Una composición que comprende (i) una enzima seleccionada de una fosfolipasa C específica de fosfatidilnositol y una fosfolipasa D específica de fosfatidilnositol,

y (ii) un vehículo fisiológicamente aceptable para dicha enzima, en donde dicha composición está en una forma apropiada para la administración oral

Campo de la Invención

La presente descripción se refiere a una composición que comprende y metodología para utilizar enzimas, como agentes anti-infección, en el contexto de tratar o reducir el riesgo de infecciones del tracto digestivo.

Antecedentes de la invención

En su Revision of the World Population Estimates and Projections de 1998, la División de Población del Departamento de las Naciones Unidas de Asuntos Sociales y Económicos proyectó que la población mundial alcanzaría 6 mil millones en 1999. El informe también estableció que llevó solo 12 años que la población aumentara de 5 a 6 mil millones en comparación con 123 años para ir de uno a dos mil millones. Por mediados del siglo 21 la población proyectada está entre 7,3 y 10,7 mil millones. El crecimiento poblacional notable en la última década se debe parcialmente a las ganancias eficientes en la producción de alimentos resultantes de la aplicación de tecnología y prácticas intensivas de producción de alimentos. Para el crecimiento futuro, se necesitarán más ganancias de eficiencia en la producción de alimentos para mantener el ritmo.

Un abordaje, que ha hecho la producción de carne animal más eficiente, incluye el uso generalizado de productos químicos antimicrobianos y antibióticos en la alimentación animal. En las granjas a gran escala, la diseminación de infección es muy rápida en condiciones de producción abarrotadas. La enfermedad generalizada es por ello controlada mediante los usos profilácticos y terapéuticos de estas sustancias. Por ejemplo, es práctica común incorporar productos químicos en los alimentos de animales para controlar infecciones por coccidias (por ejemplo, salinomicina, monensina, roxarsona (3-nitro), halquinol, carbadox y olaquindox) así como antibióticos anti-microbianos (por ejemplo, bacitracina, virginiamicina, tilosina, tetraciclina, clortetraciclina, penicilina, oleandomicina, novobiocina, lincomicina, bambermicinas, apramicina, spiramicina, eitromicina, neomicina y otros). Esta práctica es bien conocida para promover el crecimiento y mejorar la conversión alimenticia.

El incremento en la resistencia a múltiples antibióticos entre patógenos humanos, tales como Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenza, Neisseria gonorrhoeae, y Mycobacterium tuberculosis, ha creado el temor de que la resistencia a antibióticos desarrollada en microbios asociados a animales de granja podría migrar a los patógenos humanos a través de factores transferibles de resistencia a fármacos. Existe evidencia de que los animales alimentados con antibióticos son una fuente de bacterias con factores de resistencia transferibles. Véase Hooge, Feedstuffs 71(20):59, 1999. Aunque los antibióticos utilizados en animales y en seres humanos son generalmente diferentes, existen similitudes en los mecanismos que podrían resultar en resistencia cruzada. En un caso, las fluroquinolonas están aprobadas para el control de infecciones con E. coli (colibacillosis) en algunos animales y también se utilizan en la medicina humana. Hooge, más arriba. Recientemente la FDA/CVM ha propuesto retirar la aprobación al uso de la fluroquinolona enrofloxacina en las aves de corral debido al desarrollo de campilobacteria resistente a la fluoroquinolona y la transferencia a seres humanos. Véase Murhead, S. Feedstuffs 72(45):1-4, 2000.

