, un dominio "Y" de fosfolipasa C específico de fosfatidilinositol, un dominio C2 o un dominio de asociación de Ras (RalGDS/AF-6) y, preferiblemente, que tienen actividad 16836, por ejemplo, una actividad 16836 como se describe en la presente memoria.
En otras realizaciones, la invención proporciona polipéptidos 16836, por ejemplo, un polipéptido 16836 que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 2 o la secuencia de aminoácidos codificada por el inserto de ADNc del plásmido depositado con el Número de Acceso de ATCC 1774; una secuencia de aminoácidos que es sustancialmente idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 2 o la secuencia de aminoácidos codificada por el inserto de ADNc del plásmido depositado con el Número de Acceso de ATCC 1774; o una secuencia de aminoácidos codificada por una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que hibrida en las condiciones rigurosas descritas en la presente memoria con una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 3, o la secuencia del inserto de ADN del plásmido depositado por el Número de Acceso de la ATCC 1774, donde el ácido nucleico codifica una proteína 16836 de longitud completa o un fragmento activo de la misma.
En un aspecto relacionado, la invención proporciona además construcciones de ácido nucleico que incluyen una molécula de ácido nucleico de 16836 descrita en la presente memoria.
En un aspecto relacionado, la invención proporciona polipéptidos 16836 o fragmentos unidos operativamente a polipéptidos que no son 16836 para formar proteínas de fusión.
En otro aspecto, la invención se refiere a anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que reaccionan con, o más preferiblemente se unen específicamente a polipéptidos 16836.
En otro aspecto, la invención proporciona métodos para seleccionar agentes, por ejemplo, compuestos, que modulan la expresión o actividad de los polipéptidos o ácidos nucleicos de 16836.
En otro aspecto, la invención proporciona un proceso para modular la expresión o actividad de polipéptidos o ácidos nucleicos de 16836, por ejemplo, usando los compuestos seleccionados. En la descripción también se incluyen los métodos que implican el tratamiento de afecciones relacionadas con una actividad o expresión aberrante de los polipéptidos o ácidos nucleicos de 16836, tales como afecciones que implican una proliferación o diferenciación celular aberrante o deficiente.
En otro aspecto, la invención proporciona métodos para modular la actividad de una célula... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Una molécula de ácido nucleico aislada seleccionada entre el grupo consistente en:
2. La molécula de ácido nucleico aislada de la reivindicación 1, que se selecciona entre el grupo consistente en:
3. La molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, que comprende además secuencias de ácido nucleico de vectores.
4. La molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 que comprende además secuencias de ácido nucleico que codifican un polipéptido heterólogo.
5. Una célula hospedadora que contiene la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1.
6. La célula hospedadora de la reivindicación 5 que es una célula hospedadora de mamífero.
7. Una célula hospedadora de mamífero no humano que contiene la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1.
8. Un polipéptido aislado seleccionado entre el grupo consistente en:
9. El polipéptido aislado de la reivindicación 8 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 2.
10. El polipéptido de la reivindicación 8 que comprende además secuencias de aminoácidos heterólogas.
11. Un anticuerpo o parte inmunológicamente activa del mismo, que se une selectivamente a un polipéptido seleccionado entre el grupo consistente en:
12. El anticuerpo o parte inmunológicamente activa del mismo de la reivindicación 11, donde el anticuerpo está marcado de forma detectable.
13. El anticuerpo o parte inmunológicamente activa del mismo de la reivindicación 12, donde el marcador detectable se selecciona entre el grupo consistente en:
14. El anticuerpo o parte inmunológicamente activa del mismo de la reivindicación 11, donde el anticuerpo se selecciona entre el grupo consistente en:
15. Un método para producir un polipéptido seleccionado entre el grupo consistente en:
16. Un método para detectar la presencia de un polipéptido de la reivindicación 8 en una muestra, que comprende:
17. El método de la reivindicación 16, donde el compuesto que se une al polipéptido es un anticuerpo.
18. Un kit que comprende un anticuerpo que se une selectivamente a un polipéptido de la reivindicación 8 e instrucciones de uso.
19. Un método para detectar la presencia de una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 en una muestra, que comprende las etapas de:
20. El método de la reivindicación 19, donde la muestra comprende moléculas de ARNm y se pone en contacto con una sonda de ácido nucleico.
21. Un kit que comprende una sonda de ácido nucleico o cebador que hibrida selectivamente con una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 e instrucciones de uso.
22. Un método para identificar un compuesto que se une a un polipéptido de la reivindicación 8, que comprende las etapas de:
23. El método de la reivindicación 22, donde la unión del compuesto de ensayo del polipéptido se detecta por un método seleccionado entre el grupo consistente en:
24. Un método para modular la actividad de un polipéptido de la reivindicación 8, que comprende poner en contacto un polipéptido o una célula que expresa un polipéptido de la reivindicación 8 con un anticuerpo que se une al polipéptido en una concentración suficiente para modular la actividad del polipéptido.
25. Un método para identificar un agente que modula la actividad de un polipéptido de la reivindicación 8 que comprende:
26. Uso de un agente que modula la actividad o expresión de un ácido nucleico de la reivindicación 1 o un polipéptido de la reivindicación 8 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de un trastorno de la proliferación o diferenciación celular caracterizado por una actividad o expresión aberrante de un ácido nucleico de la reivindicación 1 o un polipéptido de la reivindicación 8 en un sujeto, comprendiendo el tratamiento la administración al sujeto de una cantidad eficaz del agente que modula la actividad o expresión de un ácido nucleico de la reivindicación 1 o un polipéptido de la reivindicación 8 de tal forma que se mejore o prevenga el trastorno de proliferación o diferenciación celular, donde el agente se selecciona entre el grupo consistente en un polipéptido de la reivindicación 8, una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, un anticuerpo, una ribozima y una molécula antisentido.
27. El uso de la reivindicación 26, donde el trastorno de la proliferación o diferenciación celular es cáncer de pulmón, cáncer de colón o cáncer de mama.
28. Un método in vitro para identificar un agente que modula la actividad o expresión de un polipéptido de la reivindicación 8 o una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, comprendiendo el método:
29. El método de la reivindicación 28, que comprende poner en contacto un polipéptido de la reivindicación 8 con el agente y determinar el efecto del agente sobre la capacidad del polipéptido de catalizar la hidrólisis de fosfatidilinositol, o que comprende poner en contacto un polipéptido de la reivindicación 8 con el agente y determinar el efecto del agente sobre la capacidad del polipéptido de asociarse con una proteína Ras, o que comprende poner en contacto un polipéptido de la reivindicación 8 con el agente y determinar el efecto del agente sobre la capacidad del polipéptido de mediar la actividad de intercambio de nucleótidos de guanina.
30. Un método in vitro para modular la actividad de una célula que expresa un polipéptido de la reivindicación 8 o una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, que comprende poner en contacto la célula con una cantidad de un agente que modula la actividad o expresión de un ácido nucleico de la reivindicación 1 o un polipéptido de la reivindicación 8, de tal forma que se modula la actividad de la célula; donde el agente se selecciona entre el grupo consistente en un polipéptido de la reivindicación 8, una molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, un anticuerpo, una ribozima y una molécula antisentido.
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