Una construccion que comprende: un dominio de union a RTK, al menos un dominio flanqueante y al menos un enlace que conecta el dominio de union a RTK con el al menos un dominio flanqueante;

en la que el dominio de union a RTK comprende una secuencia de aminoacidos que es identica al menos el 90% a una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en: secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de VEGF-A de mamifero;secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de VEGF-B de mamifero; secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de VEGF-C de mamifero; secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de VEGF-D de mamifero; secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de VEGF-E de mamifero; secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de PIGF de mamifero; secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de PDGF-A de mamifero; secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de PDGF-B de mamifero; secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de PDGF-C de mamifero; y secuencias de aminoacidos del dominio de union a RTK de PDGF-D de mamifero; en la que la construccion y el dominio de union a RTK se unen al dominio extracelular de al menos un receptor tirosina-cinasa seleccionado del grupo que consiste en: VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-alfa y PDGFRbeta; y en la que el al menos un dominio flanqueante comprende una secuencia de aminoacidos que es identica al menos el 90% a una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en un propeptido del extremo amino de VEGF-C de mamifero; un propeptido del extremo carboxi de VEGF-C de mamifero; un propeptido del extremo amino de VEGF-D de mamifero; un propeptido del extremo carboxi de VEGF-D de mamifero; un peptido LAP TGF-β1 de mamifero; y fragmentos de los mismos que son eficaces para unir proteinas de la matriz extracelular o proteinas de neuropilina; con la condicion de que cuando el dominio de union a RTK sea identico al menos el 90% a una secuencia de aminoacidos del dominio de union a RTK de VEGF-C, el al menos un dominio flanqueante no sea identico al menos el 90% a un propeptido de VEGF-C;y cuando el dominio de union a RTK sea identico al menos el 90% a una secuencia de aminoacidos del dominio de union a RTK de VEGF-D, el al menos un dominio flanqueante no sea identico al menos el 90% a un pro-peptido de VEGF-D

La presente solicitud reivindica prioridad respecto de la solicitud provisional de EE.UU. nº 60/708.226 presentada el 15 de agosto de 2005.

Campo de la invención

La presente solicitud está dirigida a materiales y procedimientos para promover la angiogénesis.

Antecedentes

La angiogénesis es un proceso fundamental requerido para el crecimiento y el desarrollo normal de tejidos e implica la proliferación de nuevos capilares a partir de vasos sanguíneos preexistentes. La angiogénesis no sólo participa en el desarrollo embrionario y el crecimiento, la reparación y la regeneración de tejido normal, sino que también participa en el ciclo reproductor femenino, el establecimiento y el mantenimiento del embarazo y en la reparación de heridas y fracturas. Además de la angiogénesis que tiene lugar en el individuo sano, los acontecimientos angiogénicos participan en varios procesos patológicos, notablemente el crecimiento de tumores y metástasis, y otras afecciones en las que se aumenta la proliferación de vasos sanguíneos, especialmente del sistema microvascular, tales como retinopatía diabética, psoriasis y artropatías. La inhibición de la angiogénesis es útil en la prevención o el alivio de estos procesos patológicos.

Debido a la función crucial de la angiogénesis en tantos procesos fisiológicos y patológicos, los factores implicados en el control de la angiogénesis se han investigado exhaustivamente. Se han mostrado varios factores de crecimiento que están implicados en la regulación de la angiogénesis; éstos incluyen factores de crecimiento de fibroblastos (FGF), factores de crecimiento derivados de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento α transformante (TGFα) y factor de crecimiento de hepatocitos (HGF). Véase, por ejemplo, Folkman y col., “Angiogenesis”, J. Biol. Chem., 1992 267 10931-10934 para una revisión.

Se ha sugerido que una familia particular de factores de crecimiento específicos de células endoteliales y sus receptores correspondientes es principalmente responsable de la estimulación del crecimiento y diferenciación de células endoteliales, y de ciertas funciones de las células diferenciadas. Estos factores son miembros de la familia PDGF/VEGF y parece que se actúan mediante receptores tirosina-cinasas (RTK).