También existe una preocupación entre las industrias de producción de carne de que podría aparecer pérdida de producción y posible resurgimiento de enfermedad en animales si existiera una prohibición en el uso de antibióticos y anti-microbianos en la alimentación. En 1986, por ejemplo, Suecia prohibió el uso de antibióticos de alimentos y la enfermedad en animales creció. Esto estuvo acompañado de un incremento en el uso de antibióticos terapéuticos que dieron como resultado un aumento general en el uso de antibióticos así como un acrecentamiento en los costos de producción de animales para carne. Véase Smith, Feedstuffs 71(13):1, 1999. En diciembre de 1998, El Consejo de Ministros de la UE decidió suspender el uso de seis antimicrobianos que fueron formalmente aprobados como libres de prescripción en promotores del crecimiento para la alimentación (Official Journal of the European Communities 29.12.98, Regulación del Consejo N° 2821/98 con respecto a la Directiva 70/524). También se prohibieron dos aditivos basados en quinoxalina en agosto de 1999 debido a la preocupación acerca de los residuos en la carne. El resultado de estas acciones es un incremento en la prevalencia de condiciones formalmente suprimidas que incluyen: enteritis necrótica en pollos parrilleros; enteritis debido a Clostridium perfringens en cerdos destetados; disentería porcina y diarrea espiroquetal; y diarrea asociada a E. coli. Véase Miller, United States Animal Health Association, 1999 Proceedings "Antibiotic Usages in Food Animal Production and Resistance-European Perspective."

Hay 30.000 muertes de seres humanos por año causadas por infecciones nosocómicas con patógenos resistentes, pero muchas menos muertes por patógenos transmitidos por alimentos. Ninguna de las muertes por patógenos transmitidos por alimentos se ha conectado a la resistencia a antibióticos (véase Smith, más arriba). De ese modo, no está claro si el uso de antibióticos por las industrias de producción de carne ha contribuido al problema de patógenos resistentes a fármacos de las infecciones nosocómicas en seres humanos. Otra preocupación es la falta de nuevos antibióticos para tratar infecciones con patógenos resistentes.

Véase Henry, C.M., Chemical and Engineering News, 6 de marzo de 2000, páginas 41-58. Esto podría significar que cuando se desarrollan patógenos importantes resistentes a antibióticos, podría no haber ningún antibiótico nuevo disponible para tratar las infecciones. La dificultad de desarrollar antibióticos, el tamaño del mercado y los problemas regulatorios parecen haber causado que las compañías farmacéuticas principales alejen su foco de R&D del desarrollo de antibióticos, especialmente para el uso en animales. Las nuevas regulaciones propuestas para registrar un fármaco para uso en animales son tan difíciles que el desarrollo está siendo interrumpido. Véase Smith, más arriba. Existen, sin embargo, varias compañías pequeñas involucradas en el desarrollo de nuevos antibióticos (Henry, más arriba).

En ciertas poblaciones de animales, la infección ya es pandémica. Por ejemplo, la coccidiosis aviar es una enfermedad que solamente está manejada, pero no realmente bajo control. Virtualmente todas las bandadas están infectadas y comúnmente los productos químicos anti-coccidiosis se rotan en la alimentación para controlar el daño y limitar el desarrollo de cepas resistentes. La coccidiosis cuesta a los productores de aves de corral $350 millones anualmente en pérdidas y gastos de medicación para fármacos antibióticos tales como salinomicina. Véase Suszkiw, USDA Agricultural Research Service News, 28 de octubre de 1997. En 1999, se ha estimado que aproximadamente $114 millones se gastarían anualmente en coccidiostatos en los Estados Unidos. Véase Frost & Sullivan, US. Pharmaceutical Products for Food Animals, Report 5245-54, 1995.

El documento WO 97/41739 A describe composiciones de alimentos que comprenden hemicelulasas tales como mananasa para incrementar la eficiencia de alimentos, así como un agente anti-infeccioso.

Kuppe et al. describen la clonación y secuenciación de fosfolipasa C de Bacillus cereus específica para fosfatidilnositol. El documento EP0477739 describe la clonación y purificación de fosfolipasa D específica para glicosil fosfatidilnositol.

Existe una clara necesidad de descubrir métodos nuevos y más efectivos para controlar infecciones en el tracto digestivo de animales que se producen con prácticas de cría intensiva. Esta necesidad se basa en un requerimiento de obtener mejor eficiencia en la producción para mantenerse a la par de la rápida expansión de la población mundial. El control mejorado de la infección intestinal garantiza una tasa de crecimiento más rápida y una mejora en la eficiencia en alimentación. También existe una necesidad de alternativas al uso de antibióticos en la producción animal para tratar la preocupación del posible desarrollo de resistencia a antibióticos en patógenos humanos.

