Una composición inmunogénica acuosa que, después de la administración a un sujeto,

puede inducir una respuesta inmunitaria que es (a) bactericida contra al menos el serogrupo W135 de N. meningitidis y (b) protectora contra enfermedad por H. influenzae de tipo b, en la que la composición comprende: (i) un antígeno de sacárido capsular conjugado del serogrupo W135; y (ii) un antígeno de sacárido capsular conjugado de H. influenzae de tipo b ('Hib'); y en la que el sacárido del serogrupo W135 está conjugado con un toxoide diftérico

Campo técnico

La presente invención se refiere a inmunización contra meningitis bacteriana, y particularmente a inmunización combinada contra meningitis bacteriana producida por múltiples patógenos.

Técnica anterior

La N. meningitidis es un patógeno humano Gram-negativo no móvil que coloniza la faringe y causa meningitis (y, ocasionalmente, septicemia en ausencia de meningitis). Causa tanto enfermedad endémica como epidémica. Tras la introducción de la vacuna conjugada contra Haemophilus influenzae de tipo b (Hib), la N. meningitidis es la principal causa de meningitis bacteriana en EE.UU. Un tercer patógeno responsable de la meningitis bacteriana es Streptococcus pneumoniae, pero ahora está disponible una vacuna eficaz (PrevNar™ [1]). Al igual que la vacuna contra Hib, la vacuna neumocócica se basa en antígenos de sacáridos capsulares conjugados.

Basándose en el polisacárido capsular del organismo se han identificado diversos serogrupos de N. meningitidis que incluyen (A, B, C, H, I, K, L, 29E, W135, X, Y y Z). El serogrupo A es el patógeno casi siempre implicado en laenfermedad epidémica en el África subsahariana. Los serogrupos B y C son responsables de la gran mayoría de los casos en Estados Unidos y en la mayoría de los países desarrollados. Los serogrupos W135 e Y son responsables del resto de los casos en EE.UUU. y países desarrollados. Aunque el polisacárido capsular es un inmunógeno protector eficaz, cada serogrupo requiere un antígeno de sacárido separado, y esta solución no es adecuada para inmunizar contra el serogrupo B. Por tanto, el éxito reciente con vacunas de sacáridos conjugados contra el serogrupo C (Menjugate™ [2], Meningitec™ y NeisVac-C™) no ha tenido impacto sobre la enfermedad producida por los serogrupos A, B, W135 o Y; por el contario, presentan una presión selectiva hacia la emergencia de estos serogrupos como causa principal de enfermedad meningocócica.

Desde hace muchos años se conoce una vacuna tetravalente inyectable de polisacáridos capsulares de los serogrupos A, C, Y y W135 [3,4] y está autorizada para uso humano. Los polisacáridos en esta vacuna están sin conjugar y están presentes a una relación de peso 1:1:1:1 [5] con 50 µg de cada polisacárido purificado. Aunque es eficaz en adolescentes y adultos, induce una mala respuesta inmunitaria y corta duración de la protección y no puede usarse en lactantes [por ejemplo, ref. 6]. Además, las vacunas tienen la desventaja de requerir la reconstitución a partir de formas liofilizadas en el momento de uso.

Una vacuna ha demostrado ser evasiva para el serogrupo B. Se han probado vacunas basadas en vesículas de la membrana externa [por ejemplo, ref. 7], pero la protección está normalmente restringida a la cepa usada para preparar la vacuna.

Por tanto, sigue existiendo la necesidad de una vacuna que proteja contra los serogrupos A, C, W135 e Y meningocócicos en niños, y también una que no requiera reconstitución antes de la administración. Además, sigue existiendo la necesidad de una vacuna que proteja ampliamente contra el serogrupo B.

El documento WO 02/00249 describe una composición de vacuna multivalente, un conjugado del polisacárido capsular de H. influenzae de tipo b y dos o más polisacáridos bacterianos adicionales.

El documento WO 2004/067030 desvela una composición inmunogénica inyectable que comprende sacáridos capsulares de al menos dos de los serogrupos A, C, W 135 e Y de Neisseria meningitidis. Los sacáridos capsulares están conjugadas con proteína(s) portadora(s) y/o son oligosacáridos. En la composición, (i) la composición comprende <50 µg de sacárido meningocócico por dosis y/o (ii) la composición comprende además un antígeno de uno o más del (a) serogrupo B de N. meningitidis; (b) Haemophilus influenzae de tipo b; y/o (c) Streptococcus pneumoniae. Los antígenos de sacáridos en las composiciones están generalmente conjugados con un vehículo.