Hasta la fecha se han identificado varios miembros de la familia de PDGF/VEGF. Éstos incluyen PDGF-A (véase, por ejemplo, nº de acceso de GenBank X06374), PDGF-B (véase, por ejemplo, nº de acceso de GenBank M12783), PDGF-C (publicación internacional nº WO 00/18212), PDGF-D (publicación internacional nº WO 00/027879), VEGF (también conocido como VEGF-A o por la isoforma particular), factor de crecimiento placentario, PIGF (patente de EE.UU. nº 5.919.899), VEGF-B (también conocido como factor relacionado con VEGF (VRF), publicación internacional nº PCT/US96/02597 y el documento WO 96/26736), VEGF-C (patente de EE.UU. nº 6.221.839 y documento WO 98/33917), VEGF-D (también conocido como factor de crecimiento inducido por c-fos (FIGF) (patente de EE.UU. nº 6.235.713, publicación internacional nº WO98/07832), VEGF-E (también conocido como NZ7 VEGF o OV NZ7; publicación internacional nº WO00/025805 y publicación de patente de EE.UU. nº 2003/0113870), NZ2 VEGF (también conocido como OV NZ2; véase, por ejemplo, nº de acceso de GenBank S67520), proteína similar a VEGF D1701 (véase, por ejemplo, nº de acceso de GenBank AF106020; Meyer y col., EMBO J 18:363-374) y proteína similar a VEGF NZ10 (descrita en la solicitud de patente internacional PCT/US99/25869) [Stacker y Achen, Growth Factors 17:1-11 (1999); Neufeld y col., FASEB J 13:9-22 (1999); Ferrara, J Mol Med 77:527-543 (1999)].

Los factores de crecimiento endoteliales vasculares actúan uniéndose a receptores tirosina-cinasas. Se han identificado siete receptores tirosina-cinasas, concretamente Flt-1 (VEGFR-1), KDR/Flk-1 (VEGFR-2), Flt4 (VEGFR3), PDGFR-α, PDGFR-β, Tie y Tek/Tie-2. Todos estos tienen la actividad de tirosina cinasa intrínseca que es necesaria para la transducción de señales. La función específica esencial en la vasculogénesis y la angiogénesis de Flt-1, Flk-1, Tie y Tek/Tie-2 se ha demostrado por mutaciones elegidas como diana que inactivan estos receptores en embriones de ratón. La expresión en exceso de tanto la familia de VEGF/PDGF de factores de crecimiento como de los receptores de VEGF/PDGF puede conducir a desarrollo anormal del sistema vascular (Saaristo y col., FASEB

J. 16:1041-9, 2002; Kubo y col., Proc Natl Acad Sci USA. 99:8868-73, 2002.). La actividad de VEGF/VEGFR también promueve la angiogénesis de nuevas células y tejido en desarrollo, facilitándose así la angiogénesis y la vascularización de células tumorales.

Aunque las moléculas de VEGF anteriormente mencionadas han mostrado alguna promesa con respecto al desarrollo de nuevos vasos sanguíneos y otras propiedades de factores de crecimiento, sigue existiendo la necesidad del desarrollo de soluciones terapéuticas mejoradas para promover la angiogénesis.

Resumen de la invención

La presente invención está dirigida a polinucleótidos y polipéptidos recombinantes de la familia de VEGF/PDGF de factores de crecimiento que se modifican con secuencias flanqueantes para conferir propiedades mejoradas. Los materiales y procedimientos de los polipéptidos y los polinucleótidos para la estimulación de la angiogénesis están entre las realizaciones preferidas de la invención.

La invención se destina a necesidades existentes proporcionando nuevos compuestos, composiciones de materia, materiales, dispositivos y procedimientos para modular procesos tales como angiogénesis, linfangiogénesis y cicatrización, que tienen numerosas aplicaciones terapéuticas y profilácticas.

Un aspecto de la invención es compuestos novedosos, especialmente compuestos proteináceos, con propiedades angiogénicas. Un aspecto de la invención es una construcción quimérica que comprende: un dominio de unión a RTK; al menos un dominio flanqueante heterólogo o dominio CUB; y al menos un enlace que conecta el dominio de unión a RTK con el al menos un dominio flanqueante o dominio CUB; en los que la construcción y el dominio de unión a RTK se unen al dominio extracelular de al menos un receptor tirosina-cinasa seleccionado del grupo que consiste en: VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-alfa y PDGFR-beta. Aquellas construcciones que se unen y estimulan el receptor son útiles como agonistas de receptores. Aquellas construcciones que se unen, pero dejan de estimular el receptor, son útiles como antagonistas de receptores. Como se describe en mayor detalle más adelante, algunas realizaciones de la invención se comportan como pro-agonistas, en tanto que un dominio CUB escindible previene la activación del receptor, pero bajo condiciones apropiadas (por ejemplo, administración o estimulación de una proteasa para escindir el dominio CUB), el dominio CUB se escinde, creando un agonista de receptor. El término “heterólogo” en el contexto usado anteriormente se refiere al dominio flanqueante/CUB que es de una proteína diferente de la del dominio de unión a RTK. Por ejemplo, si el al menos un dominio flanqueante comprende un pro-péptido de VEGF-C, entonces dominios de RTK heterólogos a modo de ejemplo incluyen cualquier miembro de la familia de VEGF/PDGF distinto de VEGF-C (por ejemplo, VEGF-A, -B, o -D; PDGF-A, -B, -C, o -D; o P1GF, pero no VEGF-C).

