Un procedimiento para radiofluoración que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) con un compuesto de fórmula (II):

**(Ver fórmula)**18F-(Engarce)-R2 (II) o, un compuesto de fórmula (III) con un compuesto de fórmula (IV) **(Ver fórmula)**18F-(Engarce)-R4 (IV) en las que R1 es un resto aldehído, un resto cetona, un aldehído protegido tal como un acetal, una cetona protegida, tal como un cetal, o una funcionalidad, tal como diol o un resto serina N-terminal, que puede oxidarse de forma rápida y eficaz para dar un aldehído o cetona usando un agente de oxidación; R2 es un grupo seleccionado entre amina primaria, amina secundaria, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminoxi, fenilhidrazina, semicarbazida y tiosemicarbazida, y preferentemente es un grupo hidrazina, hidrazida o aminoxi; R3 es un grupo seleccionado entre amina primaria, amina secundaria, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminoxi, fenilhidrazina, semicarbazida o tiosemicarbazida, y preferentemente es un grupo hidrazina, hidrazida o aminoxi; R4 es un resto aldehído, un resto cetona, un aldehído protegido tal como un acetal, una cetona protegida, tal como un cetal, o una funcionalidad, tal como diol o un resto serina N-terminal, que puede oxidarse de forma rápida y eficaz para dar un aldehído o cetona usando un agente de oxidación; para dar un conjugado de fórmula (V) o (VI), respectivamente: en las que X es -CO-NH-, -NH-, -O-, -NHCONH-o NHCSNH-, y es preferentemente -CO-NH-, NH-o -O-; Y es H o sustituyentes alquilo o arilo; y el grupo de Engarce en los compuestos de fórmulas (II), (IV), (V) y (VI) se selecciona entre en las que: **(Ver fórmula)****(Ver fórmula)****(Ver fórmula)**n es un número entero de 0 a 20; m es un número entero de 1 a 10; p es el número entero 0 ó 1; Z es O oS

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a agentes de diagnóstico y radiodiagnóstico, incluyendo vectores biológicamente activos marcados con núclidos emisores de positrones. Además, se refiere a procedimientos y reactivos para la [18F]-fluoración de vectores, definiéndose un vector como una molécula con afinidad para una diana biológica específica, y preferentemente es un péptido. Los conjugados marcados con 18F resultantes son útiles como productos radiofarmacéuticos, específicamente para su uso en Tomografía por Emisión de Positrones (PET).

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La aplicación de péptidos radiomarcados bioactivos para la formación de imágenes de diagnóstico está ganando importancia en la medicina nuclear. Las moléculas biológicamente activas que interactúan de forma selectiva con tipos celulares específicos son útiles para el suministro de radiactividad a tejidos diana. Por ejemplo, los péptidos radiomarcados tienen un potencial significativo para el suministro de radionúclidos a tumores, infartos y tejidos infectados para la formación de imágenes de diagnóstico y radioterapia. 18F, con su vida media de aproximadamente 110 minutos, es el núclido emisor de positrones de elección para numerosos estudios des formación de imágenes de receptores. Por lo tanto, los péptidos bioactivos marcados con 18F tienen un gran potencial clínico debido a su utilidad en PET para detectar y caracterizar de forma cuantitativa una gran diversidad de enfermedades.

Una dificultad que se presenta con los péptidos marcados con 18F es que la preparación de los agentes de marcado con 18F existentes requiere mucho tiempo. Sólo se consigue un marcado eficaz de péptidos y proteínas con 18F mediante el uso de grupos prostéticos adecuados. Se han propuesto varios de dichos grupos prostéticos en la bibliografía, incluyendo 4-[18F]fluorobenzoato de N-succinimidilo, m-maleimido-N-(p-[18F]fluorobencil)-benzamida, N-(p[18F]fluorofenil)maleimida y bromuro de 4-[18F]fluorofenacilo. Casi todas las metodologías usadas en la actualidad para el marcado de péptidos y proteínas con 18F utilizan ésteres activos del sintón marcado con flúor. Como los péptidos y proteínas pueden contener una multitud de grupos funcionales que pueden reaccionar con los ésteres activos, estos procedimientos actuales no son específicos de sitio. Por ejemplo, un péptido que contiene tres restos de lisina tiene tres funciones amina, todas ellas igualmente reactivas al sintón marcado. Por lo tanto, sigue existiendo una necesidad de grupos prostéticos marcados con 18F y metodologías, que permitan una introducción quimioselectiva rápida de 18F, particularmente en péptidos, en

18F

condiciones moderadas para dar productos marcados con con un alto rendimiento radioquímico y pureza. Además, existe una necesidad de dichas metodologías que sean susceptibles de automatización para facilitar la preparación de productos radiofarmacéuticos en el escenario clínico.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Y REALIZACIONES PREFERIDAS

