Un compuesto que comprende un vector peptídico y al menos un colorante de fluoresceína,

en el que dicho compuesto se selecciona de una de las fórmulas: (III) en las que: Ra representa - (CH2)n - o - (CH2)n-C6H4- que forma un puente con X2, X4 o X6, en las que n representa un número entero positivo de 1 a 10, X1 representa un enlace ó 1, 2, 3, 4 ó 5 restos aminoacídicos, en el que un resto aminoacídico está opcionalmente funcionalizado con un resto espaciador, o dicho resto aminoacídico posee una cadena lateral funcional, tal como un grupo ácido o amina, X2, X4 y X6 representan restos aminoacídicos que pueden formar un enlace disulfuro o tioéter, X3 representa arginina, G representa glicina, D representa ácido aspártico, X5 representa un aminoácido hidrófobo; y X7 representa un resto espaciador o biomodificador o está ausente, y W1 es un resto espaciador o está ausente, h es un número entero positivo 1 ó 2 y en el que al menos uno de los grupos Z que está presente representa un colorante de fluoresceína; o una sal fisiológicamente aceptable del mismo

Campo de la invención

La presente invención se refiere a nuevos compuestos basados en péptidos y a su uso en la formación de imágenes ópticas de diagnóstico para el tratamiento de enfermedades. Más específicamente, la invención se refiere al uso de dichos compuestos basados en péptidos como vectores de dirección que se unen a receptores asociados con la angiogénesis. Los compuestos pueden usarse como agentes de contraste en el diagnóstico de enfermedades relacionadas con la angiogénesis.

Antecedentes de la invención

Generalmente, pueden formarse nuevos vasos sanguíneos mediante dos mecanismos diferentes: vasculogénesis o angiogénesis. La angiogénesis es la formación de nuevos vasos sanguíneos por ramificación de los vasos existentes. El estímulo primario para este procedimiento puede ser el suministro inadecuado de nutrientes y oxígeno (hipoxia) a células en un tejido. Las células pueden responder secretando factores angiogénicos, de los muchos que existen; un ejemplo, al que se hace referencia frecuentemente, es el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Estos factores inician la secreción de enzimas proteolíticas que degradan las proteínas de la membrana basal, así como inhibidores que limitan la acción de estas enzimas potencialmente dañinas. El otro efecto marcado de los factores angiogénicos es causar que las células endoteliales migren y se dividan. Las células endoteliales que están unidas a la membrana basal, que forma una lámina continua alrededor de los vasos sanguíneos sobre el lado contraluminal, no experimentan mitosis. El efecto combinado de la pérdida de unión y señales de los receptores para factores angiogénicos es causar que las células endoteliales se muevan, multipliquen y reorganicen por sí mismas y por último sinteticen una membrana basal alrededor de los nuevos vasos. La angiogénesis es importante en el crecimiento y la remodelación de tejidos, incluyendo la cicatrización de heridas y procesos inflamatorios. La inhibición de la angiogénesis también se considera una estrategia prometedora para terapia antitumoral. Las transformaciones que acompañan a la angiogénesis también son muy prometedoras para el diagnóstico, siendo un ejemplo obvio una enfermedad maligna, pero el concepto también es muy prometedor en la inflamación y una diversidad de enfermedades relacionadas con inflamación, incluyendo aterosclerosis, siendo los macrófagos de las lesiones arterioscleróticas tempranas fuentes potenciales de lesiones de factores angiogénicos. Estos factores también están implicados en la revascularización de partes del miocardio con infarto, que sucede si se desata una estenosis en poco tiempo.

A continuación se muestran ejemplos adicionales de afecciones no deseadas que están asociadas con neovascularización o angiogénesis, el desarrollo o proliferación de nuevos vasos sanguíneos. También se hace referencia a este respecto al documento WO 98/47541.

Las enfermedades e indicaciones asociadas con angiogénesis son, por ejemplo, diferentes formas de cáncer y metástasis, por ejemplo, cáncer de mama, de piel, colorrectal, pancreático, prostático, pulmonar u ovárico.