Divulgación de la invención

La invención satisface todas estas diversas necesidades y se basa en ocho hallazgos separados. Primero, los inventores han encontrado que los sacáridos capsulares conjugados de los serogrupos C, W135 e Y meningocócicos son seguros e inmunogénicos en seres humanos cuando se combinan en una dosis única. Segundo, han encontrado que este efecto es retenido cuando se añade un sacárido capsular conjugado del serogrupo A. Tercero, han encontrado que estos antígenos conjugados pueden combinarse establemente en una dosis acuosa única sin la necesidad de liofilización. Cuarto, han encontrado que puede lograrse la amplia protección contra infección por el serogrupo B usando un número pequeño de antígenos de polipéptidos definidos. Quinto, han encontrado que estos antígenos de polipéptidos pueden combinarse con los antígenos de sacáridos sin pérdida de la eficacia protectora para cualquiera de los cinco serogrupos. Sexto, han encontrado que la eficacia se retiene incluso si se añade un conjugado de Hib. Séptimo, han encontrado que la eficacia de un conjugado del serogrupo W135 se potencia mediante la adición de antígenos de proteínas derivados de una cepa del serogrupo B. Finalmente, han encontrado que la adición de un conjugado de Hib a conjugados meningocócicos potencia la actividad global contra el serogrupo W135 de meningococo.

**(Ver fórmula)**

La invención proporciona la composición inmunogénica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 1-6. La composición puede incluir adicionalmente antígenos de sacáridos capsulares conjugados de los serogrupos C e Y y, opcionalmente, A. Adicionalmente incluye antígenos de polipéptidos del serogrupo B de N. meningitidis.

Los antígenos de sacáridos preferidos son oligosacáridos.

Serogrupos C, W135 e Y

Las técnicas para preparar polisacáridos capsulares a partir de meningococos se conocen desde hace muchos años y normalmente implican un procedimiento que comprende las etapas de precipitación de polisacáridos (por ejemplo, usando un detergente catiónico), fraccionamiento con etanol, extracción en fenol frío (para eliminar la proteína) y ultracentrifugación (para eliminar LPS) [por ejemplo, véase la ref. 8].

Un procedimiento [9] más preferido implica la precipitación de polisacáridos seguido de la solubilización del polisacárido precipitado usando un alcohol inferior. La precipitación puede lograrse usando un detergente catiónico tal como sales de tetrabutilamonio y cetiltrimetilamonio (por ejemplo, las sales de bromuro), o bromuro de hexadimetrina y sales de miristiltrimetilamonio. El bromuro de cetiltrimetilamonio ('CTAB') es particularmente preferido [10]. La solubilización del material precipitado puede lograrse usando un alcohol inferior tal como metanol, propan-1-ol, propan-2-ol, butan-1-ol, butan-2-ol, 2-metil-propan-1-ol, 2-metil-propan-2-ol, dioles, etc., pero el etanol es particularmente adecuado para solubilizar complejos de CTAB-polisacárido. El etanol puede añadirse al polisacárido precipitado dando una concentración de etanol final (basada en el contenido total de etanol y agua) de entre el 50% y el 95%.

Después de la resolubilización, el polisacárido puede tratarse adicionalmente para eliminar los contaminantes. Esto es particularmente importante en situaciones en las que incluso no es aceptable una contaminación menor (por ejemplo, para la producción de vacunas humanas). Esto implicará normalmente una o más etapas de filtración, por ejemplo, puede usarse filtración profunda, filtración a través de carbono activo, filtración por tamaño y/o ultrafiltración.

Una vez se ha filtrado para eliminar los contaminantes, el polisacárido puede precipitarse para el tratamiento y/o procesamiento posteriores. Esto puede lograrse convenientemente intercambiando cationes (por ejemplo, mediante la adición de sales de calcio o de sodio).

Después de la purificación, los sacáridos capsulares están conjugados con proteínas portadoras como se describe más adelante.

Otros procedimientos y procedimientos alternativos para la purificación y conjugación de los sacáridos meningocócicos se desvelan en las referencias 11 y 12.

Como alternativa a la purificación, los sacáridos capsulares de la presente invención pueden obtenerse mediante síntesis total o parcial, por ejemplo, la síntesis de Hib se desvela en la ref. 13 y la síntesis de MenA en la ref. 14.

El sacárido puede estar químicamente modificado, por... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunogénica acuosa que, después de la administración a un sujeto, puede inducir una respuesta inmunitaria que es (a) bactericida contra al menos el serogrupo W135 de N. meningitidis y (b) protectora contra enfermedad por H. influenzae de tipo b, en la que la composición comprende:

(i) un antígeno de sacárido capsular conjugado del serogrupo W135; y

(ii) un antígeno de sacárido capsular conjugado de H. influenzae de tipo b ('Hib'); y en la que el sacárido del serogrupo W135 está conjugado con un toxoide diftérico.