La presente invención proporciona un procedimiento para radiofluoración que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) con un compuesto de fórmula (II):

**(Ver fórmula)**

18F-(Engarce)-R2 (II)

o,

un compuesto de fórmula (III) con un compuesto de fórmula (IV)

**(Ver fórmula)**

18F-(Engarce)-R4 (IV) en las que R1 es un resto aldehído, un resto cetona, un aldehído protegido tal como un acetal, una cetona protegida, tal como un cetal, o una funcionalidad, tal como diol o un resto serina N-terminal, que puede oxidarse de forma rápida y eficaz para dar un aldehído o cetona usando un agente de oxidación; R2 es un grupo funcional que, en condiciones moderadas tales como tampón acuoso, reacciona de forma específica para el sitio con R1, produciendo un conjugado estable. R2 puede ser derivados de amoniaco tales como amina primaria, amina secundaria, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminoxi, fenilhidrazina, semicarbazida o tiosemicarbazida, y preferentemente es un grupo hidrazina, hidrazida o aminoxi; R3 es un grupo funcional que reacciona de forma específica para el sitio con R4, R3 puede ser derivados de amoniaco tales como amina primaria, amina secundaria, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminoxi, fenilhidrazina, semicarbazida o tiosemicarbazida, y preferentemente es un grupo hidrazina, hidrazida o aminoxi; R4 es un resto aldehído, un resto cetona, un aldehído protegido tal como un acetal, una cetona protegida, tal como un cetal, o una funcionalidad, tal como diol o un resto serina N-terminal, que puede oxidarse de forma rápida y eficaz para dar un aldehído o cetona usando un agente de oxidación; para dar un conjugado de fórmula (V) o (VI), respectivamente: en las que X es -CO-NH-, -NH-, -O-, -NHCONH-o NHCSNH-, y es preferentemente -CO-NH-, NH-o -O-; Y es H o sustituyentes alquilo o arilo; y el grupo de Engarce en los compuestos de fórmulas (II), (IV), (V) y (VI) se selecciona entre en las que:

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

n es un número entero de 0 a 20;

m es un número entero de 1 a 10;

p es el número entero 0 ó 1;

Z es O oS.

El grupo de Engarce en los compuestos de fórmulas (II), (IV), (V) y (VI) se elige para proporcionar buenas farmacocinéticas in vivo, tales como características de excreción favorables en el conjugado resultante de fórmula (V) o (VI). El uso de grupos de engarce con diferentes lipofilias y/o carga puede cambiar significativamente las farmacocinéticas in vivo del péptido para adaptarse a la necesidad diagnóstica. Por ejemplo, cuando es deseable que un conjugado de fórmula (V) o (VI) se elimine del cuerpo por excreción renal, se usa un engarce hidrófilo, y cuando es deseable que la eliminación se realice por excreción hepatobiliar, se usa un engarce hidrófobo. Se ha descubierto que los engarces que incluyen un resto polietilenglicol retrasan la eliminación en sangre, lo cual es deseable en algunas circunstancias.

Adecuadamente, el aldehído R1 se genera por oxidación in situ de un vector funcionalizado con un precursor que contiene un grupo 1,2-diol o 1,2-aminoalcohol. Por ejemplo, este último puede insertarse en la secuencia peptídica directamente durante la síntesis usando el aminoácido Fmoc-Dpr(Boc-Ser)-OH descrito por Wahl y col. en Tetrahedron Letts. 37, 6861 (1996). De forma análoga, un aldehído R4 en un compuesto de fórmula (IV) puede generarse por oxidación de un precursor.

Los agentes de oxidación adecuados que pueden usarse para generar el resto R1 o R4 en los compuestos de fórmulas (I) y (IV), respectivamente, incluyen peryodato, ácido peryódico, ácido paraperyódico, metaperyodato sódico y metaperyodato potásico.

Cada uno de R1 y R4 en los compuestos de fórmulas (I) y (IV) y aspectos relacionados de la invención se selecciona preferentemente entre -CHO, >C=O, -CH(-O-alquil C1-4-O-) tal como -CH(-OCH2CH2O-) y -CH(Oalquilo C1-4)2 tal como -CH (OCH3)2, y en un aspecto preferido, R1 y R4 son -CHO.

Cada uno de R2 y R3 en los compuestos de fórmulas (II) y (III) y aspectos relacionados de la invención se selecciona preferentemente entre -NHNH2, -C(O)NHNH2 y -ONH2 y son preferentemente -ONH2.

Y, en los compuestos de fórmulas (V) y (VI) y aspectos relacionados de la invención, es preferentemente H, alquilo C1-6 (tal como metilo) o fenilo.