No existe riesgo de estimular la evolución de microorganismos patógenos resistentes que presenten un problema para la salud humana cuando se utiliza un tratamiento basado en enzimas que opera de una manera...

1. Una composición que comprende (i) una enzima seleccionada de una fosfolipasa C específica de fosfatidilnositol y una fosfolipasa D específica de fosfatidilnositol, y (ii) un vehículo fisiológicamente aceptable para dicha enzima, en donde dicha composición está en una forma apropiada para la administración oral.

2. Composición según la reivindicación 1, en donde dicha composición es un alimento.

3. Composición según las reivindicaciones 1 o 2, en donde dicha composición contiene ningún agente anti-infeccioso distinto de dicha enzima.

4. Composición según la reivindicación 1, en donde dicha enzima es una fosfolipasa C específica para fosfatidilnositol.

5. Composición según la reivindicación 1, en donde dicha enzima es una fosfolipasa D específica para fosfatidilnositol.

6. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde dicha composición además comprende un estabilizante, un vehículo de carbohidrato o un conservante.

7. Composición según la reivindicación 6, en donde dicho estabilizante es un tampón, un carbohidrato o un glicol.

8. Composición según la reivindicación 6, en donde dicho vehículo de carbohidrato se selecciona del grupo que consiste en xilosa, fructosa, glucosa, sorbitol y maltotriosa.

9. Composición según la reivindicación 6, en donde dicho conservante se selecciona del grupo que consiste en propilparabeno, sorbato de sodio, sorbato de potasio y ascorbil palmitato.

10. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde dicho vehículo es un producto alimenticio en el que dicha enzima está incorporada.

11. Composición según la reivindicación 10, en donde dicho producto alimenticio es un alimento para animales compuesto por material de grano, una fuente de proteína, vitaminas, aminoácidos y minerales.

12. Composición según la reivindicación 11, en donde dicho material de grano es maíz, sorgo, trigo, cebada o avenas.

13. Composición según la reivindicación 11, en donde la fuente de proteína es judías o guisantes.

14. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde dicha composición está en una formulación sólida o líquida.

15. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde dicha enzima está contenida en un comprimido o una cubierta de cápsula de gelatina.

16. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde dicha enzima se prepara a partir de una cepa de Bacillus cereus.

17. Composición según la reivindicación 16, en donde dicha cepa de Bacillus cereus es ATCC 7004 o ATCC 6464.

18. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde dicha enzima se obtiene por la expresión de un ADN recombinante en un organismo huésped.

19. Composición según la reivindicación 18, en donde dicho organismo huésped es de una cepa de Bacillus megaterium.

20. Composición según la reivindicación 2, en donde dicha enzima está presente en 200 UI/kg-4000 UI/kg de alimento.

21. Uso de una enzima seleccionada de una fosfolipasa C específica de fosfatidilnositol y una fosfolipasa D específica de fosfatidilnositol, para la fabricación de una forma de dosificación oral de un medicamento para tratar o reducir el riesgo de infección del tracto digestivo.

22. Uso según la reivindicación 21, caracterizado porque dicho uso no incluye administrar un agente anti-infeccioso distinto de dicha enzima.

23. Uso según la reivindicación 21, caracterizado porque dicha infección es causada por un patógeno protozoo, bacteriano, levadura, viral o fúngico.

24. Uso según la reivindicación 23, caracterizado porque dicha infección es causada por un patógeno protozoo del género Eimeria.

25. Uso según la reivindicación 23, caracterizado porque dicha infección es causada por un patógeno protozoo del género Cryptosporidium.

26. Uso según la reivindicación 23, caracterizado porque dicha infección es causada por un patógeno bacteriano del género Clostridium.

27. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 21-26, caracterizado porque dicha enzima se prepara a partir de una cepa de Bacillus cereus.

28. Uso según la reivindicación 27, caracterizado porque dicho Bacillus cereus es ATCC 7004 o ATCC 6464.

29. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 21-26, caracterizado porque dicha enzima se obtiene por la expresión de un ADN recombinante en un organismo huésped.

30. Uso según la reivindicación 29, caracterizado porque dicho organismo

huésped procede de una cepa de Bacillus megaterium.

31. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 21-30, caracterizado porque dicha enzima es una fosfolipasa C específica para fosfatidilnositol.

32. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 21-30, caracterizado porque dicha enzima es una fosfolipasa D específica para fosfatidilnositol.

33. Una composición que comprende (i) una endo-1,4-D-mananasa y (ii) un vehículo fisiológicamente aceptable para dicha enzima, en donde dicha composición está en una forma apropiada para la administración oral y no contiene un agente antiinfeccioso distinto de dicha enzima, y en donde dicha composición comprende dicha enzima en una cantidad efectiva para tratar o reducir el riesgo de infección del tracto digestivo.

34. Composición según la reivindicación 33, en donde dicho vehículo es un producto alimenticio en el que dicha enzima está incorporada.

35. Composición según la reivindicación 34, en donde dicho producto alimenticio es un alimento para animales compuesto por material de grano, una fuente de proteína, vitaminas, aminoácidos y minerales.

36. Composición según la reivindicación 35, en donde dicho material de grano es maíz, sorgo, trigo, cebada o avenas.

37. Composición según la reivindicación 35, en donde dicha fuente de proteína es judías o guisantes.

38. Composición según la reivindicación 33, en donde dicha composición está en una formulación sólida o líquida.

39. Composición según la reivindicación 33, en donde dicha enzima está contenida en un comprimido o cubierta de cápsula de gelatina.

40. Composición según la reivindicación 33, en donde dicha endo-1,4-Dmananasa es aquella producida por Bacillus lentus designada como ATCC 55045.

41. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones 33-40, en donde dicha composición además comprende un estabilizante, un vehículo de carbohidrato o un conservante.

42. Composición según la reivindicación 41, en donde dicho estabilizante es un tampón, un carbohidrato o un glicol.

43. Composición según la reivindicación 41, en donde dicho vehículo de carbohidrato se selecciona del grupo que consiste en xilosa, fructosa, glucosa, sorbitol y maltotriosa.

44. Composición según la reivindicación 41, en donde dicho conservante se selecciona del grupo que consiste en propilparabeno, sorbato de sodio, sorbato de potasio y ascorbil palmitato.

45. Uso de una endo-1,4-D-mananasa, en donde dicha enzima no se administra con una cantidad antimicrobianamente efectiva de otro agente antiinfeccioso, para la fabricación de una forma de dosificación oral de un medicamento para tratar o reducir el riesgo de infección del tracto digestivo.

46. Uso según la reivindicación 45, caracterizado porque dicha infección es causada por un patógeno protozoo, bacteriano, levadura, viral o fúngico.

47. Uso según la reivindicación 46, caracterizado porque dicha infección es causada por un patógeno protozoo del género Eimeria.

48. Uso según la reivindicación 46, caracterizado porque dicha infección es causada por un patógeno protozoo del género Cryptosporidium.

49. Uso según la reivindicación 46, caracterizado porque dicha infección es causada por un patógeno bacteriano del género Clostridium.

50. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 45-49, caracterizado porque dicha enzima se prepara a partir de una cepa Bacillus lentus.

51. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 45-49, caracterizado porque dicha enzima se obtiene por la expresión de un ADN recombinante en un organismo huésped.

52. Uso según la reivindicación 51, caracterizado porque dicho organismo huésped es de una cepa de Bacillus megaterium.

53. Uso según la reivindicación 45, caracterizado porque dicha endo-1,4-βD-mananasa es aquella producida por Bacillus lentus designada como ATCC 55045.