2. Una composición inmunogénica acuosa que, después de la administración a un sujeto, puede inducir una respuesta inmunitaria que es (a) bactericida contra al menos el serogrupo W135 de N. meningitidis y (b) protectora contra enfermedad por H. influenzae de tipo b, en la que la composición comprende:

(i) un antígeno de sacárido capsular conjugado del serogrupo W135; y

(ii) un antígeno de sacárido capsular Hib conjugado; y en la que el sacárido del serogrupo W135 está conjugado con un toxoide tetánico.

3. Una composición inmunogénica acuosa que, después de la administración a un sujeto, puede inducir una respuesta inmunitaria que es (a) bactericida contra al menos el serogrupo W135 de N. meningitidis y (b) protectora contra enfermedad por H. influenzae de tipo b, en la que la composición comprende:

(i) un antígeno de sacárido capsular conjugado del serogrupo W135; y

(ii) un antígeno de sacárido capsular Hib conjugado; y en la que el sacárido del serogrupo W135 está conjugado con una proteína D de H. influenzae.

4. Una composición inmunogénica acuosa que, después de la administración a un sujeto, puede inducir una respuesta inmunitaria que es (a) bactericida contra al menos el serogrupo W135 de N. meningitidis y (b) protectora contra enfermedad por H. influenzae de tipo b, en la que la composición comprende:

(i) un antígeno de sacárido capsular conjugado del serogrupo W135; y

(ii) un antígeno de sacárido capsular Hib conjugado; y en la que el sacárido Hib está conjugado con un toxoide tetánico.

5. Una composición inmunogénica acuosa que, después de la administración a un sujeto, puede inducir una respuesta inmunitaria que es (a) bactericida contra al menos el serogrupo W135 de N. meningitidis y (b) protectora contra enfermedad por H. influenzae de tipo b, en la que la composición comprende:

(i) un antígeno de sacárido capsular conjugado del serogrupo W135; y

(ii) un antígeno de sacárido capsular Hib conjugado; y en la que la composición incluye un adyuvante de fosfato de aluminio.

6. Una composición inmunogénica acuosa que, después de la administración a un sujeto, puede inducir una respuesta inmunitaria que es (a) bactericida contra al menos el serogrupo W135 de N. meningitidis y (b) protectora contra enfermedad por H. influenzae de tipo b, en la que la composición comprende:

(i) un antígeno de sacárido capsular conjugado del serogrupo W135; y

(ii) un antígeno de sacárido capsular Hib conjugado;

y en la que el sacárido del serogrupo W135 está conjugado con un mutante de la toxina diftérica CRM197 y la composición comprende ≤30 µg de sacárido meningocócico por dosis.

7. La composición de cualquier reivindicación precedente que comprende además antígenos de sacáridos capsulares conjugados de los serogrupos C e Y y, opcionalmente, A.

8. La composición de cualquier reivindicación precedente que comprende además uno o más antígenos de polipéptidos del serogrupo B de N. meningitidis.

9. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en la que la composición consiste esencialmente en (i), (ii) y antígenos de sacáridos capsulares conjugados de los serogrupos C e Y y, opcionalmente, A.

10. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que el sacárido del serogrupo W135 tiene un grado de polimerización inferior a 30.

11. La composición de cualquier reivindicación precedente cuando depende de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en la que el sacárido del serogrupo W135 está conjugado con un toxoide diftérico, un toxoide tetánico o un mutante de la toxina diftérica CRM197.

12. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que la misma proteína portadora se usa para todos los serogrupos.

13. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que el sacárido del serogrupo W135 tiene una relación de sacárido:proteína (peso/peso) entre 1:5 y 5:1.

14. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que el sacárido del serogrupo W135 está conjugado mediante un conector.

15. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que el sacárido del serogrupo W135 está conjugado directamente.

16. La composición de cualquier reivindicación precedente cuando depende de una de las reivindicaciones 1-3 ó 5-6, en la que el sacárido Hib está conjugado con mutante de la toxina diftérica CRM197, un toxoide tetánico o un complejo de la membrana externa de N. meningitidis.

17. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que la composición comprende un adyuvante.

18. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que la composición no incluye un adyuvante de hidróxido de aluminio.

19. La composición de cualquier reivindicación precedente cuando depende de una de las reivindicaciones 1-4 ó 6, en la que la composición incluye un adyuvante de fosfato de aluminio.

20. La composición de la reivindicación 5 ó 19, en la que el antígeno Hib está adsorbido a fosfato de aluminio.

21. La composición de la reivindicación 5 ó 19, en la que el antígeno Hib no está adsorbido a fosfato de aluminio.

22. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que el antígeno Hib está inicialmente liofilizado.

23. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que la administración del antígeno Hib produce una concentración de anticuerpo anti-fosfato de polirribosilribitol de ≥0,15 µg/ml.

24. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que los conjugados tienen una relación de sacárido:proteína (peso/peso) de entre 1:5 y 5:1.