En ciertas realizaciones a modo de ejemplo, la presente invención es una construcción que comprende un dominio de unión a RTK de receptor tirosina-cinasa, al menos un dominio flanqueante y al menos un enlace que conecta el dominio de unión a RTK con el al menos un dominio flanqueante. El término “construcción” generalmente se refiere a una molécula, compuesto o composición de materia y no pretende ser limitante a una estructura o función. El término “dominio” como se usa en este documento es descriptivo del hecho de que puede usarse una parte de una molécula (que puede ser menos de una molécula completa), y también es descriptivo del hecho de que la propia construcción tiene porciones discretas que contribuyen a la funcionalidad global (actividad biológica) de la construcción. En algunas realizaciones, el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos del dominio de unión a RTK seleccionada del grupo que consiste en: VEGF-A de mamífero, VEGF-B de mamífero, VEGF-C de mamífero, VEGF-D de mamífero, VEGFE de mamífero; secuencias... [Seguir leyendo]

1. Una construcción que comprende:

un dominio de unión a RTK, al menos un dominio flanqueante y al menos un enlace que conecta el dominio de unión a RTK con el al menos un dominio flanqueante;

en la que el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-A de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-B de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-C de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-D de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-E de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de PIGF de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de PDGF-A de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de PDGF-B de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de PDGF-C de mamífero; y secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de PDGF-D de mamífero;

en la que la construcción y el dominio de unión a RTK se unen al dominio extracelular de al menos un receptor tirosina-cinasa seleccionado del grupo que consiste en: VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-alfa y PDGFRbeta; y

en la que el al menos un dominio flanqueante comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en un propéptido del extremo amino de VEGF-C de mamífero; un propéptido del extremo carboxi de VEGF-C de mamífero; un propéptido del extremo amino de VEGF-D de mamífero; un propéptido del extremo carboxi de VEGF-D de mamífero; un péptido LAP TGF-β1 de mamífero; y fragmentos de los mismos que son eficaces para unir proteínas de la matriz extracelular o proteínas de neuropilina;

con la condición de que cuando el dominio de unión a RTK sea idéntico al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-C, el al menos un dominio flanqueante no sea idéntico al menos el 90% a un propéptido de VEGF-C; y cuando el dominio de unión a RTK sea idéntico al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-D, el al menos un dominio flanqueante no sea idéntico al menos el 90% a un pro-péptido de VEGF-D.

2. Una construcción según la reivindicación 1, en la que al menos un dominio flanqueante comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: un amino-pro-péptido de VEGF-C de mamífero; un carboxi-pro-péptido de VEGF-C de mamífero; un amino-pro-péptido de VEGF-D de mamífero; y un carboxi-pro-péptido de VEGF-D de mamífero.

3. Una construcción según la reivindicación 1 o la reivindicación 2 que comprende además un dominio de unión a heparina conectado a la construcción por un enlace.

4. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 que comprende además un dominio CUB conectado a la construcción por un enlace.

5. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que cada uno del al menos un enlace comprende un enlace peptídico.

6. Una construcción según la reivindicación 5, en la que la construcción comprende además un péptido señal.

7. La construcción de la reivindicación 5 ó 6, en la que la construcción comprende además una marca de péptido.

8. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en la que la construcción comprende al menos dos dominios flanqueantes.

9. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en la que la construcción satisface la fórmula:

Fn-L-RTK-L-Fc

en la que Fn comprende un dominio flanqueante que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: un amino-pro-péptido de VEGF-C de mamífero y un amino-pro-péptido de VEGF-D de mamífero;

en la que Fc comprende un dominio flanqueante que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada de un carboxi-pro-péptido de VEGF-C de mamífero y un carboxi-pro-péptido de VEGF-D de mamífero;

en la que RTK comprende el dominio de unión a RTK; y

en la que L comprende el enlace entre el dominio flanqueante y el dominio de unión a RTK.

10. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 5-9, en la que el al menos un dominio flanqueante comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

la secuencia de amino-pro-péptidos de VEGF-C de SEQ ID NO: 46; la secuencia de carboxi-pro-péptidos de VEGF-C de SEQ ID NO: 47; la secuencia de amino-pro-péptidos de VEGF-D de SEQ ID NO: 48; y la secuencia de carboxi-pro-péptidos de VEGF-D de SEQ ID NO: 49.

11. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 5-10,

en la que el polipéptido quimérico se une a VEGFR-1 o VEGFR-2;

en la que el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia seleccionada del grupo que consiste en:

(a) aminoácidos 27 a 147 de la secuencia de aminoácidos de VEGF121 de SEQ ID NO: 4;

(b) aminoácidos 27 a 171 de la secuencia de aminoácidos de VEGF145 de SEQ ID NO: 5;

(c) aminoácidos 27 a 191 de la secuencia de aminoácidos de VEGF165 de SEQ ID NO: 6;

(d) aminoácidos 27 a 215 de la secuencia de aminoácidos de VEGF189 de SEQ ID NO: 7;

(e) aminoácidos 27-232 de la secuencia de aminoácidos de VEGF206 de SEQ ID NO: 3; y

(f) fragmentos de (a) -(e) que se unen a VEGFR-1 o VEGFR-2.

12. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 5-10,

en la que el polipéptido quimérico se une a VEGFR-1 o VEGFR-2;

en la que el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a los aminoácidos 27 a 127 de la secuencia de aminoácidos de VEGF109 de SEQ ID NO: 52.

13. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO 27.

14. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 5-10,

en la que el polipéptido quimérico se une a VEGFR-1 o VEGFR-2; y

en la que el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia seleccionada del grupo que consiste en:

(a) aminoácidos 22 a 188 de la secuencia de aminoácidos de VEGF-B167 de SEQ ID NO: 44;

(b) aminoácidos 22 a 207 de la secuencia de aminoácidos de VEGF-B186 de SEQ ID NO: 45;

(c) aminoácidos 19 a 149 de la secuencia de aminoácidos de PIGF-1 de SEQ ID NO: 9;

(d) aminoácidos 19 a 170 de la secuencia de aminoácidos de PIGF-2 de SEQ ID NO: 42;

(e) aminoácidos 19 a 221 de la secuencia de aminoácidos de PIGF-3 de SEQ ID NO: 43; y

(f) fragmentos de (a) -(e) que se unen a VEGFR-1 o VEGFR-2.

15. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 5-10,

en la que el polipéptido quimérico se une a PDGFR-alfa o PDGFR-beta; y

en la que el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia seleccionada del grupo que consiste en:

(a) aminoácidos 87 a 211 de la secuencia de aminoácidos de PDGF-A de SEQ ID NO: 17;

(b) aminoácidos 82 a 190 de la secuencia de aminoácidos de PDGF-B de SEQ ID NO: 19;

(c) aminoácidos 230 a 345 de la secuencia de aminoácidos de PDGF-C de SEQ ID NO: 21;

(d) aminoácidos 255 a 370 de la secuencia de aminoácidos de PDGF-D de SEQ ID NO: 24; y

(e) fragmentos de (a) -(d) que se unen a PDGFR-alfa o PDGFR-beta.

16. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 5-10,

en la que el polipéptido quimérico se une a VEGFR-3 o VEGFR-2; y

en la que el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia seleccionada del grupo que consiste en:

(a) aminoácidos 103 a 227 de la secuencia de aminoácidos de VEGF-C de SEQ ID NO: 13;

(b) aminoácidos 93 a 201 de la secuencia de aminoácidos de VEGF-D de SEQ ID NO: 15; y

(c) fragmentos de (a) -(b) que se unen a VEGFR-3 o VEGFR-2.

17. Una construcción según la reivindicación 15 que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia seleccionada del grupo que consiste en:

(a) la secuencia de aminoácidos de la construcción CDD de SEQ ID NO 37;

(b) la secuencia de aminoácidos de la construcción CDC de SEQ ID NO: 39; y,

(c) la secuencia de aminoácidos de la construcción DDC de SEQ ID NO: 41.

18. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 1-17, en la que dicha construcción comprende además una secuencia de aminoácidos del dominio CUB unida por un enlace.

