Una composición inmunogénica líquida de rotavirus adecuada para administración oral a un lactantehumano,

que comprende un antígeno de rotavirus, un azúcar y un carboxilato, en la que dicha formulación posee unpH de entre aproximadamente un pH de 5, 0 y aproximadamente un pH 8, 0, y comprende fosfato inferior a 1 mM, , en el que dicho carboxilato se deriva de un ácido dicarboxílico y con un promedio de pKa > 4.

Vacuna de rotavirus vivo atenuado para administración oral

Campo técnico

La presente invención se refiere a nuevas formulaciones líquidas de rotavirus que son útiles como composicionesfarmacéuticas y vacunas, al procedimiento para prepararlas y a su uso en la prevención del rotavirus, en particular de enfermedades asociadas con rotavirus humanos.

Antecedentes técnicos La diarrea infecciosa aguda es una causa principal de enfermedad y muerte en muchas zonas del mundo. En lospaíses en desarrollo, el impacto de la enfermedad diarreica es muy importante. Se ha estimado que en Asia, Áfricay Latinoamérica existen entre 3-4 billones de casos de diarrea cada año y, de estos casos, aproximadamente de 510 millones tienen como resultado la muerte (Walsh, J.A. y col.: N. Engl. J. Med., 301:967-974 (1979) ) .

Se ha reconocido que los rotavirus son una de las causas más importantes de diarrea grave en lactantes y niñospequeños (Estes, M.K. Rotaviruses and Their Replication in Fields Virology, Tercera Edición, editado por Fields ycol., Raven Publishers, Filadelfia, 1996) . Se ha estimado que la enfermedad por rotavirus es responsable dealrededor de 600.000 muertes anuales. La enfermedad inducida por rotavirus afecta principalmente a niños de edades comprendidas entre los 6 y los 24 meses, y la prevalencia máxima de la enfermedad suele producirsedurante los meses más fríos en climas templados y durante todo el año en zonas tropicales. Los rotavirus setransmiten típicamente de una persona a otra por la vía orofecal, con un periodo de incubación de aproximadamente1 a aproximadamente 3 días. Al contrario que la infección en el grupo de 6 meses-24 meses de edad, por lo general, los neonatos son asintomáticos o sólo presentan la enfermedad leve. En contraste con la enfermedad grave que se suele encontrar en niños pequeños, la mayoría de los adultos están protegidos como resultado de previasinfecciones por rotavirus, por lo que en la mayoría de los adultos las infecciones son leves o asintomáticas (Offit, P.A. y col. Comp. Ther., 8 (8) :21-28, 1982) .

Los rotavirus son esféricos y su nombre deriva de su característica estructura de cápside de cubierta externa einterna o de doble cubierta. Normalmente, la estructura de la cápside de doble cubierta de un rotavirus rodea una cubierta proteica interna o núcleo que contiene el genoma. El genoma de un rotavirus está compuesto por 11segmentos de ARN bicatenario que codifica al menos 11 proteínas virales distintas. Dos de estas proteínas virales, denominadas VP4 (proteína P) y VP7 (proteína G) son proteínas estructurales dispuestas en el exterior de laestructura de cápside de doble cubierta. La cápside interna del rotavirus presenta una proteína, que es la proteínadel rotavirus denominada VP6. La importancia relativa de estas tres proteínas concretas de los rotavirus a la hora de provocar la respuesta inmunitaria que sigue a la infección por rotavirus todavía no está clara. No obstante, laproteína VP6 determina el antígeno grupo y subgrupo y las proteínas VP4 y VP7 son los determinantes de laespecificidad de serotipo.

Hasta la fecha, se han identificado al menos14 serotipos G de rotavirus y 11 serotipos P de rotavirus (Linhares A.C.& Bresse J.S., Pan. Am. J. Publ. Health 2000, 9, 305-330) . Entre estos, 10 serotipos G y 6 serotipos P se han identificado entre los rotavirus humanos.

