Una secuencia de aminoácidos correspondiente a un dominio extracelular que tiene la estructura de una lectina de tipo C y que tiene la actividad de unir lipoproteína de baja densidad modificada,

caracterizada porque consiste en los aminoácidos 61-270 en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO:3 o un análogo de lo, en donde dicho análogo consiste en la misma secuencia, excepto por variaciones debidas a la degeneración del código genético y sustitución de un aminoácido con un aminoácido análogo, con la condición de que la secuencia de dicho análogo conserve la actividad de unir lipoproteína de baja densidad modificada

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a un receptor de mamífero para lipoproteína de baja densi-dad (LDL) modificada), y se refiere con mayor detalle a un receptor endotelial vascular de mamífero 5 para la lipoproteína de baja densidad modificada.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La disfunción endotelial vascular ha sido apuntada como un índice importante en las etapas iniciales de la ateroesclerosis progresiva. La célula endotelial vascular libera muchas clases de facto-res humorales para mantener la homeostasis circulatoria. La función endotelial vascular es inhibida 10 por estímulos físicos o diversas sustancias que incluyen el factor más importante, la lipoproteína de baja densidad oxidada, que es una clase de la lipoproteína de baja densidad modificada. Por ejemplo, la célula endotelial vascular libera monóxido de nitrógeno como factor vasohipotónico para ajustar el tono vascular. La liberación de monóxido de nitrógeno es inhibida por la lipoproteína de baja densidad oxidada. 15

Se ha sabido que los macrófagos o células endoteliales vasculares internalizan la lipoproteína de baja densidad modificada a través de un receptor distinto de los receptores para la lipoproteína de baja densidad. Los macrófagos internalizan la lipoproteína de baja densidad modificada a través de receptores de barrido, que han sido ya analizados estructuralmente (véanse las Publicaciones Japo-nesas de Patente PCT Núms. 6 (1994)–500765 y 6 (1994)–508604, y la Publicación Provisional de 20 Patente Japonesa No. 3 (1991)–290184). Los macrófagos cambian luego a células espumosas, que son específicas en el foco arterioesclerótico. Dado que los receptores de barrido de los macrófagos no se encuentran en las células endoteliales vasculares, se ha anticipado que receptores de otra estruc-tura están presentes en las células endoteliales vasculares (véase, Hidenori Arai, Toru Kita, Oxidized LDL, Metabolism 28/4, 1991). 25

Por las razones arriba mencionadas, es necesario analizar la estructura de un receptor endo-telial para la lipoproteína de baja densidad modificada, a saber, la secuencia de aminoácidos del re-ceptor. Sin embargo, la estructura y la secuencia de aminoácidos no han sido esclarecidas hasta ahora.

Sparrow C.P. et al.: “A macrophage receptor that recognizes oxidized Low Density Lipoprotein 30 but not acetylated Low Density Lipoprotein” J. BIOL. CHEM., vol. 264, nº 5, 15 de febrero de 1989 (15-02-1989), páginas 2599-2604, XP002114233 describe un receptor de macrófagos que reconoce lipo-proteínas de baja densidad oxidadas, pero no lipoproteínas de baja densidad acetiladas.

Chen et al.: “Essential role of cytoplasmic sequences for cell-surface sorting of the lectin-like oxidized LDL receptor-1 (LOX-1)” JOURNAL OF MOLECULAR AND CELLULAR CARDIOLOGY, 35 ACADEMIC PRESS, LONDRES, GB, vol. 39, nº 3, septiembre de 2005 (09-2005), páginas 553-361, XP005078806 ISSN: 0022-2828 discuten el papel esencial de secuencias citoplásmicas para la clasifi-cación en la superficie celular del receptor 1 de LDL oxidadas de tipo lectina (LOX-1).

Chen M. et al.: “Requirements of basic amino acids residues within the lectin-like domain of LOX-1 for the binding of oxidized low-density lipoprotein” FEBS LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, 40 NL, vol. 499, nº 3, 22 de junio de 2001 (22-06-2001), páginas 215-219, XP004247018 ISSN: 0014-5793 describe los requisitos de residuos de aminoácidos de carácter básico dentro del dominio de tipo lectina de LOX-1 para la unión de lipoproteínas de baja densidad oxidadas.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

De acuerdo con el estudio de los autores de la presente invención, se ha esclarecido ahora la 45 estructura del receptor endotelial vascular para la lipoproteína de baja densidad modificada. Las se-

cuencias de aminoácidos del receptor endotelial vascular para la lipoproteína de baja densidad modifi-cada se exponen en las Secuencias Núms. 1, 2 y 3.

Se proporciona por la presente invención una secuencia de DNA que codifica un receptor endotelial vascular de mamífero para la lipoproteína de baja densidad modificada.