La reacción puede realizarse en un disolvente adecuado, por ejemplo, en un tampón acuoso en el intervalo de pH de 2 a 11, adecuadamente de 3 a 11, más adecuadamente de 3 a 6, y a una temperatura no extrema de 5 a 70ºC, preferentemente a la temperatura ambiente.

La presente invención proporciona una estrategia más quimioselectiva para el radiomarcado en la que se preselecciona el sitio exacto de introducción de la marca durante la síntesis del péptido o precursor de vector. La reacción de ligación que se produce en un sitio predeterminado en el vector sólo da un producto posible. Por lo tanto, esta metodología es quimioselectiva, y su aplicación se considera genérica para una gran diversidad de péptidos, biomoléculas y fármacos de bajo peso molecular.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un procedimiento para radiofluoración que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (Ia) con un compuesto de fórmula (IIa):

**(Ver fórmula)**

18F-(Engarce)-O-NH2...

1. Un procedimiento para radiofluoración que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) con un compuesto de fórmula (II):

**(Ver fórmula)**

18F-(Engarce)-R2 (II)

o,

un compuesto de fórmula (III) con un compuesto de fórmula (IV)

**(Ver fórmula)**

18F-(Engarce)-R4 (IV) en las que R1 es un resto aldehído, un resto cetona, un aldehído protegido tal como un acetal, una cetona protegida, tal como un cetal, o una funcionalidad, tal como diol o un resto serina N-terminal, que puede oxidarse de forma rápida y eficaz para dar un aldehído o cetona usando un agente de oxidación; R2 es un grupo seleccionado entre amina primaria, amina secundaria, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminoxi, fenilhidrazina, semicarbazida y tiosemicarbazida, y preferentemente es un grupo hidrazina, hidrazida o aminoxi; R3 es un grupo seleccionado entre amina primaria, amina secundaria, hidroxilamina, hidrazina, hidrazida, aminoxi, fenilhidrazina, semicarbazida o tiosemicarbazida, y preferentemente es un grupo hidrazina, hidrazida o aminoxi; R4 es un resto aldehído, un resto cetona, un aldehído protegido tal como un acetal, una cetona protegida, tal como un cetal, o una funcionalidad, tal como diol o un resto serina N-terminal, que puede oxidarse de forma rápida y eficaz para dar un aldehído o cetona usando un agente de oxidación; para dar un conjugado de fórmula (V) o (VI), respectivamente: en las que X es -CO-NH-, -NH-, -O-, -NHCONH-o NHCSNH-, y es preferentemente -CO-NH-, NH-o -O-; Y es H o sustituyentes alquilo o arilo; y el grupo de Engarce en los compuestos de fórmulas (II), (IV), (V) y (VI) se selecciona entre en las que:

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

n es un número entero de 0 a 20;

m es un número entero de 1 a 10;

5 p es el número entero 0 ó 1;

Z es O oS.

2. Un procedimiento para radiofluoración que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (Ia) con un compuesto de fórmula (IIa):

**(Ver fórmula)**

18F-(Engarce)-O-NH2 (IIa) o, un compuesto de fórmula (IIIa) con un compuesto de fórmula (IVa)

**(Ver fórmula)**

15 18F-(Engarce)-R4 (IVa) en las que R1 y R4 son como se han definido en la reivindicación 1; cada uno de los grupos de Engarce en los compuestos de fórmulas (IIa) y (IVa) es un grupo hidrocarbilo C1-60, adecuadamente un grupo hidrocarbilo C1-30, que incluye opcionalmente de 1 a 30 heteroátomos, adecuadamente de 1 a 10 heteroátomos, tales como oxígeno o nitrógeno;

20 para dar un conjugado de fórmula (Va) o (VIa), respectivamente: en las que Y es H o sustituyentes alquilo o arilo; y el grupo de Engarce es como se ha definido para el compuesto de fórmula (IIa) o (IVa).

**(Ver fórmula)**

5 3. Un procedimiento para radiofluoración de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (VII):

**(Ver fórmula)**

con un compuesto de fórmula (VIII), (IX), (X) o (XI): 18F-(CH2CH2O)n-(CH2)m-CHO (VIII)

**(Ver fórmula)**

en las que:

n es un número entero de 0 a 20;

m es un número entero de 1 a 10; 15 X es -CO-NH-, -NH-o -O-y es preferentemente -O

Y es H o sustituyentes alquilo o arilo

para dar a compuestos de fórmula (XII-XV), respectivamente: en las que X es como se ha definido para el compuesto de fórmula (VII), m y n son como se han definido para los compuestos de fórmula (VIII a XI).