La proteína VP7 es una glucoproteína de PM de 38.000 (PM de 34.000 cuando no está glicosilada) que es elproducto de la traducción del segmento genómico 7, 8 ó 9, dependiendo de la cepa. Esta proteína estimula laformación del principal anticuerpo neutralizante tras la infección por rotavirus. La proteína VP4 es una proteína noglicosilada de aproximadamente 88.000 de PM, que es el producto de la traducción del segmento genómico 4. Esta proteína también estimula el anticuerpo neutralizante tras la infección por rotavirus. Dado que las proteínas VP4 yVP7 son las proteínas víricas contra las que están dirigidos los anticuerpos neutralizantes, se cree que son loscandidatos primarios para el desarrollo de vacunas de rotavirus, proporcionando protección contra la enfermedad por rotavirus.

Se sabe que la infección natural por rotavirus durante la primera etapa de la infancia produce inmunidad protectora.

El primer desarrollo de vacunas para prevenir las infecciones por rotavirus comenzó en la década de 1970 tras eldescubrimiento del virus. Inicialmente, se estudiaron las cepas atenuadas de animales y seres humanos, mientrasque los esfuerzos más recientes se han centrado en reagrupados de seres humanos-animales.

El desarrollo de nuevas formulaciones de rotavirus debe satisfacer una serie de requisitos, incluidos la potencialdistribución por todo el mundo y la estabilidad en un amplio abanico de condiciones ambientales y de almacenamiento. En particular, la estabilidad de una formulación, especialmente de una composición farmacéutica ode vacuna, será, en general, mejor a temperaturas inferiores en comparación con temperaturas ambiente o superiores.

En consecuencia un procedimiento de estabilización ha consistido en desarrollar formulaciones vacunales que sepuedan almacenar congeladas (-20°C a -70°C) o, como alternativa, desarrollar vacunas liofilizadas que se puedan conservar durante un periodo de tiempo prolongado a aproximadamente la temperatura de la nevera (2°C a 8°C) .Sin embargo, es un hecho conocido que el procedimiento de liofilización tiene una capacidad limitante y estáasociada con un elevado coste de producción. Además, la administración de las vacunas liofilizadas supone unamanipulación más sofisticada, ya que puede requerir dispositivos más complejos, y por tanto relativamente caros, tales como vacunas en multicámara/viales, con el ingrediente activo en una cámara y el líquido de reconstitución en otra cámara. Las vacunas liofilizadas también están asociadas con un coste más elevado de envío yalmacenamiento. Estas opciones pueden ser inadecuadas para algunos países del mundo en desarrollo, donde eldispositivo de administración debe ser económicamente asequible y donde la disponibilidad de la infraestructurapara la producción y el almacenamiento puede ser inexistente o no fiable.

Dado que los rotavirus convencionalmente se administran por vía oral a los lactantes humanos, esta vía introducevarios retos en las composiciones inmunogénicas de rotavirus.

El rotavirus se inactiva con rapidez en un ambiente ácido, tras la exposición a tampón ácido o a, por ejemplo, jugo gástrico ácido (C. Weiss y H.F. Clark, 1985, J. Gen. Virol., 66, 2725-2730; T. Vesikari y col., 1984, The Lancet, página 700 ; R.H.Foster y A.J.Wagstaff, 1998, BioDrugs Feb: 9 (2) 155-178) . Por tanto, es deseable que las composiciones de rotavirus se formulen de un modo tal que sean estables durante el almacenamiento y tras laadministración al receptor huésped.

Las vacunas de rotavirus están principalmente destinadas a administrarse a bebés, a una edad tan temprana comode 4 semanas. Para esa población será ventajoso un pequeño volumen de dosis de vacuna, tal como un volumen dedosis inferior a 2 ml o incluso inferior a 1, 5. Por tanto, es deseable que las composiciones de rotavirus se formulen en un volumen de dosis pequeño.

Se conocen formulaciones estabilizantes para vacunas víricas líquidas. Por ejemplo en el documento EP 0 065 905 se divulgan composiciones estabilizantes en general adecuadas para una serie de virus tales como los causantesdel sarampión o la gripe, y, en particular se describen soluciones estabilizantes que contienen tampón fosfatoadecuadas para virus vivos atenuados.

El documento WO 02/11540 divulga una formulación de vacuna de rotavirus liofilizada reconstituida que comprendeuna cepa de rotavirus, un azúcar y un carboxilato en un tampón fosfato.

