UN MÉTODO PARA DIAGNOSTICAR O PRONOSTICAR PATÓGENOS BACTERIANOS RESPIRATORIOS PRINCIPALES EN UN SUJETO.
Un método de diagnóstico y/o de pronóstico de infecciones respiratorias bacterianas en un sujeto,
que comprende las etapas de: (a) llevar a cabo una medida in vitro del nivel de uno o más marcadores en forma de (i) un receptor del activador del plasminógeno de tipo urocinasa (uPAR); (ii) un receptor soluble del activador del plasminógeno de tipo urocinasa (suPAR); y/o (iii) uno o más productos de degradación de (i) o (ii), en una muestra de fluido biológico que procede de un sujeto; y (b) usar el valor obtenido de la medida para evaluar el estado del sujeto
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/DK2002/000341.
Solicitante: Virogates A/S.
Nacionalidad solicitante: Dinamarca.
Dirección: Blokken 45 3460 Birkerød.
Inventor/es: EUGEN-OLSEN,JESPER.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 21 de Mayo de 2002.
Fecha Concesión Europea: 25 de Agosto de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/566 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando.
Clasificación PCT:
- G01N33/53 G01N 33/00 […] › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
- G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.
Clasificación antigua:
- G01N33/53 G01N 33/00 […] › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
- G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
Fragmento de la descripción:
Un método para diagnosticar o pronosticar patógenos bacterianos respiratorios principales en un sujeto.
Campo técnico de la invención
La presente invención se refiere al diagnóstico y/o pronóstico de los principales patógenos bacterianos respiratorios. En particular, se refiere a Streptococcus pneumoniae y Mycobacterium tuberculosis. Más particularmente, se refiere a las medidas de la concentración del receptor del activador de plasminógeno de tipo urocinasa soluble (suPAR) en fluidos biológicos humanos (esputo, fluido cístico, ascitis, suero, plasma, orina) como herramienta para diagnosticar una infección bacteriana respiratoria, así como el pronóstico de la progresión de la enfermedad.
Antecedentes de la invención
El receptor celular para urocinasa (uPAR, CD87) desempeña múltiples funciones en la migración celular, adhesión celular, proteolisis pericelular y remodelación tisular. uPAR es expresado por la mayoría de leucocitos, incluyendo monocitos, macrófagos, neutrófilos y plaquetas. uPAR es un antígeno de la activación en monocitos y células T, y las células T procedentes de individuos infectados con el HIV-1 expresan niveles elevados de uPAR1, 1994. La infección de leucocitos in vitro por HIV-1 provoca el aumento de la expresión en la superficie celular de uPAR, en un proceso que parece estar coordinado temporalmente con el comienzo de la replicación vírica2.
uPAR se puede desprender de la superficie celular generando una forma soluble del receptor (suPAR) que carece del anclaje GPI. El mecanismo de desprendimiento está mal comprendido, pero se puede producir mediante la escisión hidrolítica del anclaje de GPI catalizada por la fosfolipasa D específica de GPI. Se han identificado formas solubles de uPAR (suPAR) en sobrenadantes de cultivos celulares y en diversos fluidos biológicos tales como ascitis tumoral, fluido cístico, suero, plasma y también recientemente en orina3.