La secuencia de DNA puede ser clones de cDNA derivados del marco de lectura abierto de 5 un gen correspondiente a un receptor endotelial vascular de mamífero nativo para la lipoproteína de baja densidad modificada. La secuencia de DNA puede ser también una secuencia que es capaz de hibridarse a los clones de cDNA arriba mencionados y codifica un receptor endotelial vascular de mamífero biológicamente activo para la lipoproteína de baja densidad modificada. Adicionalmente, la secuencia puede degenerar como resultado del código genético para dar las secuencias de DNA arri-10 ba mencionadas. La degeneración incluye el mismo receptor biológicamente activo para la lipoproteí-na de baja densidad modificada.

La presente invención proporciona una secuencia de aminoácidos correspondiente a un do-minio extracelular que tiene la estructura de una lectina tipo C y que tiene la actividad de unir la lipo-proteína de baja densidad modificada, caracterizada porque consiste en los aminoácidos 61-270 en 15 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:2 o SEQ ID NO:3 o un análogo de las mismas, en donde dicho análogo consiste en la misma secuencia, excepto variaciones debidas a la degeneración del código y a la sus-titución de un aminoácido por un aminoácido análogo, con la condición de que la secuencia de dicho análogo conserve la actividad de unir la lipoproteína de baja densidad modificada así como una se-cuencia de DNA que codifica dicha secuencia de aminoácidos. 20

La invención se refiere, además, a un anticuerpo que fija específicamente un péptido que consiste en los aminoácidos 61-270 en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:2 o SEQ ID NO:3 y a un anticuerpo que fija específicamente un péptido que consiste en los aminoácidos 140-270 en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:2 o SEQ ID NO:3

La secuencia de DNA de la presente invención se puede integrar en un vector de expresión. 25 Por lo tanto, la presente invención describe, además, un procedimiento para la producción de un re-ceptor endotelial vascular de mamífero para la lipoproteína de baja densidad modificada o un análogo de la misma, que comprende insertar el vector de expresión recombinante en una célula hospedadora y cultivar la célula en condiciones promotoras de la expresión.

La invención proporciona adicionalmente una composición de proteína que contiene un re-30 ceptor endotelial vascular de mamífero para la lipoproteína de baja densidad modificada o un análogo de la misma que se produce como se ha mencionado antes.

La composición de proteínas obtenida que contiene un receptor endotelial vascular de mamí-fero biológicamente activo para la lipoproteína de baja densidad modificada o un análogo de la misma es eficaz en un ensayo de la lipoproteína de baja densidad de mamífero modificada. La composición 35 puede utilizarse también en la preparación de un anticuerpo para el receptor endotelial vascular de la lipoproteína de baja densidad modificada. El anticuerpo puede utilizarse en diagnóstico.

Es evidente, a partir de las actividades biológicas arriba descritas de la lipoproteína de baja densidad modificada y el receptor de la misma, que un agente que contenga un anticuerpo para el receptor endotelial vascular de la lipoproteína de baja densidad modificada es eficaz en el diagnóstico 40 de la ateroesclerosis.

En la presente memoria descriptiva, la expresión "receptor para la lipoproteína de baja densi-dad modificada" significa proteínas que son capaces de fijar moléculas de la lipoproteína de baja den-sidad modificada y, en su configuración nativa como proteínas de la membrana plasmática de los mamíferos, juegan presumiblemente un papel en la transducción de la señal proporcionada por una 45 lipoproteína de baja densidad modificada a una célula endotelial vascular. En la memoria descriptiva, la expresión incluye análogos de proteínas nativas con actividad de fijación de una lipoproteína de baja densidad modificada o actividad de transducción de señales.

La expresión "subtipo de un receptor para la lipoproteína de baja densidad modificada" signi-fica moléculas de un receptor para la lipoproteína de baja densidad modificada que exhiben órdenes 50

de rango de potencia farmacológica diferentes, a saber afinidades o selectividades...

1.– Una secuencia de aminoácidos correspondiente a un dominio extracelular que tiene la estructura de una lectina de tipo C y que tiene la actividad de unir lipoproteína de baja densidad modi-ficada, caracterizada porque consiste en los aminoácidos 61-270 en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO:3 o un análogo de lo, en donde dicho análogo consiste en la misma secuencia, excepto 5 por variaciones debidas a la degeneración del código genético y sustitución de un aminoácido con un aminoácido análogo, con la condición de que la secuencia de dicho análogo conserve la actividad de unir lipoproteína de baja densidad modificada.

2.– Una secuencia de DNA que codifica la secuencia de aminoácidos de la reivindicación 1.

3.– Un anticuerpo que se fija específicamente a un péptido que consiste en los aminoácidos 10 61-270 en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3.

4.– Un anticuerpo que se fija específicamente a un péptido que consiste en los aminoácidos 140-270 en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3.