**(Ver fórmula)**

5 4. Un procedimiento para radiofluoración de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XVI):

**(Ver fórmula)**

en la que Y es H, alquilo o un sustituyente arilo

preferentemente con compuestos de fórmula (XVII), (XVIII),(XIX) o (XX): 10 18F-(CH2-CH2-O)n-(CH2)m-W-NH2 (XVII)

**(Ver fórmula)**

en la que m es un número entero de 1 a 10, n es un número entero de 0 a 20, y W = -CONH-, -NH-o -O-para dar un compuesto de fórmula (XXI), (XXII), (XXIII) o (XXIV), respectivamente:

**(Ver fórmula)**

5 en la que W = -CONH-, -NH-o -O-, m y n son como se han definido para los compuestos de fórmula (XIII a XI) e Y es H o un resto alquilo o arilo.

5. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que 10 el vector es el péptido Arg-Gly-Asp o un análogo del mismo.

6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5 en le que le vector comprende el fragmento

7. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5 ó 6 en el que el vector es de fórmula (A):

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

en laqueX7 es-NH2 o

**(Ver fórmula)**

8. Un compuesto de fórmula (II) como se ha definido en la reivindicación 1 o un compuesto de fórmula (IIa) como se ha definido en la reivindicación 2, con la condición de que: en los compuestos de fórmula (II), si el engarce es fenilo, entonces R2 sea aminoxi (adecuadamente -ONH2).

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8 de fórmula (XVII), (XVIII), (XIX), o

(XX): 15 18F-(CH2-CH2-O)n-(CH2)m-W-NH2 (XVII) en las que m es un número entero de 1 a 10, n es un número entero de 1 a 20, y W = -CONH-, -NH-o -O-.

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

5 10. Un compuesto de fórmula (IV) como se ha definido en la reivindicación 1 o un compuesto de fórmula (IVa) como se ha definido en la reivindicación 2; con las condiciones de que:

(i) en los compuestos de fórmula (IV), el engarce no sea fenilo

(ii) en los compuestos de fórmula (IVa), el engarce no sea fenilo o fenilo sustituido con 10 halo, hidroxi o benciloxi.

11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 de fórmula (VIII), (IX), (X) o (XI): 18F-(CH2CH2O)n-(CH2)m-CHO (VIII)

**(Ver fórmula)**

15 en las que:

n es un número entero de 0 a 20;

m es un número entero de 1 a 10;

X es -CO-NH-, -NH-o -O-y es preferentemente -O

Y es H o sustituyentes alquilo o arilo con la condición de que en los compuestos de fórmula (X), n no sea 0.

12. Un compuesto de fórmula (I) o (III) como se ha definido en la reivindicación 1 o de 5 fórmula (Ia) o (IIIa) como se ha definido en la reivindicación 2.

13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12 en el que el vector es el péptido Arg-Gly-Asp o un análogo del mismo.

14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12 ó 13 en el que el vector es de fórmula (A):

**(Ver fórmula)**

en laqueX7 es-NH2 o

**(Ver fórmula)**

15 en la que a es un número entero de 1 a 10, preferentemente a es 1.

15. Un compuesto de fórmulas (V) o (VI) como se ha definido en la reivindicación 1.

16. Un compuesto de fórmula (Va) o (VIa) como se ha definido en la reivindicación 2.

17. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 15 de fórmula (XII), (XIII), (XIV), (XV) como se ha definido en la reivindicación 3.

18. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 15 de fórmula (XXI), (XXII), (XXIII), 25 (XXIV) como se ha definido en la reivindicación 4.

19. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18 en el que el vector es el péptido Arg-Gly-Asp o un análogo del mismo.

20. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 19 en el que el vector comprende el fragmento:

21. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 19 en el que el vector es de fórmula (A):

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

10 en laqueX7 es-NH2 o

**(Ver fórmula)**

en la que a es un número entero de 1 a 10, preferentemente a es 1.

22. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 19 de fórmula:

23. Una composición radiofarmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22; junto con uno o más adyuvantes, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

24. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22 para el uso médico.

25. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22 para la fabricación de un producto radiofarmacéutico para su uso en un procedimiento de formación de imágenes in vivo.

26. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 24 para su uso en un procedimiento de formación de imágenes in vivo.

27. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 26 en el que le procedimiento de formación de imágenes in vivo comprende administrar un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22 a dicho cuerpo y generar una imagen de al menos una parte de dicho cuerpo al que se ha distribuido dicho compuesto usando PET.

28. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 24 para su uso en un procedimiento de monitorización del efecto de tratamiento de un cuerpo humano o animal con un fármaco para combatir una afección asociada con el cáncer, preferentemente angiogénesis, comprendiendo dicho procedimiento administrar a dicho cuerpo un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22 y detectar la asimilación de dicho conjugado por receptores celulares, efectuándose dicha administración y detección, opcionalmente, pero preferentemente, antes, durante y después del tratamiento con dicho fármaco.