Los niveles de suPAR en suero, plasma y orina son elevados en pacientes que sufren diferentes tipos de cáncer4, el síndrome de hemoglobinuria nocturna paroxísmica (PNH)5, y en pacientes con artritis reumatoide6. El nivel plasmático de suPAR es además un marcador de pronóstico para la supervivencia global en pacientes que sufren infección por HIV-17. Dekkers et al., (2000) en Infection and Immunity 68(4): 2156-2160 encuentran que la endotoxina, inyectada en sujetos, induce la expresión de uPAR en monocitos y aumenta la expresión de uPAR en monocitos in vitro. Coleman et al., (2001) en J. Immunology 166: 473-480 encuentran que Borrelia burgdorferi y componentes bacterianos (proteína A de la superficie) aumentan la expresión y liberación de uPAR en monocitos humanos. Florquin et al (2001) en Kidney International 59: 2054-2061, encuentran que los niveles de uPAR en plasma y orina son elevados en pacientes con urosepticemia y endotoxemia. Fause et al., (2000) en J. Neuroimmunology 111: 234-240 encuentran que la lesión asociada con la expresión de uPAR contribuye al menos en parte a la alteración de la berrera hematoencefálica y a la disfunción inmunológica en la patogénesis de la malaria cerebral. Heegaard et al., (1994) en Fibrinolysis 8: 22-30 encuentran un incremento en el nivel de uPAR en células lácteas durante la mastisis. Todd et al., (1985) en J. Immunology 135(6): 3869-3877 encuentran que el nivel de expresión de un antígeno de membrana plasmática (Mo3e) en fagocitos mononucleares está potenciado por la exposición a lipopolisacárido bacteriano. Eugen-Olsen et al., (2002) en Int. J. Lung Disease 6(8): 686-692 encuentran que los niveles de suPAR son elevados en pacientes con tuberculosis. El documento WO 0138871 describe un método para diagnosticar y pronosticar la infección por HIV en un sujeto, que comprende medir un marcador en forma de suPAR, uPAR o un producto de la degradación del mismo en una muestra biológica procedente del sujeto. Juffermans et al., (2001) en Infection and Immunity 69(8): 5182-5185 encuentran que pacientes con tuberculosis tienen mayores niveles de expresión de uPAR monocítico. Garcia-Monco et al., (2002) en J. Neuroimmunology 129: 216-223 encuentran que suPAR está presente en suero y en líquido cerebroespinal de pacientes con meningitis carcinomatosa, trastornos paraneoplásicos e infecciones bacterianas y víricas del sistema nervioso central.
El origen celular de suPAR circulante es desconocido. Muchas células, si no todas, que expresan uPAR también desprenden formas solubles del receptor cuando se cultivan in vitro. Se ha sugerido que la fuente de suPAR sérico en exceso, en pacientes con cáncer, deriva de las células cancerosas y/o macrófagos infiltrantes de tumores, ya que estas células expresan a menudo niveles elevados de uPAR, y experimentos que usan ratones xenoinjertados que poseen tumores humanos han demostrado de hecho que el tejido tumoral libera suPAR a la circulación y orina8.
Sumario de la invención
El problema técnico afrontado por la presente invención es proporcionar un nuevo marcador para diagnosticar y pronosticar patógenos bacterianos respiratorios principales, en particular Streptococcus pneumoniae y Mycobacterium tuberculosis. Un problema técnico adicional afrontado por la presente invención es proporcionar un marcador del mencionado tipo, que es simple y que se puede medir.
La presente invención ha proporcionado una solución a los problemas técnicos anteriores, dirigiéndose la invención a un método para diagnosticar o pronosticar infecciones bacterianas respiratorias principales, provocadas por patógenos, tales como Streptococcus pneumoniae y Mycobacterium tuberculosis, en un sujeto, que comprende las etapas de
La invención se basa en el descubrimiento sorprendente de que uPAR soluble (suPAR) está presente en niveles elevados en suero, plasma y orina de pacientes con dos patógenos bacterianos respiratorios principales, Streptoco- ccus pneumoniae y Mycobacterium tuberculosis, y que el nivel de suPAR es útil como un marcador de diagnóstico. También, el nivel de suPAR en individuos con dos patógenos bacterianos respiratorios principales, Streptococcus pneumoniae y Mycobacterium tuberculosis, es un pronóstico para el desarrollo de la enfermedad y muerte. El nivel de suPAR es un nuevo factor de enorme diagnóstico y pronóstico, incluso en el contexto de otros factores de pronóstico conocidos relacionados con la infección por Streptococcus pneumoniae o Mycobacterium tuberculosis del pulmón.
Además, la presente invención se basa en el reconocimiento de que la cantidad de suPAR se correlaciona con la cantidad de uPAR, y que, por lo tanto, las cantidades de uPAR son igualmente adecuadas como indicadores de diagnóstico y de pronóstico de la infección con tuberculosis.