Otras formulaciones estabilizantes se describen en el documento WO 98/13065 y en Clark y col. (Pediatr Infect Dis

J. 2003 Oct; 22 (10) :914-20) . Tales formulaciones también requieren, entre otros constituyentes, la presencia defosfato que actúe como agente tampón para neutralizar la acidez del estómago. Sin embargo, estas formulaciones no son compatibles con los requisitos indicados anteriormente para el desarrollo satisfactorio de una formulación derotavirus, específicamente no son compatibles con un volumen reducido de la dosis de la vacuna que es mejor paraun lactante humano. En particular, el presente inventor ha descubierto que adaptar esta formulación de la técnicaanterior... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunogénica líquida de rotavirus adecuada para administración oral a un lactantehumano, que comprende un antígeno de rotavirus, un azúcar y un carboxilato, en la que dicha formulación posee unpH de entre aproximadamente un pH de 5, 0 y aproximadamente un pH 8, 0, y comprende fosfato inferior a 1 mM, , en el que dicho carboxilato se deriva de un ácido dicarboxílico y con un promedio de pKa > 4.

2. La composición líquida según la reivindicación 1, en la que dicha composición comprende fosfato inferior a 0, 1mM.

3. La composición líquida según la reivindicación 1 ó 2, en la que dicha composición carece de fosfato.

4. La composición líquida según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el pH de dichacomposición está entre aproximadamente un pH 5, 5 y aproximadamente un pH 7, 5.

5. La composición líquida según la reivindicación 4, en la que el pH de dicha composición está entre aproximadamente un pH 6, 0 y aproximadamente un pH 7, 0.

6. La composición líquida según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que dicho carboxilato seselecciona del grupo que consiste en: adipato, malato, succinato, malonato, glutarato, maleato, fumarato, tartarato, ycualquier combinación de dos o más de los mismos.

7. La composición líquida según la reivindicación 6, en la que dicho carboxilato es adipato.

8. La composición líquida según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicho carboxilato estápresente a una concentración de entre aproximadamente 50 mM y aproximadamente 2 M.

9. La composición líquida según la reivindicación 8, en la que dicho carboxilato está presente a una concentración de entre aproximadamente 100 mM y entre aproximadamente 1 M.

10. La composición líquida según la reivindicación 9, en la que dicho carboxilato está presente a una concentración de entre aproximadamente 400 mM y aproximadamente 700 mM.

11. La composición líquida según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que dicho azúcar seselecciona de la lista que consiste en: glicerol, eritrosa, eritriol, xilitol, arabitol, ribosa, xilosa, arabinosa, glucosa, tagalosa, manosa, galactosa, fructosa, inositol, sorbitol, manitol, galactitol, una combinación de glucosa y fructosa, maltosa, soforosa, lactosa, celobiosa, melibiosa, trehalosa, sacarosa, palatinosa, maltulosa, lactulosa, maltitol, lactitol, rafinosa, maltotriosa, melezitosa, celotriosa, ciritol, maltotetraosa, estaquiosa, celotetraosa, maltopentaosa, celopentaosa, maltohexaosa, celohexaosa, oligosacáridos.

12. La composición líquida según la reivindicación 11, en la que dicho azúcar es sacarosa o dextrosa.

13. La composición líquida según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en la que la concentración de dicho azúcar se encuentra entre aproximadamente 1 p/p y aproximadamente 70% p/p.

14. La composición líquida según la reivindicación 13, en la que la concentración de dicho azúcar se encuentraentre aproximadamente 25 p/p y aproximadamente 60% p/p.

15. La composición líquida según la reivindicación 14, en la que la concentración de dicho azúcar es 50% p/p o 55% p/p.

16. La composición líquida según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, que adicionalmente comprende un ácido carboxílico.

17. La composición líquida según la reivindicación 16, en la que dicho ácido carboxílico se selecciona de la listaque consiste en ácido adípico, ácido málico, ácido acético, ácido succínico, ácido carbónico, ácido propiónico, ácidobutírico, ácido malónico, ácido glutárico, ácido maleico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido glucónico, ácido fumárico, ácido tartárico.

18. La composición líquida según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, que además comprende ionesde calcio.