Otras enfermedades e indicaciones son inflamación (por ejemplo, crónica), aterosclerosis, artritis reumatoide y gingivitis.

Son enfermedades e indicaciones adicionales asociadas con la angiogénesis malformaciones arteriovenosas, astrocitomas, coriocarcinomas, glioblastomas, gliomas, hemangiomas (de la infancia, capilares), hepatomas, endometrio hiperplásico, miocardio isquémico, endometriosis, sarcoma de Kaposi, melanoma, neuroblastomas, arteriopatía periférica obstructiva, artrosis, psoriasis, retinopatía (diabética, proliferativa), esclerodermia, seminomas y colitis ulcerosa.

La angiogénesis implica receptores que son únicos para las células endoteliales y tejidos circundantes. Estos marcadores incluyen receptores del factor de crecimiento tales como VEGF y la familia de receptores de Integrina. Los estudios inmunohistoquímicos han demostrado que una diversidad de integrinas, quizás de forma más importante la clase αv, se expresan en la superficie apical de los vasos sanguíneos [Conforti, G., y col. (1992) Blood

80: 37-446] y están disponibles para direccionamiento por ligandos circulantes [Pasqualini, R., y col. (1997) Nature Biotechnology 15: 542-546]. El α5β1 también es una integrina importante para promover el ensamblaje de la matriz de fibronectina e iniciar la unión de células a fribronectina. También desempeña un papel crucial en la migración celular.

La integrina αvβ3 es uno de los receptores que se sabe que están asociados con la angiogénesis. Las células endoteliales estimuladas parecen depender de este receptor para su supervivencia durante un periodo crítico del proceso angiogénico, ya que antagonistas de la interacción del receptor de integrina αvβ3/ligando inducen apoptosis e inhiben el crecimiento de vasos sanguíneos.

Las integrinas son moléculas heterodiméricas en las que las subunidades α y β penetran la bicapa lipídica de membrana celular. La subunidad α tiene cuatro dominios de unión a Ca2+ en su cadena extracelular y la subunidad β tiene varios dominios ricos en cisteína extracelular.

Muchos ligandos (por ejemplo, fibronectina) implicados en la adhesión celular contienen la secuencia tripeptídica de arginina-glicina-ácido aspártico (RGD). La secuencia RGD parece actuar como un sitio de reconocimiento primario entre los ligandos que presentan esta secuencia y receptores en la superficie de las células. Generalmente se cree que las interacciones secundarias entre el ligando y el receptor aumentan la especificidad de la interacción. Estas interacciones secundarias podrían tener lugar entre restos del ligando y receptor que sean inmediatamente adyacentes a la secuencia RGD o en sitios que sean distantes de la secuencia RGD.

Se sabe que los péptidos RGD se unen a una variedad de receptores de integrina y tienen el potencial de regular varios acontecimientos celulares de aplicación significativa en el entorno clínico. Quizás el efecto más ampliamente estudiado de los péptidos RGD y miméticos de los mismos se refiere a su uso como agentes antitrombóticos que se dirigen a la integrina de plaquetas GpIIbIIIa.

La inhibición de la angiogénesis en tejidos por administración de un antagonista de αvβ3º αvβ5 se ha descrito por ejemplo en los documentos WO97/06791 y WO95/25543 usando anticuerpos o péptidos que contienen RGD. El documento EP 578083 describe una serie de péptidos que contienen RGD monocíclicos.

Los péptidos RGD cíclicos contienen múltiples puentes que también se han descrito en los documentos WO98/54347 y WO95/14714.

Se encuentran ejemplos adicionales de compuestos basados en péptidos que comprenden RGD en los documentos WO01/77145, WO02/26776 y WO03/006491.