Una ventaja adicional de la invención es que la medida de suPAR se puede llevar a cabo usando, por ejemplo, una técnica de ELISA simple, o incluso una barrita, por lo tanto puede proporcionar un suplemento muy barato, simple y rápido a las herramientas de pronóstico usadas actualmente para personas infectadas con tuberculosis. De este modo, en países en desarrollo sin la posibilidad financiera de llevar a cabo los ensayos costosos usados en países occidentales, los niveles de suPAR se podrían usar 1) para determinar el estado de la tuberculosis (diagnóstico), 2) para seleccionar pacientes para el tratamiento (pronóstico), y 3) para monitorizar el progreso del tratamiento.
Además, la presente invención implica la ventaja de que mientras que los niveles de suPAR se pueden medir de forma muy simple, usando por ejemplo una muestra de orina o muestra de esputo, que es fácil de obtener, los ensayos convencionales de diagnóstico y pronóstico para por ejemplo tuberculosis son inciertos, complejos e implican, por ejemplo, el crecimiento en cultivo de esputo,...
Reivindicaciones:
1. Un método de diagnóstico y/o de pronóstico de infecciones respiratorias bacterianas en un sujeto, que comprende las etapas de:
2. Un método según la reivindicación 1, en el que la infección respiratoria bacteriana está provocada por los patógenos Streptococcus pneumoniae o Micobacterium tuberculosis.
3. Un método de pronóstico de infecciones respiratorias bacterianas en un sujeto según la reivindicación 2, en el que la infección respiratoria bacteriana es una bacteriemia por Streptococcus pneumoniae, en el que la etapa a) se efectúa usando ELISA, el marcador es suPAR, y la muestra de fluido biológico es plasma.
4. Un método según la reivindicación 1 o 2, en el que la muestra de fluido biológico es una muestra de orina, y en el que la medida del marcador se correlaciona con la concentración total de la muestra.
5. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 4, en el que la etapa a) se efectúa por medio de una barrita.
6. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 4, en el que la etapa a) se efectúa usando ELISA.
7. Un método de evaluación de la progresión del estado de un sujeto que padece una infección respiratoria bacteriana, que comprende las etapas de:
8. Un método según la reivindicación 7, en el que la infección respiratoria bacteriana está provocada por los patógenos Streptococcus pneumoniae o Micobacterium tuberculosis.
9. Un método según la reivindicación 8, en el que el sujeto evaluado está en tratamiento.
10. Uso de un kit de ELISA para evaluar el estado físico de un sujeto que padece una infección respiratoria bacteriana, comprendiendo el kit: a) un agente de captura inmovilizado capaz de capturar uno o más marcadores en forma de (i) un receptor del activador del plasminógeno de tipo urocinasa (uPAR); y/o (ii) un receptor soluble del activador del plasminógeno de tipo urocinasa (suPAR); y/o (iii) de uno o más productos de degradación de (i) o (ii), y b) una pareja de unión capaz de unirse a dicho marcador, comprendiendo la pareja de unión c) un sistema de marcado.
11. Uso de un kit de barrita para evaluar el estado físico de un sujeto que padece una infección respiratoria bacteriana, que comprende: a) un agente de captura inmovilizado capaz de capturar uno o más marcadores en forma de (i) un receptor del activador del plasminógeno de tipo urocinasa (uPAR); y/o (ii) un receptor soluble del activador del plasminógeno de tipo urocinasa (suPAR); y/o (iii) de uno o más productos de degradación de (i) o (ii), y b) una pareja de unión capaz de unirse a dicho marcador, comprendiendo la pareja de unión c) un sistema de marcado.
12. Uso según las reivindicaciones 10 u 11, en el que la infección respiratoria bacteriana está provocada por los microorganismos patógenos Streptococcus pneumoniae o Micobacterium tuberculosis.
13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, en el que el agente de captura es un anticuerpo anti-marcador.
14. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en el que la pareja de unión es un anticuerpo anti-marcador.
15. Uso según la reivindicación 10, en el que la infección respiratoria bacteriana es una bacteriemia a Streptococcus pneumoniae, en el que el agente de captura inmovilizado es un anticuerpo monoclonal murino dirigido contra un suPAR humano capaz de capturar un receptor soluble del activador del plasminógeno de tipo urocinasa (suPAR), la pareja de unión es un anticuerpo policlonal de conejo anti-suPAR humano, y el sistema de marcado es un anticuerpo policlonal de ratón anti-conejo conjugado con fosfatasa alcalina.
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