19. La composición líquida según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en la que dicho antígeno derotavirus es un rotavirus vivo, tal como un rotavirus vivo atenuado.

20. La composición líquida según la reivindicación 19, en la que dicho rotavirus vivo atenuado es un rotavirus vivo atenuado humano.

21. La composición líquida según la reivindicación 20, en la que dicho rotavirus vivo atenuado humano se selecciona del grupo que consiste en: cepa HR.

8. 12C2 depositada con número de acceso ATCC VR 2272, suprogenie, derivados reagrupados e inmunológicamente activos de la misma; cepa HRV P43 depositada con número de acceso ECACC 99081301, su progenie, derivados reagrupados e inmunológicamente activos de la misma.

22. La composición líquida según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, en la que dicha composición poseeuna capacidad antiácido de al menos 8 minutos evaluada mediante el análisis de Baby Rosett-Rice.

23. La composición líquida según la reivindicación 22, en la que dicha composición posee una capacidad antiácido de al menos 12 minutos evaluada mediante el análisis de Baby Rosett-Rice.

24. La composición líquida según la reivindicación 22, en la que dicha composición posee una capacidad antiácido de entre 8 y 23 minutos evaluada mediante el análisis de Baby Rosett-Rice.

25. La composición líquida según la reivindicación 24, en la que dicha composición posee una capacidad antiácido de entre 12 y 23 minutos evaluada mediante el análisis de Baby Rosett-Rice.

26. La composición líquida según la reivindicación 23 o la reivindicación 25, en la que dicha composiciónposee una capacidad antiácido de entre 12 y 20 minutos evaluado mediante el análisis de Baby Rosett-Rice.

27. La composición líquida según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26, en la que dicha composición esestable bajo al menos una de las siguientes condiciones: durante 7 días a 37°C, durante un año a 4°C, durante dos años a 4°C.

28. La composición líquida según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, que es una vacuna.

29. La composición líquida según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, en la que dichacomposición se proporciona en un volumen de dosis de entre 0, 2 ml y 2, 0 ml.

30. La composición líquida según la reivindicación 29, en la que dicha composición se proporciona en un volumen de dosis de entre 0, 5 ml y 1, 5 ml.

31. La composición líquida según se reivindica en la reivindicación 30, en la que dicha composición se proporciona en un volumen de dosis de aproximadamente 1, 5 ml.

32. La composición líquida según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31 para su uso enmedicina

33. El uso de un antígeno de rotavirus, un azúcar y un carboxilato en la fabricación de una composicióninmunogénica para el tratamiento o prevención de enfermedades asociadas con rotavirus, en el que dicha composición inmunogénica es como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31.

34. El uso según la reivindicación 33, en el que dicho tratamiento o prevención comprende administrar dosdosis orales de una cantidad segura y eficaz de la composición de rotavirus vivo atenuado humano a un lactante co.

4. 15 semanas de edad en el momento de la dosis 1.

35. El uso según se reivindica en la reivindicación 33 ó 34 para la prevención de la infección por rotavirus enseres humanos.

36. El uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 33 a 35 para la prevención de la gastroenteritis por rotavirus en seres humanos.

37. El uso según se reivindica en la reivindicación 36 para la prevención de la gastroenteritis grave por rotavirusen seres humanos.

38. El uso según se reivindica en la reivindicación 36 ó 37, en el que dicha gastroenteritis o gastroenteritisgrave está causada por una cepa de rotavirus de un serotipo diferente al de la cepa de rotavirus contenida en dichaformulación líquida.

39. El uso según se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 33 a 38 en el que dicha composición seproporciona en un volumen de dosis de entre 0, 2 ml y 2, 0 ml.

40. El uso según se reivindica en la reivindicación 39, en el que dicha composición se proporciona en un volumen de dosis de entre 0, 5 ml y 1, 5 ml.

41. El uso según se reivindica en la reivindicación 39 o la reivindicación 40, en el que dicha composición se proporciona en un volumen de dosis de aproximadamente 1, 5 ml.

42. Un procedimiento para la preparación de una composición líquida de rotavirus según cualquiera de lasreivindicaciones 1 a 31, que comprende mezclar un antígeno de rotavirus, un azúcar y un carboxilato con undiluyente farmacéuticamente aceptable.