Existe la necesidad clínica de desarrollar técnicas de formación de imagen no invasivas más específicas para enfermedades relacionadas con angiogénesis. Dichas técnicas de formación de imágenes tendrán un papel central en la evaluación de nuevas terapias anti-angiogénicas. Pudiendo evaluar el nivel real de angiogénesis será de beneficio clínico en el diagnóstico de enfermedades relacionadas con angiogénesis en una fase temprana. Actualmente se ha descubierto sorprendentemente que la formación de imágenes ópticas puede usarse para evaluar el nivel de angiogénesis y la invención proporciona nuevos agentes de contraste de formación de imágenes ópticas para este fin.

Sumario de la invención

En vista de las necesidades de la técnica la presente invención proporciona compuestos basados en péptidos marcados con fluoresceína para su uso como agentes de contraste en la formación de imágenes ópticas o para tratamiento terapéutico. La formación de imágenes y direccionamiento eficaz de receptores de integrina asociados con la angiogénesis in vivo demanda un vector basado en RGD selectivo de alta afinidad que sea químicamente robusto y estable. Además, la ruta de excreción es un factor importante cuando se diseñan agentes de formación de imágenes para reducir los problemas con interferencias de fondo. Estas condiciones rigurosas se cumplen por los compuestos peptídicos marcados con fluoresceína descritos en la presente invención.

Descripción detallada de la invención

Visto desde un aspecto la invención proporciona nuevos compuestos basados en péptidos... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto que comprende un vector peptídico y al menos un colorante de fluoresceína, en el que dicho compuesto se selecciona de una de las fórmulas:

**(Ver fórmula)**

5 (III)

**(Ver fórmula)**

(IV)

(V)

**(Ver fórmula)**

en las que:

Ra representa -(CH2)n -o -(CH2)n-C6H4-que forma un puente con X2, X4 o X6, en las que

n representa un número entero positivo de 1 a 10,

X1 representa un enlace ó 1, 2, 3, 4 ó 5 restos aminoacídicos, en el que un resto aminoacídico está 15 opcionalmente funcionalizado con un resto espaciador, o dicho resto aminoacídico posee una cadena lateral

funcional, tal como un grupo ácido o amina,

X2, X4 y X6 representan restos aminoacídicos que pueden formar un enlace disulfuro o tioéter,

X3 representa arginina,

G representa glicina, 20 D representa ácido aspártico,

X5 representa un aminoácido hidrófobo; y

X7 representa un resto espaciador o biomodificador o está ausente, y

W1 es un resto espaciador o está ausente,

h es un número entero positivo 1 ó 2 y en el que al menos uno de los grupos Z que está presente representa un 25 colorante de fluoresceína;

o una sal fisiológicamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto de fórmula III, de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Ra representa –(CH2)-.

3. Un compuesto de fórmula III, de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2m en el que X1 representando un resto

aminoacído con una cadena lateral funcional, tal como un grupo ácido o amina, seleccionándose el aminoácido de 30 ácido aspártico, lisina, ácido glutámico, homolisina o ácido diaminoalicílico.

4. Un compuesto de fórmula III, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que X2, X4 y X6 representan independientemente un resto de cisteína o de homocisteína.

5. Un compuesto de fórmula III, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que X5 representa fenilalanina, tirosina, una 3-yodo-tirosina o naftilalanina.

6. Un compuesto de fórmula III, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que X7 comprende 1-10 unidades de un componente básico PEG monodisperso o está ausente.

5 7. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, junto con uno o más adyuvantes, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

8. Compuestos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para usar como agente de contraste de formación de imágenes ópticas.

10 9. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la fabricación de un agente de contraste de formación de imágenes ópticas para usar en un procedimiento de diagnóstico que implique administrar dicho agente de contraste a un cuerpo humano o animal y generar una imagen de al menos parte de dicho cuerpo.

10. Un procedimiento de generación de imágenes de un cuerpo humano o animal por formación de imágenes ópticas que implica generar una imagen de al menos una parte de dicho cuerpo en el que se ha distribuido un agente de contraste previamente administrado, caracterizado porque dicho agente de contraste comprende un compuesto reivindicado en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.