19. Una construcción que comprende:

un dominio de unión a RTK, un dominio CUB y al menos un enlace que conecta el dominio de unión a RTK con el dominio CUB;

en la que el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-A de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-B de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-C de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-D de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de VEGF-E de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de PIGF de mamífero; secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de PDGF-A de mamífero; y secuencias de aminoácidos del dominio de unión a RTK de PDGF-B de mamífero; en la que el dominio CUB comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en secuencias de aminoácidos del dominio CUB de PDGF-C y secuencias de aminoácidos del dominio CUB de PDGF; y en la que la construcción y el dominio de unión a RTK se unen al dominio extracelular de al menos un receptor tirosina-cinasa seleccionado del grupo que consiste en: VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFRalfa y PDGFR-beta.

20. La construcción según la reivindicación 19, en la que el dominio CUB está conectado al extremo N del dominio de unión a RTK.

21. La construcción según la reivindicación 19, en la que el dominio CUB está conectado al extremo C del dominio de unión a RTK.

22. La construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 19-21, en la que el dominio CUB comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 53.

23. La construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 19-21, en la que el dominio CUB comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 55.

24. La construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 19-23, en la que el dominio de unión a RTK comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 90% a los aminoácidos 27 a 127 de la secuencia de aminoácidos de VEGF109 de SEQ ID NO: 52.

25. La construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 19-24 que comprende además un dominio de unión a heparina conectado a la construcción por un enlace.

26. Una construcción según una cualquiera de las reivindicaciones 19-25, en la que cada uno de los enlaces comprende un enlace peptídico, por lo que la construcción comprende un polipéptido quimérico.

27. La construcción según la reivindicación 26, en la que el polipéptido quimérico comprende además un péptido señal.

28. La construcción de la reivindicación 27, en la que el polipéptido quimérico comprende además una marca de péptido.

29. La construcción según la reivindicación 24, en la que la construcción comprende una secuencia de aminoácidos idéntica al menos 90% a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 57, 59 y 61.

30. La construcción según la reivindicación 19-29, en la que el dominio CUB está unido al factor de crecimiento

mediante una secuencia de reconocimiento reconocida específicamente por una enzima proteolítica de forma que la enzima proteolítica, si está presente, se escinde en la secuencia de reconocimiento para eliminar el dominio CUB y producir un factor de crecimiento activado.

31. Un dímero que comprende dos polipéptidos quiméricos de una cualquiera de las reivindicaciones 5-15 y 26-30.

32. El dímero de la reivindicación 31, que es un homodímero.

33. El dímero de la reivindicación 32, que es un heterodímero.

34. Una composición que comprende la construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-33 en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

35. Un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica la construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-33, en el que la construcción comprende un polipéptido quimérico.

36. Un polinucleótido según la reivindicación 35, en el que el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido señal fusionado en marco con el polipéptido.

37. Un polinucleótido según la reivindicación 35 ó 36 que comprende además una secuencia promotora que promueve la expresión del polinucleótido en una célula de mamífero.

38. Un polinucleótido según la reivindicación 37, en el que la secuencia promotora comprende un promotor específico de la piel.

39. Un polinucleótido según la reivindicación 38, en el que el promotor se selecciona del grupo que consiste en K14, K5, K6, K16 y promotor del colágeno alfa 1(I).

40. Un polinucleótido según la reivindicación 36, en el que el promotor es un promotor específico de células endoteliales.

41. Un vector que comprende el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 35-40.

42. Un vector de expresión que comprende el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 35-40 ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión.

43. Un vector de expresión de la reivindicación 42, en el que la secuencia de control de la expresión comprende un promotor específico de células endoteliales.

44. Un vector de una cualquiera de las reivindicaciones 41-43 seleccionado del grupo que consiste en vectores adenovíricos deficientes en la replicación, vectores víricos adenoasociados y vectores de lentivirus.

45. Una composición que comprende el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 35-40 y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

46. Una composición que comprende el vector de una cualquiera de las reivindicaciones 41-44 y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

47. Una célula huésped transformada o transfectada con el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 35-40.

48. Una célula huésped transformada o transfectada con el vector de una cualquiera de las reivindicaciones 41-44.

49. Una célula huésped según la reivindicación 48 que expresa el polipéptido codificado por el polinucleótido.

50. Una célula huésped según una cualquiera de las reivindicaciones 47-49 que comprende una célula endotelial o célula precursora endotelial de mamífero.

51. Una composición que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste en: (a) la construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-30; (b) un polinucleótido que codifica (a); (c) un vector de expresión que contiene (b) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y (d) una célula transformada o transfectada con (b) o (c) y que expresa el polipéptido de (a) para uso en un procedimiento de modulación del crecimiento de células endoteliales de mamífero o células precursoras endoteliales de mamífero.

52. Una composición de la reivindicación 51, en la que el sujeto mamífero es un ser humano.

53. Una composición que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste en:

(a) una construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-30;

(b) un polinucleótido que codifica (a);

(c) un vector de expresión que contiene (b) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y

(d) una célula transformada o transfectada con (b) o (c) y que expresa el polipéptido de (a);

en la que la composición se administra en una cantidad eficaz para modular angiogénesis para uso en un procedimiento de modulación de la angiogénesis en un sujeto mamífero.

54. Una composición que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste en:

(a) una construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-30;

(b) un polinucleótido que codifica (a);

(c) un vector de expresión que contiene (b) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y

(d) una célula transformada o transfectada con (b) o (c) y que expresa el polipéptido de (a);

en la que la composición se administra en una cantidad eficaz para modular angiogénesis para uso en un procedimiento de modulación de la linfangiogénesis en un sujeto mamífero

55. Un agente de cicatrización seleccionado del grupo que consiste en:

(a) una construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-30;

(b) un polinucleótido que codifica (a);

(c) un vector de expresión que contiene (b) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y

(d) una célula transformada o transfectada con (b) o (c) y que expresa el polipéptido de (a) para uso en un procedimiento de mejora de la cicatrización de un injerto de piel o colgajo de piel al tejido subyacente de un sujeto mamífero.

56. Un dispositivo médico para mejorar la circulación, cicatrización de medidas o circulación sanguínea, recubierto o impregnado con una composición que comprende un agente angiogénico seleccionado del grupo que consiste en:

(a) una construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-30;

(b) un polinucleótido que codifica (a);

(c) un vector de expresión que contiene (b) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y

(d) una célula transformada o transfectada con (b) o (c) y que expresa el polipéptido de (a).

57. Un parche que comprende un material de almohadilla que tiene una superficie superior y una superficie inferior, un adhesivo sobre la superficie inferior y una composición terapéutica, en el que la composición comprende un agente de cicatrización seleccionado del grupo que consiste en

(a) una construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-30;

(b) un polinucleótido que codifica (a);

(c) un vector de expresión que contiene (b) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y

(d) una célula transformada o transfectada con (b) o (c) y que expresa el polipéptido de (a).

58. Un hilo de sutura quirúrgica recubierto o impregnado con una composición, en el que la composición comprende un agente de cicatrización seleccionado del grupo que consiste en:

(a) una construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 1-30;

(b) un polinucleótido que codifica (a);

(c) un vector de expresión que contiene (b) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y

(d) una célula transformada o transfectada con (b) o (c) y que expresa el polipéptido de (a).

59. Un agente seleccionado del grupo que consiste en: (a) la construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 19-30; (b) el dímero de una cualquiera de las reivindicaciones 31-33; (c) un polinucleótido que codifica (a); (b) un vector de expresión que contiene (c) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y (e) una célula transformada o transfectada con (c) o (d) y que expresa el polipéptido de (a) para uso en un procedimiento para antagonizar en una célula al menos un receptor seleccionado del grupo que consiste en VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-α y PDGFR-β.

60. Un agente seleccionado del grupo que consiste en: (a) la construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 19-30; (b) el dímero de una cualquiera de las reivindicaciones 31-33; (c) un polinucleótido que codifica (a); (b) un vector de expresión que contiene (c) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y (e) una célula transformada o transfectada con (c) o (d) y que expresa el polipéptido de (a) para uso en un procedimiento para bloquear la unión de PDGF-D a PDGFR-α, pero no a PDGFR-β, en una célula cuando están presentes tanto

PDGFR-α como PDGFR-β.

61. Un agente seleccionado del grupo que consiste en: (a) la construcción de una cualquiera de las reivindicaciones 19-30; (b) el dímero de una cualquiera de las reivindicaciones 31-33; (c) un polinucleótido que codifica (a); (b) un vector de expresión que contiene (c) ligado operativamente a una secuencia de control de la expresión; y (e) una

5 célula transformada o transfectada con (c) o (d) y que expresa el polipéptido de (a) para uso en un procedimiento para modular actividades de un receptor de una célula cuyo receptor se une específicamente, a y es activado por, un factor de crecimiento seleccionado del grupo que consiste en PDGF-A, PDGF-B, el dominio de homología con VEGF de PDGF-C, VEGF, VEGF-B, VEGF-C y PIGF, proveyendo la célula de una enzima proteolítica, por medio de lo cual se activa el factor de crecimiento.

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